5-甲基胞嘧啶（5mC）廣泛存在于哺乳動物基因組DNA中。5mC在TET蛋白作用下可被氧化生成5-羥甲基胞嘧啶（5hmC）、5-甲�；奏ぃ�5fC）和5-羧基胞嘧啶（5caC）。其中,5mC和5hmC在哺乳動物胚胎發(fā)育、基因表達等方面發(fā)揮著重要的生物學功能。與此同時,這些DNA表觀遺傳修飾的異常改變與癌癥的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),可作為潛在的生物標志物。由于尿液取材方便,并且具有真正意義上無創(chuàng)傷性的優(yōu)點,尿液游離DNA在疾病診斷、預后等方面得到了較多的研究。但目前關(guān)于尿液中游離DNA表觀遺傳修飾方面的研究有限。尿液中游離DNA含量低,如何獲得足夠量、高純度的游離DNA依然充滿挑戰(zhàn)。本論文建立尿液游離DNA提取的新方法,并發(fā)展了其表觀修飾分析方法。首先,發(fā)展了基于石墨化碳材料提取尿液游離DNA的固相萃�。⊿PE）法。該方法操作簡便,樣品容量大,單個自制的SPE柱可應(yīng)用于200 mL尿液的提取。從80 mL的尿液中能夠提取得到21 ng的游離DNA。但目前條件下,該方法還不能夠完全的將雜質(zhì)與DNA分離開來,需要進一步探索。其次,以二氧化硅作為吸附材料,發(fā)展了提取尿液游離DNA的方法。該方法操... 

【文章來源】：江漢大學湖北省

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

尿液游離DNA兩種來源:泌尿系統(tǒng)細胞及穿過腎臟屏障的游離DNA[33]

表觀遺傳學是指在沒有DNA序列改變的情況下發(fā)生的遺傳性表型改變。其中DNA甲基化是被廣泛研究的表觀遺傳學改變之一。DNA甲基化修飾是表觀遺傳學中重要的調(diào)控基因表達方式之一,其存在于大多數(shù)生物體內(nèi),并且發(fā)揮著重要的生物學功能。DNA甲基化的發(fā)生是以S-腺苷基甲硫氨酸(SAM)為甲基供體,通過DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DMTA)的生物催化,將甲基基團轉(zhuǎn)移到DNA堿基的特定結(jié)構(gòu)上。DNA甲基化通常發(fā)生在胞嘧啶C5上形成5-甲基胞嘧啶(5mC),在生物體主動去甲基化的過程中(如圖1-2所示),5mC會被去甲基化轉(zhuǎn)移酶(TET家族蛋白)進一步氧化形成5-羥甲基胞嘧啶(5hmC)[1,2],5-醛基胞嘧啶(5fC),5-羧基胞嘧啶(5caC)[3]。除此之外,最近的一些研究在高等真核生物[67]以及人類基因組[68]中發(fā)現(xiàn)了普遍存在于原核生物中的甲基化修飾——N6-甲基腺嘌呤(6mA),其確切的生物學功能仍然處在初期探索階段。在生物體內(nèi),這些修飾都是處于動態(tài)變化的過程,并發(fā)揮著已知(未知)的生物學功能。下面將對發(fā)生在胞嘧啶上的DNA修飾進行簡要的介紹。1.4.1 5-甲基胞嘧啶

目前,已經(jīng)發(fā)展了較多的方法檢測DNA甲基化及其一系列的氧化產(chǎn)物。例如:免疫法、電化學法、微流控技術(shù)、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法、DNA測序技術(shù)等[79]。這些方法都有各自的優(yōu)、缺點。下面將對主要的一些檢測方法進行簡要的介紹。1.5.1 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)


本文編號：2994168