發(fā)布時間：2021-01-12 17:30

　　目的:本文利用超高效液相色譜-高分辨的Obitrap質(zhì)譜聯(lián)用儀（UPLC-MS）,建立高靈敏度的大鼠血漿中輔酶Q10（CoQ10）的測定方法,并研究角鯊烯對大鼠體內(nèi)CoQ10平衡的影響,以及氧化角鯊烯對CoQ10合成的影響。方法:首先,選擇CoQ9為內(nèi)標物,建立測定大鼠血漿中CoQ10的UPLC-MS方法;灌胃給予大鼠兩種不同劑量的角鯊烯（100μL和50μL）,采集灌胃后不同時間點的血樣,離心得到血漿,采用沉淀蛋白法處理血漿樣本;用建立的UPLC-MS法測定血漿中CoQ10的濃度,并進行QC驗證,以考察灌胃給予大鼠角鯊烯后是否能影響其體內(nèi)CoQ10的平衡;分離、純化、檢測角鯊烯的氧化產(chǎn)物,灌胃給予大鼠兩種不同劑量的氧化角鯊烯（100μL和50μL）,繼而測定血漿中CoQ10的濃度,以考察不同環(huán)氧化角鯊烯對CoQ10合成的影響。結果:比較了有機溶劑提取法和沉淀蛋白法兩種不同的樣品處理方法,發(fā)現(xiàn)以沉淀蛋白法得到的結果比較理想。利用高分辨質(zhì)譜儀,在優(yōu)化鞘氣、輔助氣、毛細管溫度、毛細管電壓、噴霧電壓和tube lens電壓等質(zhì)譜參數(shù)后,對CoQ10的標準曲線進行了測定,分別以CoQ10的[M... 

【文章來源】：長春中醫(yī)藥大學吉林省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

實驗設計圖

長春中醫(yī)藥大學2020屆碩士學位論文12圖1-5角鯊烯過量后與體內(nèi)非甾體類異戊二烯化合物的相互轉化示意圖為了研究服用角鯊烯是否會影響甾族化合物CoQ10的體內(nèi)平衡，我們以大鼠為實驗對象，通過建立一個高效、靈敏的檢測血漿中CoQ10含量的LC-MS方法，來研究角鯊烯對CoQ10體內(nèi)平衡的影響，利用新建立的高靈敏度的方法，繼續(xù)研究氧化角鯊烯對CoQ10合成的影響。實驗路線設計如圖1-6所示。圖1-6實驗設計圖

長春中醫(yī)藥大學2020屆碩士學位論文17理的樣品行了質(zhì)譜檢測，進樣20μL，其中進樣濃度為100ng/mLCoQ9和CoQ10的血漿樣品通過沉淀蛋白法處理后，負譜掃描結果為圖2-1所示，圖（A）為負離子模式下內(nèi)標物質(zhì)CoQ9標準品和CoQ10標準品總離子流圖，圖（B）為負離子模式下CoQ9標準品質(zhì)譜全掃圖，圖（C）為負離子模式下CoQ10標準品質(zhì)譜全掃圖。圖（D）為向空白血漿中加入系列標準曲線工作液，再按照沉淀蛋白法處理進樣后負離子模式下使用1/X2加權線性回歸分析的CoQ10峰面積與濃度比的代表性標準曲線。圖2-1（A）負離子模式下CoQ9標準品和CoQ10標準品總離子流圖；（B）負離子模式下CoQ9標準品質(zhì)譜全掃圖；（C）負離子模式下CoQ10標準品質(zhì)譜全掃圖；（D）使用1/X2加權線性回歸分析的CoQ10峰面積與濃度比的代表性標準曲線經(jīng)實驗結果驗證，兩種方法的提取回收率和最低定量下限相同，但沉淀蛋白法的操作更為簡便，所以我們采用了該方法。2.4.2生物分析方法驗證及結果2.4.2.1選擇性和個體基質(zhì)評價分別取4份空白血漿（A、B、C、D）和2份灌胃大鼠角鯊烯7.5h后的血漿（E、F）各100μL，按沉淀蛋白法處理，其中A、B以50%乙醚甲醇溶液替代標準曲線工作液，以純甲醇溶液代替內(nèi)標工作液；C以50%乙醚甲醇溶液替代標準曲線工作液，D以純甲醇溶液替代內(nèi)標工作液，標準曲線工作液為W-STD4，用建立的UPLC-MS法進行檢測，

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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