目的:研究主穹窿蛋白（Major vault protein,MVP）表達對神經(jīng)元生理功能的影響,探討苯并芘（Benzo（a）pyrene,B[a]P）抑制MVP表達的可能原因,從DNA甲基化修飾入手研究MVP被抑制的可能原因,為B[a]P致神經(jīng)系統(tǒng)損傷機制研究提供理論基礎(chǔ)。方法:首先采用PC12細胞轉(zhuǎn)染MVP沉默病毒與過表達質(zhì)粒構(gòu)建MVP過表達與沉默體外模型,并運用Western blot與Real-time PCR驗證模型。隨后進行CCK8細胞活性與Hoechst凋亡染色檢測MVP的表達對PC12細胞活性和凋亡的影響。對構(gòu)建好的PC12細胞過表達與沉默模型再進行B[a]P染毒,并再次采取相同的實驗方法檢測MVP沉默與過表達質(zhì)粒后B[a]P染毒對PC12細胞活性與凋亡的影響。構(gòu)建B[a]P染毒體內(nèi)模型,選取20只3周齡大的雄性SD大鼠在適宜環(huán)境下培養(yǎng)一周后,隨機分為對照組與B[a]P染毒組（2.0mg/kg）,進行為期7周的灌胃染毒。染毒結(jié)束后,采用Morris水迷宮檢測大鼠的空間記憶學(xué)習(xí)能力,隨后進行HE染色和RBSS測序,對測序結(jié)果進行GO和KEGG分析,采用Real-time ... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

轉(zhuǎn)染后PC12細胞MVP的mRNA的表達;A：轉(zhuǎn)染病毒后，MVP的mRNA表

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文18圖1-1轉(zhuǎn)染后PC12細胞MVP的表達水平。A：轉(zhuǎn)染病毒后，MVP的表達；B：轉(zhuǎn)染病毒后，MVP的相對表達量；C：轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后，MVP蛋白的表達；D：轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后，MVP的相對表達量（*P<0.05,與Control-shRNA組或者與pLenti-Control組相比）。Figure1-1MVPexpressionlevelofPC12cellsaftertransfection.A:expressionofproteinaftertransfectionofvirus;B:relativeexpressionofproteinaftertransfectionofvirus;C:expressionofproteinaftertransfectionofplasmid;D:relativeexpressionofproteinaftertransfectionofplasmid(*P<0.05,comparedwithControl-shRNAgrouporpLenti-Controlgroup).圖1-2轉(zhuǎn)染后PC12細胞MVP的mRNA的表達;A：轉(zhuǎn)染病毒后，MVP的mRNA表達；B：轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后，MVP的mRNA表達；（*P<0.05,與Control-shRNA組或者與pLenti-Control組相比）Figure1-2MVPmRNAexpressionofPC12cellsaftertransfection;A:MVPmRNAexpressionaftervirustransfection;B:MVPmRNAexpressionafterplasmidtransfection;(*P<0.05,comparewithControl-shRNAgrouporpLenti-Controlgroup)

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文192.2MVP沉默與過表達后對PC12細胞活性和凋亡的影響PC12細胞轉(zhuǎn)染MVP沉默病毒與過表達質(zhì)粒后首先進行了CCK8細胞活性檢測，檢測MVP的表達與否對細胞的活性的影響，實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，分別轉(zhuǎn)染MVP沉默病毒與過表達質(zhì)粒96小時內(nèi)，MVP的表達與否對細胞的活性并無影響，如圖1-3所示。隨后對轉(zhuǎn)染后的細胞進行Hoechst凋亡染色，我們同樣發(fā)現(xiàn)MVP蛋白的表達與否對PC12細胞凋亡并無影響，如圖1-4所示。圖1-3轉(zhuǎn)染后PC12細胞活性檢測：A:轉(zhuǎn)染病毒4天的細胞活性檢測；B：轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后4天的細胞活性檢測。Figure1-3PC12cellviabilitytestaftertransfection:A:cellviabilitytest4daysaftertransfectionofvirus;B:cellviabilitytest4daysaftertransfectionofplasmid.圖1-4轉(zhuǎn)染后PC12細胞凋亡檢測。A、轉(zhuǎn)染病毒后代表性圖片，黃色箭頭指向凋亡細胞；B：轉(zhuǎn)染病毒后凋亡細胞的陽性計數(shù)；C：轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后代表性圖片，黃色箭頭指向凋亡細胞；D：轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后凋亡細胞的陽性計數(shù)。Figure1-4DetectionofPC12cellapoptosisaftertransfection.A.Representativepictures

【參考文獻】：
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博士論文
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本文編號：2988904