目的:本實驗通過硫代乙酰胺（TAA）建立急性肝損傷（ALI）大鼠模型,觀察復(fù)合益生菌制劑（枯草桿菌二聯(lián)活菌腸溶膠囊LCBE）對急性肝損傷的防治作用,利用16S rDNA擴(kuò)增子測序檢測糞便腸道菌群變化、液相色譜質(zhì)譜法檢測血清代謝組學(xué)變化,并進(jìn)行關(guān)聯(lián)性分析,分析防治機(jī)制,為其治療急性肝損傷提供理論依據(jù)。方法:將36只雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組（Nor）、ALI組（TAA）、干預(yù)組（TAA+LCBE）,每組12只。ALI組及干預(yù)組分別以200mg/kg體重劑量的TAA于實驗第6、7天對大鼠行腹腔注射制備ALI模型,對照組給予等量生理鹽水腹腔注射。同時,干預(yù)組從實驗第1天至實驗結(jié)束,給予200mg/kg體重劑量的LCBE灌胃,每天一次,其余兩組給予等量生理鹽水灌胃,共8天。第9天隔夜禁食后,麻醉狀態(tài)下腹主動脈取血,應(yīng)用ELISA法檢測ALT、ALB、TBIL反映肝功能,檢測D-乳酸反映腸屏障,應(yīng)用液相色譜質(zhì)譜法檢測血清代謝組學(xué)變化及KEGG富集分析;留取大鼠肝臟行HE染色;同時無菌操作下留取結(jié)腸遠(yuǎn)端新鮮糞便行16SrDNA擴(kuò)增子測序檢測腸道菌群變化。并采用Pearson統(tǒng)計學(xué)方法對差異菌群... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

動物實驗設(shè)計

山西醫(yī)科大學(xué)（博）碩士學(xué)位論文72結(jié)果2.1肝功能變化ALI組較對照組ALT、TBIL顯著升高，ALB顯著下降（P＜0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。干預(yù)組較ALI組ALT、TBIL有下降趨勢，ALB有升高趨勢（P＞0.05），無顯著差異。（表2-1）。表2-1各組大鼠肝功能變化（注：*表示與對照組比較P＜0.05）2.2腸道屏障功能變化以D-乳酸反映腸屏障功能，對照組、ALI組、干預(yù)組的D-乳酸水平分別為72.51±14.13ng/ml、137.23±25.33ng/ml、89.38±6.72ng/ml。其中，ALI組較對照組D-乳酸顯著升高（P＜0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。經(jīng)LCBE治療后顯著降低（P＜0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。（圖2-1）圖2-1各組大鼠D-乳酸變化直方圖（注：*表示兩組對比P＜0.05）2.3肝臟HE染色病理變化對照組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝竇結(jié)構(gòu)清晰，可見匯管區(qū)，肝板及肝血竇圍繞中央靜脈向周圍放射狀排列。與對照組相比，ALI組肝板結(jié)構(gòu)破壞，部分區(qū)域肝細(xì)胞可組別ALT(U/L)白蛋白（g/l）總膽紅素（umol/l）對照組49.82±10.2335.23±1.865.91±3.38ALI組136.22±20.45*30.25±1.55*14.47±3.22*干預(yù)組124.1±15.7133.41±0.9510.94±4.37

山西醫(yī)科大學(xué)（博）碩士學(xué)位論文8見氣球樣變、點(diǎn)狀及嗜酸性壞死，肝血竇擴(kuò)張，炎細(xì)胞浸潤。而干預(yù)組肝小葉匯管區(qū)少量炎細(xì)胞浸潤，中央靜脈輕度擴(kuò)張淤血，周圍有少量肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死。（圖2-2）對照組ALI組干預(yù)組圖2-2各組大鼠肝臟HE染色（×100）2.4大鼠腸道菌群16SrDNA擴(kuò)增子測序結(jié)果基于IonS5TMXL測序平臺，利用單端測序的方法，研究三組大鼠模型腸道菌群的變化。通過對Reads剪切過濾、質(zhì)控、OTUs（OperationalTaxonomicUnits）聚類及與Silva132數(shù)據(jù)庫進(jìn)行物種注釋，依據(jù)97%相似度水平共劃分為1285個OTUs、23種菌門以及225種菌屬。繪制各組OTU數(shù)目分布的韋恩（Venn）圖，可以比較直觀的表現(xiàn)樣本的OTU數(shù)目組成的相似性及重疊情況。如圖2-3所示，有694個OTU在三組樣本中都有分布，另外有119個OTU在干預(yù)組和對照組樣本中都有分布，有84個OTU在干預(yù)組和ALI組樣本中都有分布，有111個OTU在對照組和ALI組樣本中都有分布，即三組樣本具有較高的相似性。另外，有51個OTU為干預(yù)組獨(dú)有，68個OTU僅在對照組中分布，158個OTU僅在ALI組中分布，提示三組間物種分布存在差異性。進(jìn)一步行Alpha多樣性分析研究組內(nèi)樣本的物種豐富性和均一性，利用MetaStat方法進(jìn)行差異物種分析探究組間群落結(jié)構(gòu)差異性。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]枯草桿菌二聯(lián)活菌腸溶膠囊聯(lián)合常規(guī)保肝治療急性肝損傷的療效及衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)學(xué)評價[J]. 陳耀明,施楊利,周柳柳.  中國醫(yī)藥導(dǎo)刊. 2019(01)
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本文編號：3063667