發(fā)布時(shí)間：2017-04-11 03:25

  本文關(guān)鍵詞：芍藥苷對(duì)大鼠小腦浦肯野細(xì)胞急性缺氧性電生理功能反應(yīng)的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：缺氧性腦損傷是導(dǎo)致急性期死亡和恢復(fù)期神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥的主要原因,可發(fā)生于新生兒圍產(chǎn)期窒息、心腦血管病、呼吸系統(tǒng)疾病、頭部創(chuàng)傷、高原反應(yīng)等多種疾病過程中,探索缺氧性腦損傷的病理生理機(jī)制及其有效治療藥物具有重要的臨床意義。哺乳類動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元對(duì)缺氧非常敏感,數(shù)分鐘缺氧即可改變神經(jīng)元的功能,甚至導(dǎo)致神經(jīng)元損傷或死亡。缺氧引起的神經(jīng)元功能改變主要是細(xì)胞膜去極化和突觸傳遞衰減。谷氨酸能突觸傳遞和GABA能突觸傳遞在缺氧引起的神經(jīng)元功能改變中均起著重要作用。大量研究發(fā)現(xiàn)缺氧時(shí)谷氨酸由興奮性神經(jīng)遞質(zhì)變成了興奮性神經(jīng)毒素,而GABA則通過激活GABAA受體抑制神經(jīng)元電活動(dòng)而起到神經(jīng)保護(hù)作用。近幾十年來,缺氧損傷的機(jī)制已在海馬和皮層神經(jīng)元中得到廣泛的研究。然而,對(duì)缺氧高度敏感的小腦卻未受到足夠的關(guān)注。小腦主神經(jīng)元浦肯野細(xì)胞(Purkinje cells,PCs)不僅接受來自平行纖維(parallel fibre,PF)和爬行纖維(climbing fibre,CF)的谷氨酸能興奮性輸入,而且接受來自中間神經(jīng)元的強(qiáng)大的GABA能抑制性輸入,因而是研究缺氧性腦損傷機(jī)制和缺氧時(shí)神經(jīng)保護(hù)機(jī)制的理想對(duì)象。芍藥是毛茛科植物芍藥的根,味苦酸,性微寒,歸肝脾經(jīng)。神農(nóng)本草經(jīng)記載“主邪氣腹痛,除血痹,破堅(jiān)積寒熱,疝瘕,止痛,利小便,益氣”。芍藥中的主要成分是芍藥苷、羥基芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷等,其中芍藥苷含量最高,也是芍藥的重要活性成分,可能具有良好的神經(jīng)保護(hù)作用。由于芍藥苷能夠迅速透過血腦屏障,因而具有治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病的潛在作用。已有研究發(fā)現(xiàn)芍藥苷能夠?qū)谷毖跻鸬呐d奮性氨基酸濃度升高,可抑制細(xì)胞內(nèi)鈣超載,而且能阻斷鈉離子通道,激活腺苷A1受體,但能否影響神經(jīng)元缺氧時(shí)的功能反應(yīng)仍不清楚。本研究采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄大鼠小腦PCs在急性缺氧時(shí)膜電位和突觸傳遞的變化,研究了芍藥苷對(duì)PCs缺氧反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用。實(shí)驗(yàn)一 芍藥苷對(duì)大鼠小腦PCs急性缺氧性膜電位變化的影響目的:研究芍藥苷對(duì)缺氧引起的PCs膜電位變化的影響及其機(jī)制。方法:采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù),在電流鉗模式下,記錄PCs膜電位,記錄穩(wěn)定后給予急性缺氧處理(2分鐘缺氧灌流),觀察短暫缺氧對(duì)PCs膜電位的影響。在缺氧灌流液中分別加入谷氨酸AMPA受體阻斷劑CNQX、GABA受體阻斷劑荷包牡丹堿(Bicuculline)和芍藥苷,觀察藥物對(duì)缺氧引起的膜電位變化的影響。結(jié)果:短暫缺氧使PCs膜電位呈現(xiàn)三相型變化:短暫的早期超極化緊接著一個(gè)較大的去極化和穩(wěn)定的缺氧后超極化,缺氧后超極化伴隨自發(fā)放電頻率增加。