白念珠菌是人類最常見的條件性真菌病原體。在大多數(shù)免疫系統(tǒng)正常的人體中,白念珠菌是一種無害的共生體,但在免疫能力低下的人體中主要通過酵母-菌絲形態(tài)的轉(zhuǎn)換導(dǎo)致白念珠菌迅速增殖并引起感染。臨床上可用于治療白念珠菌感染的抗真菌藥物有限,長(zhǎng)期重復(fù)使用這些抗真菌藥物導(dǎo)致白念珠菌耐藥現(xiàn)象越來越嚴(yán)重,迫切需要開發(fā)新型的抗真菌藥物。本論文通過氨基酸序列相似性比對(duì),在白念珠菌中發(fā)現(xiàn)了與釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae,Sc）中編碼鈣聯(lián)蛋白的ScCNE1同源的基因CaCNE1。ScCNE1在釀酒酵母細(xì)胞中編碼的鈣聯(lián)蛋白是一種分子伴侶,幫助糖蛋白折疊、組裝,并起到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)質(zhì)量控制的作用。但CaCNE1的功能目前還不清楚。本文采用同源重組的原理敲除白念珠菌CaCNE1,成功構(gòu)建CaCNE1缺陷型菌株。通過抗真菌藥物表型試驗(yàn)、細(xì)胞壁組分測(cè)定試驗(yàn)、菌絲發(fā)育試驗(yàn)和對(duì)小鼠的毒力試驗(yàn)等研究CaCNE1在白念珠菌在應(yīng)答藥物壓力、細(xì)胞壁組分、菌絲發(fā)育、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能和毒力等方面的影響。我們得出以下結(jié)論:1)白念珠菌CaCNE1缺失后對(duì)氟康唑、酮康唑、伊曲康唑、剛果紅、熒光增白劑、環(huán)孢菌素A、衣霉素、潮霉素... 

【文章來源】：淮北師范大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

白念珠菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)[42]

白念珠菌CaCNE1功能的研究7的手段[51-52]。圖1-2Cas9基因敲除原理[51]Fig.1-2Cas9knockdownschematic[51].1.8本課題的研究?jī)?nèi)容與意義白念珠菌被廣泛地認(rèn)為是最具致病力的念珠菌種，人體正常菌群的平衡或免疫防御系統(tǒng)被破壞，會(huì)導(dǎo)致從淺表粘膜感染至高死亡率的全身系統(tǒng)性感染。這種條件病原菌是如何從共生菌株轉(zhuǎn)變?yōu)椴≡�，一直都是一個(gè)難題。藥物種類少、耐藥性嚴(yán)重等問題的存在使開發(fā)新型抗真菌藥物變的越來越急迫。本論文通過氨基酸序列相似性比對(duì)，發(fā)現(xiàn)了白念珠菌中與釀酒酵母編碼鈣聯(lián)蛋白ScCne1同源的CaCNE1，推測(cè)CaCNE1編碼白念珠菌的鈣聯(lián)蛋白，鈣聯(lián)蛋白是一種分子伴侶，可能參與蛋白質(zhì)的折疊、組裝。但CaCNE1的功能目前還不清楚，所以我們選取了CaCNE1作為本論文的研究對(duì)象。本實(shí)驗(yàn)利用同源重組的原理敲除CaCNE1，構(gòu)建CaCNE1缺陷型菌株，進(jìn)行了抗真菌藥物表型試驗(yàn)、細(xì)胞壁組分測(cè)定試驗(yàn)、菌絲發(fā)育試驗(yàn)和對(duì)小鼠的毒力試驗(yàn)等研究CaCNE1在白念珠菌對(duì)應(yīng)答藥物壓力、細(xì)胞壁組分、菌絲發(fā)育、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能和毒力等方面的影響，初步揭示CaCNE1的功能，為開發(fā)新型的抗真菌藥物新思路。

白念珠菌CaCNE1功能的研究19表2-11表型篩選所用藥物Table.2-11Drμgsofphenotypescreen注：Flu：氟康唑，SDS：十二烷基磺酸鈉，CR：剛果紅，VK3：維生素K3，ITZ：伊曲康唑，KCZ：酮康唑，CFW：熒光增白劑，CSA：環(huán)孢菌素A，Teb：特比萘芬，TM：衣霉素圖2-1固體平板表型菌液濃度梯度Fig.2-1Concentrationgradientsofcultureinsolidplatephenotype2.2.9菌絲發(fā)育分析（1）液體菌絲實(shí)驗(yàn)：在超凈工作臺(tái)中挑取SN76+CIp10、Cacne1/Cacne1+CIp10和Cacne1/Cacne1+CIp10-CaCNE1單菌落，接種到SD-Ura液體培養(yǎng)基試管中，30℃搖床過夜培養(yǎng)。震蕩搖勻，吸取600μL菌液加入到5.4mLYPD+10%FBS液體培養(yǎng)基中，37℃搖床培養(yǎng)。在1.5h和3h時(shí)分別取樣，5000rpm，3min，吸盡上清，顯微鏡觀察。（2）固體菌絲實(shí)驗(yàn)：在超凈工作臺(tái)中挑取SN76+CIp10、Cacne1/Cacne1+CIp10和Cacne1/Cacne1+CIp10-CaCNE1單菌落，接種到SD-Ura液體培養(yǎng)基試管中，30℃搖床過夜培養(yǎng)。倍比稀釋菌液，吸取100μL10-7的菌液涂布到Y(jié)PD+10%FBS固體平板上，37℃培養(yǎng)3-7d，觀察菌落形態(tài)。藥物濃度藥物濃度CaCl20.4、0.6、0.8mol·L-1KCZ0.25、0.5μg·mL-1Flu1.25、2.5μg·mL-1CFW50、100μg·mL-1SDS0.02%、0.04%CSA6.25、12.5μg·mL-1CR50、100μg·mL-1Teb10、20μg·mL-1VK340、80、160μg·mL-1ITZ0.25、0.5μg·mL-1TM5、7.5、10μg·mL-1

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]白念珠菌耐藥機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 王航,閻瀾.  中國(guó)真菌學(xué)雜志. 2018(05)
[2]白念珠菌細(xì)胞內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)和鈣離子/鈣調(diào)磷酸酯酶信號(hào)途徑的調(diào)控機(jī)理研究進(jìn)展[J]. 徐大勇,蔣伶活.  中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2016(05)

博士論文
[1]中國(guó)多中心侵襲性感染光滑念珠菌復(fù)合體流行病學(xué)及棘白菌素耐藥機(jī)制研究[D]. 侯欣.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2019
[2]ADH1基因與白念珠菌耐藥性和致病力的相關(guān)性研究[D]. 宋延君.暨南大學(xué) 2017
[3]鈣穩(wěn)態(tài)系統(tǒng)在白念珠菌形態(tài)發(fā)生及壓力應(yīng)答中的功能研究[D]. 喻其林.南開大學(xué) 2013

碩士論文
[1]白念珠菌orf19.1034功能的研究[D]. 王曼曼.淮北師范大學(xué) 2019
[2]外陰陰道念珠菌病致病菌的菌種分布、體外藥敏分析以及Candida Africana的分子鑒定[D]. 晏亮.中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué) 2018



本文編號(hào)：3010108