乳腺癌是威脅全球女性健康的惡性腫瘤之一,其中乳腺癌轉(zhuǎn)移是導致乳腺癌致死率升高的主要原因。因此,研究乳腺癌轉(zhuǎn)移的分子機制以及在此基礎(chǔ)上尋找抑制該過程的小分子藥物成為乳腺癌治療中的一個關(guān)鍵性問題。研究表明USP14影響腫瘤發(fā)生發(fā)展的眾多方面,但目前其對乳腺癌侵襲遷移的研究甚少。上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial to mesenchymal transition,EMT）為腫瘤的轉(zhuǎn)移侵襲提供了基礎(chǔ),而E-鈣黏蛋白（E-cadherin）下調(diào)是EMT的標志。本課題中,我們首先發(fā)現(xiàn)敲低USP14蛋白的表達和使用USP14特異性抑制劑處理均導致乳腺癌細胞遷移和侵襲能力明顯降低;然后,我們通過細胞形態(tài)學實驗以及檢測EMT相關(guān)標志物的表達發(fā)現(xiàn)敲低USP14可顯著抑制乳腺癌細胞的EMT過程;通過Western Blot技術(shù)明確USP14通過調(diào)控E-cadherin的表達從而影響乳腺癌細胞的遷移和侵襲能力。最后,基于USP14去泛素化酶的特性,我們采用免疫共沉淀技術(shù)檢測了USP14對E-cadherin泛素化水平的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),敲低或使用特異性抑制劑抑制USP14功能后E-cadherin的K63泛... 

【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

去泛素化酶USP14在乳腺癌細胞中呈高表達

第2章USP14對乳腺癌細胞遷移、侵襲能力的影響16圖2.2敲低USP14的表達抑制乳腺癌細胞的遷移和侵襲A，B、在乳腺癌細胞MDA-MB-231和MCF-7中，轉(zhuǎn)染USP14特異性的siRNA。48小時后進行細胞劃痕實驗：每隔12小時用顯微鏡拍照觀察劃痕愈合情況（左圖）。利用ImageJ軟件在每張圖中選取五個不同的位置測量劃痕寬度，而后用GraphPadPrism軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析（右圖）。C、在MDA-MB-231細胞中，轉(zhuǎn)染USP14特異性的siRNA，48小時后進行Transwell實驗：消化細胞、細胞計數(shù)、鋪到小室中（5×104個/孔），12小時后對小室進行收樣、拍照（左圖），對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析（右圖）。D、在MDA-MB-231細胞中，轉(zhuǎn)染USP14的siRNA，48小時后進行基質(zhì)膠侵襲實驗：細胞消化、計數(shù)、鋪Matrigel膠、鋪細胞（5×104個/孔），12小時后收樣、拍照（左圖），對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析（右圖）。E，F(xiàn)、免疫印記實驗檢測MDA-MB-231、MCF-7細胞USP14蛋白表達的干擾效果。

第2章USP14對乳腺癌細胞遷移、侵襲能力的影響18圖2.3IU1處理抑制乳腺癌細胞的遷移和侵襲A，B、在MDA-MB-231和MCF-7細胞中加入IU1抑制劑處理細胞，48小時后進行劃痕處理，12小時后在顯微鏡下觀察劃痕、拍照（上圖），進行統(tǒng)計分析（下圖）。C，D、在MDA-MB-231和MCF-7細胞中加入IU1，處理48小時后進行Transwell實驗，12小時后收樣、拍照（上圖），進行統(tǒng)計分析（下圖）。E，F(xiàn)、在MDA-MB-231和MCF-7細胞中，加入IU1，處理48小時后進行基質(zhì)膠侵襲實驗，12小時后收樣、拍照（上圖），進行統(tǒng)計分析（下圖）。2.5討論USP14是細胞中重要的去泛素化酶，在多種惡性腫瘤中均為高表達[25-33]。在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中，細胞遷移是十分重要的生命現(xiàn)象，本部分我們首先通過蛋白質(zhì)免疫印跡實驗在乳腺癌細胞系中檢測了USP14的蛋白表達水平，我們的研究結(jié)果表明，同其它惡性腫瘤一致，同正常乳腺上皮細胞相比，USP14在乳腺癌細胞中表達升高，這提示我們USP14可能與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。轉(zhuǎn)移是腫瘤細胞主要的基本特征，我們又通過細胞劃痕愈合實驗、Transwell小室遷移實驗以及Matrigel基質(zhì)膠侵襲實驗檢測了USP14對乳腺癌細胞遷移能力的影響。在我們的研究中發(fā)現(xiàn)，敲低USP14后，乳腺癌細胞的劃痕愈合能力、遷移和侵襲能力都受到明顯抑制，說明USP14對乳腺癌細胞的遷移、侵襲功能具有顯著影響。此外，我們采用USP14特異性抑制劑IU1處理后得到同樣的結(jié)果，USP14活性被抑制后乳腺癌細胞的遷移能力同樣受到阻滯，進一步說明USP14對乳腺癌細胞的遷移侵襲功能具有重要作用。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3016638