目的:本文利用超高效液相色譜-高分辨的Obitrap質(zhì)譜聯(lián)用儀（UPLC-MS）,建立高靈敏度的大鼠血漿中輔酶Q10（CoQ10）的測(cè)定方法,并研究角鯊烯對(duì)大鼠體內(nèi)CoQ10平衡的影響,以及氧化角鯊烯對(duì)CoQ10合成的影響。方法:首先,選擇CoQ9為內(nèi)標(biāo)物,建立測(cè)定大鼠血漿中CoQ10的UPLC-MS方法;灌胃給予大鼠兩種不同劑量的角鯊烯（100μL和50μL）,采集灌胃后不同時(shí)間點(diǎn)的血樣,離心得到血漿,采用沉淀蛋白法處理血漿樣本;用建立的UPLC-MS法測(cè)定血漿中CoQ10的濃度,并進(jìn)行QC驗(yàn)證,以考察灌胃給予大鼠角鯊烯后是否能影響其體內(nèi)CoQ10的平衡;分離、純化、檢測(cè)角鯊烯的氧化產(chǎn)物,灌胃給予大鼠兩種不同劑量的氧化角鯊烯（100μL和50μL）,繼而測(cè)定血漿中CoQ10的濃度,以考察不同環(huán)氧化角鯊烯對(duì)CoQ10合成的影響。結(jié)果:比較了有機(jī)溶劑提取法和沉淀蛋白法兩種不同的樣品處理方法,發(fā)現(xiàn)以沉淀蛋白法得到的結(jié)果比較理想。利用高分辨質(zhì)譜儀,在優(yōu)化鞘氣、輔助氣、毛細(xì)管溫度、毛細(xì)管電壓、噴霧電壓和tube lens電壓等質(zhì)譜參數(shù)后,對(duì)CoQ10的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行了測(cè)定,分別以CoQ10的[M... 

【文章來(lái)源】：長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)吉林省

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)圖

長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)2020屆碩士學(xué)位論文12圖1-5角鯊烯過(guò)量后與體內(nèi)非甾體類異戊二烯化合物的相互轉(zhuǎn)化示意圖為了研究服用角鯊烯是否會(huì)影響甾族化合物CoQ10的體內(nèi)平衡，我們以大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，通過(guò)建立一個(gè)高效、靈敏的檢測(cè)血漿中CoQ10含量的LC-MS方法，來(lái)研究角鯊烯對(duì)CoQ10體內(nèi)平衡的影響，利用新建立的高靈敏度的方法，繼續(xù)研究氧化角鯊烯對(duì)CoQ10合成的影響。實(shí)驗(yàn)路線設(shè)計(jì)如圖1-6所示。圖1-6實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)圖

長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)2020屆碩士學(xué)位論文17理的樣品行了質(zhì)譜檢測(cè)，進(jìn)樣20μL，其中進(jìn)樣濃度為100ng/mLCoQ9和CoQ10的血漿樣品通過(guò)沉淀蛋白法處理后，負(fù)譜掃描結(jié)果為圖2-1所示，圖（A）為負(fù)離子模式下內(nèi)標(biāo)物質(zhì)CoQ9標(biāo)準(zhǔn)品和CoQ10標(biāo)準(zhǔn)品總離子流圖，圖（B）為負(fù)離子模式下CoQ9標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)譜全掃圖，圖（C）為負(fù)離子模式下CoQ10標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)譜全掃圖。圖（D）為向空白血漿中加入系列標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液，再按照沉淀蛋白法處理進(jìn)樣后負(fù)離子模式下使用1/X2加權(quán)線性回歸分析的CoQ10峰面積與濃度比的代表性標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖2-1（A）負(fù)離子模式下CoQ9標(biāo)準(zhǔn)品和CoQ10標(biāo)準(zhǔn)品總離子流圖；（B）負(fù)離子模式下CoQ9標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)譜全掃圖；（C）負(fù)離子模式下CoQ10標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)譜全掃圖；（D）使用1/X2加權(quán)線性回歸分析的CoQ10峰面積與濃度比的代表性標(biāo)準(zhǔn)曲線經(jīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證，兩種方法的提取回收率和最低定量下限相同，但沉淀蛋白法的操作更為簡(jiǎn)便，所以我們采用了該方法。2.4.2生物分析方法驗(yàn)證及結(jié)果2.4.2.1選擇性和個(gè)體基質(zhì)評(píng)價(jià)分別取4份空白血漿（A、B、C、D）和2份灌胃大鼠角鯊烯7.5h后的血漿（E、F）各100μL，按沉淀蛋白法處理，其中A、B以50%乙醚甲醇溶液替代標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液，以純甲醇溶液代替內(nèi)標(biāo)工作液；C以50%乙醚甲醇溶液替代標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液，D以純甲醇溶液替代內(nèi)標(biāo)工作液，標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液為W-STD4，用建立的UPLC-MS法進(jìn)行檢測(cè)，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：2973224