目的:收集重慶醫(yī)科大學附屬大學城醫(yī)院2013-2018年間從臨床標本分離所得的肺炎克雷伯菌,篩選出對碳青霉烯類抗菌藥物不敏感的菌株（CRKP）,對其耐藥機制及耐藥基因進行研究和檢測,為臨床合理用藥提供依據(jù),為監(jiān)測CRKP的耐藥性變化提供數(shù)據(jù)支持。方法:收集重慶醫(yī)科大學附屬大學城醫(yī)院2013-2018年間臨床分離所得381株肺炎克雷伯菌,使用全自動微生物分析儀及藥敏紙片擴散法篩選出CRKP。使用改良Carba NP試驗從CRKP中篩選出能夠產(chǎn)碳青霉烯酶的菌株。對耐藥菌株進行受體菌質(zhì)粒接合試驗,研究耐藥基因的水平傳播性。最后利用PCR法擴增相應耐藥基因,對PCR產(chǎn)物進行測序及比對分析。結(jié)果:從臨床標本中共收集篩選出11株CRKP,其中大部分菌株對美羅培南、亞胺培南、厄他培南均耐藥。改良Carba NP試驗顯示有6株菌株產(chǎn)酶表型為陽性,分別為A類、B類酶。受體菌質(zhì)粒接合試驗顯示耐藥基因可從供體菌轉(zhuǎn)移至受體菌,具有水平傳播性。PCR法對耐藥基因進行擴增,測序結(jié)果與基因庫比對后結(jié)果顯示,其中4株菌株攜帶KPC基因,1株攜帶NDM基因,1株攜帶VIM基因。結(jié)論:致病菌產(chǎn)生碳青霉烯酶是造成耐藥菌出現(xiàn)... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：32 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

1PCR鑒定肺炎克雷伯菌KPC基因電泳圖

重慶醫(yī)科大學博士研究生學位論文14和B類酶。2.2質(zhì)粒接合試驗結(jié)果在含有利福平及氨芐西林的平板上，均長出了菌落。結(jié)果顯示6株菌株耐藥基因質(zhì)粒接合試驗均成功，提示耐藥基因均可通過質(zhì)粒從供體菌水平轉(zhuǎn)移至受體菌，存在傳播性。2.3PCR法擴增耐藥基因及瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果6株菌株中有4株檢測出KPC基因，1株檢測出NDM基因，1株檢測出VIM基因。123456789101112圖2.3.1PCR鑒定肺炎克雷伯菌KPC基因電泳圖Fig2.3.1ThegelelectrophoreticofidentificationofKlebsiellapneumoniaebyPCR注：2、7、9、11為樣品，12為陰性對照，1為2000bpmarker123456789101112圖2.3.1PCR鑒定肺炎克雷伯菌NDM基因電泳圖Fig2.3.1ThegelelectrophoreticofidentificationofKlebsiellapneumoniaebyPCR注：8為樣品，2為陰性對照，1為2000bpmarker2000bp1000bp750bp500bp250bp100bp2000bp1000bp750bp500bp250bp100bp

重慶醫(yī)科大學博士研究生學位論文15123圖2.3.1PCR鑒定肺炎克雷伯菌VIM基因電泳圖Fig2.3.1ThegelelectrophoreticofidentificationofKlebsiellapneumoniaebyPCR注：3為樣品，2為陰性對照，1為2000bpmarker3討論隨著臨床抗生素越來越廣泛的使用，耐藥菌的出現(xiàn)也未曾停止，并呈現(xiàn)出逐年上升的趨勢。肺炎克雷伯菌屬腸桿菌科，是一種條件致病菌，占院內(nèi)感染致病菌的第三位。醫(yī)院的患者相比正常人免疫力下降，作為易感人群，很容易感染肺炎克雷伯菌。且醫(yī)院環(huán)境相對封閉，給細菌滋生提供了條件，一旦疏忽，極易造成醫(yī)院感染大爆發(fā)。在CRKP中有一類攜帶了NDM基因的菌株被認為是“超級細菌”，近年來也越來越頻繁地出現(xiàn)在各研究人員的視野中[18]。該類細菌耐藥性強，致病性也不弱，成為臨床用藥中極為棘手的問題。CRKP的主要耐藥機制為耐藥菌產(chǎn)生能夠水解β-內(nèi)酰胺酶的碳青霉烯酶，從而對抗生素耐藥。本次研究也是對收集得到的耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌的產(chǎn)酶機制進行了探索。采用了改良CarbaNP試驗研究細菌的產(chǎn)酶機制。該方法敏感性及特異性較高，但在操作過程中較容易出現(xiàn)問題，溫度過高會使酶失去活性，影響實驗結(jié)果。本次實驗中改良CarbaNP試驗結(jié)果顯示6株菌株均產(chǎn)B類酶。進一步采用PCR法擴增耐藥基因得到4株KPC型，1株VIM型，1株NDM型。可見本院較為流行的是KPC型碳青霉烯酶，與全國流行趨勢較為一致[19]。本次研究中仍有5株菌株未檢測出其具體耐藥機制，可通過進一步研究明確結(jié)果。質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移試驗結(jié)果顯示，6株耐藥菌均能將自身攜帶的耐藥基因轉(zhuǎn)移至受體菌。此結(jié)果提示耐藥基因可通過質(zhì)粒從耐藥菌水平轉(zhuǎn)移至敏感菌，為醫(yī)院感染的防控帶來了巨大挑戰(zhàn)。因此，在日常工作中，醫(yī)務人員應樹立較強的院內(nèi)感染控制意識，加強無菌觀念，嚴格遵守無

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：2936065