發(fā)布時(shí)間：2021-02-27 20:42

　　目的:顳下頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎（TMJ OA）是與炎癥和氧化應(yīng)激相關(guān)的復(fù)雜的多因素疾病。姜黃素被報(bào)道具有明顯的抗炎抗氧化特性。因此,本實(shí)驗(yàn)的目的在于研究姜黃素在顳下頜關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中的抗炎抗氧化機(jī)制。方法:采用CCK-8檢測(cè)法檢測(cè)姜黃素相應(yīng)濃度對(duì)于TMJ軟骨細(xì)胞的細(xì)胞毒性并篩選藥物濃度。使用RT-PCR和Western blot法檢測(cè)經(jīng)過姜黃素治療和未經(jīng)姜黃素治療的人原代TMJ軟骨細(xì)胞中的相關(guān)基因表達(dá)水平來評(píng)估姜黃素體外抗炎能力。通過評(píng)估抗氧化劑相關(guān)基因的表達(dá)和活性氧水平來研究氧化應(yīng)激。并在特異性敲除Nrf2基因后,對(duì)姜黃素的治療效果進(jìn)行驗(yàn)證。在關(guān)節(jié)內(nèi)注射CFA誘導(dǎo)大鼠顳下頜關(guān)節(jié)炎癥并用姜黃素治療后,通過番紅-固綠染色評(píng)估軟骨的破壞,進(jìn)行Nrf2及炎癥因子COX-2,iNOS和IL-1β及基質(zhì)降解酶MMP-9和MMP-13的免疫組織化學(xué)染色用于評(píng)估姜黃素在體內(nèi)的抗炎抗氧化作用。結(jié)果:IL-1β誘導(dǎo)的炎癥因子COX-2,iNOS和IL-1β以及基質(zhì)降解酶MMP-1,MMP-3,MMP-9,MMP-13,ADAMTS-4和ADAMTS-5的表達(dá)被姜黃素明顯抑制,同時(shí)IL-1β誘導(dǎo)的軟骨合成代謝因子... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

軟骨細(xì)胞形態(tài)及姜黃素的化學(xué)結(jié)構(gòu)式、細(xì)胞毒性Figure1.ChondrocytemorphologyandChemicalstructureandcytotoxicityofCUR

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文18圖2.姜黃素抑制IL-1β誘導(dǎo)的炎癥因子的表達(dá)Figure2.Curcumin(CUR)inhibitsIL-1β-inducedinflammatoryfactorsexpression使用姜黃素（0uM、0uM、20uM、40uM）預(yù)處理軟骨細(xì)胞2小時(shí)，進(jìn)一步用（0ng/mL、10ng/mL、10ng/mL、10ng/mL）IL-1β處理細(xì)胞24小時(shí)，收集RNA及蛋白質(zhì)。A.對(duì)COX-2、iNOS和IL-6的mRNA水平使用PCR檢測(cè)。B.COX-2和iNOS蛋白的表達(dá)情況。C.對(duì)B圖進(jìn)行半定量分析。結(jié)果以百分比表示。*表示vsIL-1β誘導(dǎo)組。*P<0.05，***P<0.001和****P<0.0001。2.3姜黃素抑制IL-1β誘導(dǎo)的TMJ軟骨細(xì)胞中基質(zhì)降解蛋白酶的表達(dá)基質(zhì)降解蛋白酶如聚集蛋白聚糖酶和金屬蛋白酶的激活是細(xì)胞外基質(zhì)降解的重要因素，且是OA的重要病理機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果（圖3A）顯示，TMJ軟骨細(xì)胞中MMP-1，MMP-3，MMP-9，MMP-13，ADAMTS-4和ADAMTS-5的mRNA水平受IL-1β刺激而上調(diào)，而這些因子的表達(dá)明顯被姜黃素抑制。同時(shí)，WB分析結(jié)果（圖3B-C）顯示，姜黃素在蛋白水平上同樣抑制IL-1β對(duì)軟骨細(xì)胞內(nèi)MMP-1，MMP-3，MMP-9和MMP-13蛋白表達(dá)的誘導(dǎo)。因此，上述結(jié)果提示姜黃素能減少TMJ炎性軟骨的EMC降解。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文19圖3.姜黃素抑制IL-1β誘導(dǎo)的基質(zhì)降解蛋白酶的表達(dá)Figure3.Curcumin(CUR)inhibitsIL-1β-inducedmatrixdegradingproteaseexpression使用姜黃素（0uM、0uM、20uM、40uM）預(yù)處理軟骨細(xì)胞2小時(shí)，進(jìn)一步用（0ng/mL、10ng/mL、10ng/mL、10ng/mL）IL-1β處理細(xì)胞24小時(shí)，收集RNA及蛋白質(zhì)。A.通過定量PCR測(cè)量MMP-1，MMP-3，MMP-9，MMP-13，ADAMTS-4和ADAMTS-5的mRNA表達(dá)。B.MMP-1，MMP-3，MMP-9，MMP-13蛋白的表達(dá)情況。C.對(duì)B圖進(jìn)行半定量分析。*表示vsIL-1β誘導(dǎo)組。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001和****P<0.0001。2.4姜黃素減弱了IL-1β對(duì)TMJ軟骨細(xì)胞中COL2A1和ACAN表達(dá)的抑制作用我們進(jìn)一步研究了姜黃素是否可以增加IL-1β誘導(dǎo)的TMJ軟骨細(xì)胞中COL2A1和ACANmRNA的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果（圖4）顯示，IL-1β刺激TMJ軟骨細(xì)胞明顯降低了細(xì)胞中COL2A1和ACANmRNA水平。然而，IL-1β對(duì)COL2A1和ACANmRNA的降低作用受姜黃素抑制。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，姜黃素可以在病理?xiàng)l件下上調(diào)軟骨合成代謝因子COL2A1和ACAN的表達(dá)來保護(hù)軟骨。


本文編號(hào)：3054776