目的:顳下頜關節(jié)骨關節(jié)炎（TMJ OA）是與炎癥和氧化應激相關的復雜的多因素疾病。姜黃素被報道具有明顯的抗炎抗氧化特性。因此,本實驗的目的在于研究姜黃素在顳下頜關節(jié)軟骨細胞中的抗炎抗氧化機制。方法:采用CCK-8檢測法檢測姜黃素相應濃度對于TMJ軟骨細胞的細胞毒性并篩選藥物濃度。使用RT-PCR和Western blot法檢測經過姜黃素治療和未經姜黃素治療的人原代TMJ軟骨細胞中的相關基因表達水平來評估姜黃素體外抗炎能力。通過評估抗氧化劑相關基因的表達和活性氧水平來研究氧化應激。并在特異性敲除Nrf2基因后,對姜黃素的治療效果進行驗證。在關節(jié)內注射CFA誘導大鼠顳下頜關節(jié)炎癥并用姜黃素治療后,通過番紅-固綠染色評估軟骨的破壞,進行Nrf2及炎癥因子COX-2,iNOS和IL-1β及基質降解酶MMP-9和MMP-13的免疫組織化學染色用于評估姜黃素在體內的抗炎抗氧化作用。結果:IL-1β誘導的炎癥因子COX-2,iNOS和IL-1β以及基質降解酶MMP-1,MMP-3,MMP-9,MMP-13,ADAMTS-4和ADAMTS-5的表達被姜黃素明顯抑制,同時IL-1β誘導的軟骨合成代謝因子... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數】：67 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

軟骨細胞形態(tài)及姜黃素的化學結構式、細胞毒性Figure1.ChondrocytemorphologyandChemicalstructureandcytotoxicityofCUR

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文18圖2.姜黃素抑制IL-1β誘導的炎癥因子的表達Figure2.Curcumin(CUR)inhibitsIL-1β-inducedinflammatoryfactorsexpression使用姜黃素（0uM、0uM、20uM、40uM）預處理軟骨細胞2小時，進一步用（0ng/mL、10ng/mL、10ng/mL、10ng/mL）IL-1β處理細胞24小時，收集RNA及蛋白質。A.對COX-2、iNOS和IL-6的mRNA水平使用PCR檢測。B.COX-2和iNOS蛋白的表達情況。C.對B圖進行半定量分析。結果以百分比表示。*表示vsIL-1β誘導組。*P<0.05，***P<0.001和****P<0.0001。2.3姜黃素抑制IL-1β誘導的TMJ軟骨細胞中基質降解蛋白酶的表達基質降解蛋白酶如聚集蛋白聚糖酶和金屬蛋白酶的激活是細胞外基質降解的重要因素，且是OA的重要病理機制。實驗結果（圖3A）顯示，TMJ軟骨細胞中MMP-1，MMP-3，MMP-9，MMP-13，ADAMTS-4和ADAMTS-5的mRNA水平受IL-1β刺激而上調，而這些因子的表達明顯被姜黃素抑制。同時，WB分析結果（圖3B-C）顯示，姜黃素在蛋白水平上同樣抑制IL-1β對軟骨細胞內MMP-1，MMP-3，MMP-9和MMP-13蛋白表達的誘導。因此，上述結果提示姜黃素能減少TMJ炎性軟骨的EMC降解。

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文19圖3.姜黃素抑制IL-1β誘導的基質降解蛋白酶的表達Figure3.Curcumin(CUR)inhibitsIL-1β-inducedmatrixdegradingproteaseexpression使用姜黃素（0uM、0uM、20uM、40uM）預處理軟骨細胞2小時，進一步用（0ng/mL、10ng/mL、10ng/mL、10ng/mL）IL-1β處理細胞24小時，收集RNA及蛋白質。A.通過定量PCR測量MMP-1，MMP-3，MMP-9，MMP-13，ADAMTS-4和ADAMTS-5的mRNA表達。B.MMP-1，MMP-3，MMP-9，MMP-13蛋白的表達情況。C.對B圖進行半定量分析。*表示vsIL-1β誘導組。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001和****P<0.0001。2.4姜黃素減弱了IL-1β對TMJ軟骨細胞中COL2A1和ACAN表達的抑制作用我們進一步研究了姜黃素是否可以增加IL-1β誘導的TMJ軟骨細胞中COL2A1和ACANmRNA的表達。實驗結果（圖4）顯示，IL-1β刺激TMJ軟骨細胞明顯降低了細胞中COL2A1和ACANmRNA水平。然而，IL-1β對COL2A1和ACANmRNA的降低作用受姜黃素抑制。這些實驗結果表明，姜黃素可以在病理條件下上調軟骨合成代謝因子COL2A1和ACAN的表達來保護軟骨。


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