CNQX阻斷了早期超極化和晚期超極化,對(duì)去極化無顯著影響;Bicuculline阻斷了早期缺氧性超極化,增加了缺氧去極化的幅度和持續(xù)時(shí)間,對(duì)缺氧后超極化無明顯影響;芍藥苷阻斷了缺氧性早期超極化和晚期超極化,降低了缺氧性去極化的幅度,并縮短了缺氧性去極化的時(shí)間。結(jié)論:缺氧使PCs膜電位發(fā)生了三相型變化,AMPA受體和GABAA受體在PCs膜電位的缺氧性三相型變化中發(fā)揮不同作用,芍藥苷可顯著抑制PCs的缺氧性三相型變化,可能同時(shí)具有AMPA受體拮抗劑和GABAA受體激動(dòng)劑的作用。實(shí)驗(yàn)二 芍藥苷對(duì)大鼠小腦PCs缺氧后興奮性變化的影響目的:研究芍藥苷對(duì)缺氧引起的PCs興奮性變化的影響。方法:采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù),在電壓鉗模式下向PCs內(nèi)注射去極化電流,記錄PCs動(dòng)作電位。給予急性缺氧處理,觀察缺氧對(duì)刺激誘發(fā)的PCs動(dòng)作電位頻率和閾刺激的影響。在缺氧時(shí)給予芍藥苷,觀察芍藥苷對(duì)缺氧后刺激誘發(fā)的PCs動(dòng)作電位頻率和閾刺激的影響。結(jié)果:缺氧使PCs動(dòng)作電位的發(fā)放頻率增加、閾值降低,芍藥苷對(duì)此變化無明顯影響。結(jié)論:缺氧上調(diào)了PCs的興奮性,芍藥苷對(duì)缺氧引起的PCs高興奮性無顯著影響。實(shí)驗(yàn)三 芍藥苷對(duì)大鼠小腦PF-PC急性缺氧性突觸傳遞衰減的影響目的:研究芍藥苷對(duì)缺氧引起的PF-PC突觸傳遞衰減的影響及其機(jī)制方法:電刺激PF,在電壓鉗模式下,記錄PCs的EPSCs,觀察缺氧對(duì)PF-PC EPSCs的影響。缺氧處理時(shí)分別加入CNQX、Bicuculline和芍藥苷,觀察其對(duì)缺氧引起的PF-PC EPSCs變化的影響。結(jié)果:缺氧使PF-PC EPSCs幅值顯著衰減,并持續(xù)30min以上,表現(xiàn)為L(zhǎng)TD。缺氧同時(shí)加入CNQX,使缺氧引起的PF-PC EPSCs衰減幅度進(jìn)一步增加;缺氧時(shí)加入Bicuculline,PF-PC EPSCs的幅值首先表現(xiàn)為短暫的增強(qiáng),隨即逐漸衰減到對(duì)照水平,芍藥苷可顯著抑制缺氧引起的PF-PC EPSCs LTD。結(jié)論:缺氧使PF-PC EPSCs表現(xiàn)為L(zhǎng)TD,阻斷AMPA受體并未挽救PF-PC突觸傳遞的衰減,GABAA受體介導(dǎo)了PF-PC EPSCs的早期抑制;芍藥苷顯著減輕了缺氧引起的PF-PC EPSCs衰減程度,有助于維持PF-PC的突觸功能。
【關(guān)鍵詞】：芍藥苷 缺氧 小腦 浦肯野細(xì)胞 膜電位 突觸傳遞
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R285.5
【目錄】：

• 縮略語表3-4
• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 前言11-13
• 文獻(xiàn)回顧13-22
• 實(shí)驗(yàn)一 芍藥苷對(duì)大鼠小腦PCS急性缺氧性膜電位變化的影響22-30
• 1 材料22-24
• 2 方法24-25
• 3 結(jié)果25-27
• 4 討論27-30
• 實(shí)驗(yàn)二 芍藥苷對(duì)大鼠小腦PCS缺氧后興奮性變化的影響30-33
• 1 材料30
• 2 方法30-31
• 3 結(jié)果31-32
• 4 討論32-33
• 實(shí)驗(yàn)三 芍藥苷對(duì)急性缺氧引起的大鼠小腦PF-PC突觸傳遞變化的影響33-38
• 1 材料33
• 2 方法33-34
• 3 結(jié)果34-35
• 4 討論35-38
• 小結(jié)38-39
• 參考文獻(xiàn)39-50
• 研究成果50

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本文編號(hào)：298222