目的:研究Nur77與GRP78在糖尿病心肌缺血再灌注損傷敏感性增加中的作用,以及上述過程發(fā)生的潛在分子通路。方法:分別將正常、高糖培養(yǎng)基中培養(yǎng)的H9C2心肌細胞置于無氧條件下進行培養(yǎng)2h建立心肌缺血再灌注（I/R）模型,得到正常培養(yǎng)+缺氧誘導組（NC+I組,n=9）和高糖培養(yǎng)+缺氧誘導組（H/H+I組,n=9）;正常細胞作為空白對照組（NC組,n=9）。用Annexin-V FITC/PI雙染法、分光光度法測Caspase3活性及JC-1染色法測線粒體膜電位,評估各組凋亡差異;用熒光染色法、Western blot法檢測胞內Nur77、GRP78的分布與相對表達量,并用Co-IP法測定Nur77與GRP78在胞內的結合情況。結果:檢測各組心肌細胞的凋亡差異:與NC組相比,其他兩組（NC、H/H+I）細胞凋亡明顯增加（P<0.01）;與NC+I組相比,H/H+I組細胞凋亡明顯增加（P<0.01）。檢測各組細胞Nur77、GRP78亞細胞分布比較:與NC組相比,NC+I組及H/H+I組細胞核周圍Nur77分布明顯增加（P<0.01）;與NC+I組相比,H/H+I組細胞核... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

各組間Annexin-VFITC/PI雙染法檢測細胞凋亡比較

山西醫(yī)科大學碩士學位論文14與NC組相比，NC+I組及H/H+I組Caspase3活性明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義；與NC+I組相比，H/H+I組細胞Caspase3活性明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（圖2）。說明NC+I組細胞凋亡水平較NC組明顯升高，H/H+I組細胞凋亡水平較其他兩組明顯升高。表1：各組間分光光度法檢測Caspase3活性比較圖2：各組間分光光度法檢測Caspase3活性比較注：與NC組相比，aP<0.01，bP<0.01；與NC+I組相比,bP<0.01。2.3各組間細胞JC-1染色法檢測線粒體膜電位比較分組NCNC+IH/H+I陰性OD405（單位：nm）0.061±0.0040.073±0.0050.094±0.0060.049±0.003activationpercent124.21%±3.59%149.74%±4.47%192.78%±3.80%

山西醫(yī)科大學碩士學位論文15與NC組相比，NC+I組及H/H+I組細胞凋亡明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義；與NC+I組相比，H/H+I組細胞凋亡明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義（圖3）。圖3：各組間細胞JC-1染色法檢測線粒體膜電位比較注：與NC組相比，aP<0.01，bP<0.01；與NC+I組相比,bP<0.01。2.4熒光顯微鏡下各組間Nur77、GRP78的亞細胞分布比較與NC組相比，NC+I組及H/H+I組細胞核周圍Nur77分布明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義；與NC+I組相比，H/H+I組細胞核周圍Nur77分布明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義。與NC組相比，NC+I組及H/H+I組細胞線粒體周圍Nur77分布明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義；與NC+I組相比，H/H+I組細胞線粒體周圍Nur77分布明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義（圖4-1）。與NC組相比，NC+I組及H/H+I組細胞線粒體周圍GRP78分布明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義；與NC+I組相比，H/H+I組細胞GRP78線粒體周圍分布稍有增加，差異無統(tǒng)計學意義（圖4-2）。與NC組相比，NC+I組及H/H+I組細胞內質網GRP78分布明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義；與


本文編號：2965517