目的卵巢癌是一種常見的威脅女性健康的惡性腫瘤。然而卵巢癌的發(fā)生機(jī)制尚不清楚。本研究旨在探討褪黑激素受體MT1（Melatonin receptor 1A）在人卵巢癌SKOV3細(xì)胞中的作用及其主要機(jī)制。方法卵巢癌是一種常見的威脅女性健康的惡性腫瘤。MT1-pcDNA3.1質(zhì)粒（MT1組）與空載體pcDNA3.1（對(duì)照組）轉(zhuǎn)染SKOV3細(xì)胞,未轉(zhuǎn)染SKOV3細(xì)胞作為陰性對(duì)照組。轉(zhuǎn)染48小時(shí)后,新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時(shí)或48小時(shí),觀察細(xì)胞周期、增殖、凋亡情況,上清液檢測褪黑激素表達(dá)。此外,在血清缺乏培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞并轉(zhuǎn)48h后,更換新鮮培養(yǎng)基并加入4μmol/l PF-04691502抑制劑孵化24h。測定AKT蛋白水平、總mTOR蛋白水平和相應(yīng)磷酸化蛋白水平。結(jié)果與NC組相比,MT1組在細(xì)胞周期S期阻滯（p<0.05）,伴隨增殖減少和早期凋亡（p<0.05）。三組細(xì)胞上清液檢測到褪黑激素分泌均隨時(shí)間增加（p<0.05）。Western-blot分析顯示,MT1過表達(dá)抑制了PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路的激活。結(jié)論SKOV3細(xì)胞有自行分泌褪黑激素的能力。MT1過表達(dá)可與內(nèi)源... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

pcDNA3.1-MT1進(jìn)行基因擴(kuò)増后的酶切圖譜與部分測序片段Fig.1MacrorestrictionmapandsequencingthepartialDNAfragmentsofpcDNA3.1-MT1

SKOV3-MT1組中MT1表達(dá)顯著升Figure2.MT1expressionwassignificantlyincreasedinSKOV3-MT1group.

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文22圖3.Tunel染色與AnnexinV-FITC/PI單染法檢測細(xì)胞凋亡水平，MT1過表達(dá)顯著促進(jìn)SKOV3細(xì)胞凋亡Figure3TheapoptosisofSKOV3cellswasdetectedbyTunelStainingandAnnexinV-FITC/PIassay，MT1overexpressionsignificantlypromotedSKOV3cellapoptosis.(A)AnnexinV-FITC/PIassayofapoptosisrateafterMT1transfection(24and48h)inSKOV3..(B)TunelStainingassayofapoptosisinSKOV3-MT1,SKOV3-BLANKandSKOV3-NC,theapoptosiscellswerelabeledwitharrows.*,p＜0.05;**,p＜0.01.2.2MT1過表達(dá)導(dǎo)致SKOV3細(xì)胞周期在S期發(fā)生阻滯并抑制細(xì)胞增殖EdU顯像結(jié)果顯示，MT1-pcDNA3.1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SKOV3細(xì)胞48h后，更換新鮮培養(yǎng)基重新培養(yǎng)。在72h內(nèi)由EDU檢測細(xì)胞增殖率，與對(duì)照組和NC組相比，細(xì)胞增殖率隨時(shí)間延長而降低(圖4A，*p<0.05)。使用流式細(xì)胞術(shù)檢測24h和48h后SKOV3細(xì)胞的細(xì)胞周期。NC組與對(duì)照組細(xì)胞在細(xì)胞周期各階段的分布無明顯差異。與NC組和對(duì)照組相比，MT1組在G1期細(xì)胞百分比較低，但S期細(xì)胞百分比較高(圖4B,*p<0.05)。但MT1組與NC組、對(duì)照組比較，G2期差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。這說明SKOV3細(xì)胞中MT1過表達(dá)可在S期阻滯細(xì)胞周期，進(jìn)而影響細(xì)胞增殖。圖4.流式細(xì)胞術(shù)與EDU染色分別檢測各組細(xì)胞周期與增殖，MT1過表達(dá)顯著抑制SKOV3細(xì)胞增殖并阻滯細(xì)胞周期

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Epidemiology of ovarian cancer:a review[J]. Brett M.Reid,Jennifer B.Permuth,Thomas A.Sellers.  Cancer Biology & Medicine. 2017(01)



本文編號(hào)：2949667