目的:侵襲性念珠菌�。╥nvasive candidiasis,IC）是一種臨床癥狀和體征不典型,且發(fā)病率和病死率逐年增高的感染性疾病。早期的診斷和治療有助于提高患者生存率并改善患者預后。本研究擬構建核酸序列依賴擴增（nucleic acid sequence-based amplification,NASBA）技術檢測念珠菌,用于快速診斷IC,并結合G試驗和血培養(yǎng)結果,確定實驗室診斷IC的最佳方案。方法:首先確定針對念珠菌屬18S rRNA的高度保守序列的引物,建立NASBA結合電泳檢測白色念珠菌標準株（ATCC14053）的方法,并對其靈敏度和特異性進行評估。然后,參照EORTC/MSG對侵襲性真菌病定義的標準,擬定IC陽性病例組和排除IC的陰性對照組的納入標準,收集并最終納入統(tǒng)計38例臨床樣本（病例組18例（確診15例,擬診3例）,對照組20例）,應用本研究構建的NASBA法進行檢測,收集所有病例的血培養(yǎng)和G試驗檢查結果,并計算三種方法的診斷性能參數(shù)。結果:NASBA產物電泳結果顯示臨床七種不同的念珠菌（白色念珠菌、熱帶念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、都柏林念珠菌、... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

NASBA法結合電泳檢測白色念珠菌的靈敏度評價Fig1.1SensitivityevaluationofNASBAcombinedwithelectrophoresisassayfordetecting

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文14圖1.1NASBA法結合電泳檢測白色念珠菌的靈敏度評價Fig1.1SensitivityevaluationofNASBAcombinedwithelectrophoresisassayfordetectingCandidaalbicans注：M為DL5000bpmarker，1-6分別為電泳檢測NASBA擴增105CFU/ml、104CFU/ml、103CFU/ml、102CFU/ml、101CFU/ml、1CFU/ml白色念珠菌的結果。3.2特異性評價如圖1.2和圖1.3所示，本次實驗建立的NASBA結合電泳法檢測7種不同念珠菌株呈陽性結果，而其他非念珠菌真菌及細菌均呈陰性結果。表明特異性良好。圖1.2念珠菌屬不同菌株經NASBA擴增后的電泳結果Fig1.2ElectrophoresisresultsofdifferentspeciesofCandidaamplifiedbyNASBA注：M為DL500bpmarker，1-7分別為電泳檢測NASBA擴增白色念株菌ATCC14053、近平滑念珠菌ATCC22019、克柔念珠菌ATCC6258、熱帶念珠菌（臨床分離菌株）、光滑念珠菌ATCC2950、都柏林念珠菌（臨床分離菌株）、季也蒙念珠菌（臨床分離菌株）的菌株RNA結果。

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文15圖1.3各種非念珠菌屬菌株經NASBA擴增后的電泳結果Fig1.3Electrophoresisresultsofvariousnon-CandidastrainsamplifiedbyNASBA注：M為DL1000bpmarker，1-9分別為電泳檢測NASBA擴增新型隱球菌（臨床分離菌株）、煙曲霉（ATCCMYA-3626）、金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希菌ATCC25922、銅綠假單胞菌（ATCC27853）、紋帶棒狀桿菌（臨床分離菌株）、艱難梭菌（ATCC43255）、新型隱球菌（臨床分離菌株）、煙曲霉（ATCCMYA-3626）的菌株RNA結果。4討論念珠菌是一種廣泛存在于自然界，同時也是寄居在人體最常見的真菌。一般認為，念珠菌是人體皮膚、口腔、陰道、胃腸道等與外界相通部位的正常菌群成員，不會導致深部器官或組織感染。當人體免疫力低下、生理屏障破壞、菌群失調時，念珠菌可侵入人體組織、器官、血液，導致IC的發(fā)生[3,28,29]。及時、準確診斷IC是指導臨床正確管理IC患者的關鍵。傳統(tǒng)的念珠菌培養(yǎng)法和組織病理學檢查存在檢驗周期長和敏感性低的缺陷，某些情況下還需對患者進行侵入性操作才能采集標本送檢。檢測血清標志物BDG在一定程度可降低檢驗周轉時間，達到早期、快速的診斷需求，但其診斷IC的假陽性問題突出，不能滿足臨床準確診斷IC的需求。分子檢測技術是診斷感染性疾病的發(fā)展方向，傳統(tǒng)PCR法存在復雜的熱變性過程，對儀器設備的精密程度要求較高，且存在外源性DNA污染的問題，盡管目前多種基于PCR的分子診斷技術被研發(fā)用于診斷IC，但尚無標準化操作程序[5]。NASBA技術相較于PCR技術的優(yōu)勢在于以單鏈RNA為模板，在AMV逆轉

【參考文獻】：
碩士論文
[1]核酸序列依賴擴增技術檢測侵襲性曲霉菌感染的實驗研究[D]. 王立朋.重慶醫(yī)科大學 2014
[2]基于NASBA技術檢測細菌耐藥性方法的建立[D]. 賀爾娜.寧波大學 2014



本文編號：2990319