研究目的:使用小鼠胚胎干細胞報告細胞系及人誘導(dǎo)多能干細胞系對中藥有效成分促神經(jīng)分化功效進行檢測,篩選出具有較強促神經(jīng)分化功效的中藥有效成分,為研發(fā)促內(nèi)源性神經(jīng)再生藥物提供實驗數(shù)據(jù)支持。研究方法:1.應(yīng)用誘導(dǎo)多能干細胞技術(shù),對從健康人與阿爾茨海默�。ˋlzheimer’s disease,AD）患者尿液中分離的人腎上皮細胞進行重編程,獲得人誘導(dǎo)多能干細胞（induced pluripotent stem cells,iPSCs）系。通過堿性磷酸酶染色、免疫熒光染色、體內(nèi)畸胎瘤形成實驗以及核型分析等,對所構(gòu)建的人iPSCs進行鑒定。獲取可用于促神經(jīng)分化功效檢測的人iPSCs細胞系。2.應(yīng)用來源于小鼠的胚胎干細胞（Embryonic stem cells,ESCs）報告細胞系CGR8-21uc,以非那吡啶鹽酸鹽作為陽性對照藥物,對中藥有效成分與天然產(chǎn)物庫中464種藥物促神經(jīng)分化功效進行檢測,應(yīng)用雙熒光素酶檢測試劑盒,對反映細胞增殖的海腎熒光素酶表達,以及反映細胞神經(jīng)方向分化的螢火蟲熒光素酶表達進行檢測。采用K-Means聚類對篩選結(jié)果進行聚類分析,篩選得到較陽性對照藥物促神經(jīng)分化功效更強的候... 

【文章來源】：中國中醫(yī)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２尿液樣本分離細胞培養(yǎng)至不冋時間點腎上皮細胞形態(tài)??注：尿液樣本來源于ＮＤＣ－１受試者；（ａ）受試者新鮮尿液樣本采集后分離所得??

中藥有效成分促人誘導(dǎo)多能干細胞神經(jīng)方向分化功效的評價研究??■??圖１－３傳代后培養(yǎng)腎上皮細胞形態(tài)??注：圖片中細胞為ＮＤＣ－１受試者尿液樣本分離培養(yǎng)所得；圖片中比例尺為??４００｜ｉｍ。??２．２人ｉＰＳＣｓ細胞系的建立與擴增培養(yǎng)??將Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ２、Ｋｌｆ４、ｃ－Ｍｙｃ四個轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)入從尿液中分離擴增培養(yǎng)得到??的腎上皮細胞。在加入轉(zhuǎn)錄因子后第３天，與正常培養(yǎng)腎上皮細胞（圖ｌ－４ａ）相??比，可見其形態(tài)發(fā)生明顯改變，外形不規(guī)則，可見部分脫落死細胞，如圖ｌ－４ｂ所??７Ｊ＼〇??３４??

中國中醫(yī)科學(xué)院碩士論文??■■??圖丨－４正常培養(yǎng)腎上皮細胞與加入轉(zhuǎn)錄因子培養(yǎng)三天后細胞形態(tài)比較??注：圖片中細胞來源于ＮＤＣ－１受試者尿液樣本分離所得；（ａ）正常培養(yǎng)腎上皮??細胞形態(tài)；（ｂ）加入轉(zhuǎn)錄因子培養(yǎng)三天后細胞形態(tài)；圖片中比例尺均為４０〇ｎｍ。??將加入轉(zhuǎn)錄因子后重編程的細胞傳代后繼續(xù)培養(yǎng)，可觀察到典型克隆生氏，??克隆內(nèi)細胞連接緊密，類圓形，核質(zhì)比較大；克隆邊緣清晰銳利；克隆外可見腎??上皮細胞生長，如圖１－５所示。??ｍｕ??圖１－５重編程細胞形態(tài)??注．？?ＮＤＣ－１腎上皮細胞加入轉(zhuǎn)錄因子后培養(yǎng)２４天細胞形態(tài)；（ａ）圖片中比例尺??為１０００｜ｉｍ；?（ｂ）圖片中比例尺為２００ｐｍ。??使用機械法分離挑取克隆至新培養(yǎng)板中擴增培養(yǎng)，細胞生長良好，克隆形態(tài)??典型，邊緣銳利，未見明顯分化細胞；克隆內(nèi)細胞連接緊密，細胞核較大，如圖??３５??


本文編號：2975783