目的:通過構(gòu)建體外細(xì)胞模型,探明米諾環(huán)素對氧化應(yīng)激誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞CXCL16產(chǎn)生的作用及機(jī)制;擴(kuò)展和深化對米諾環(huán)素藥理作用機(jī)制的認(rèn)識,為今后進(jìn)一步開發(fā)及應(yīng)用米諾環(huán)素作為白癜風(fēng)類疾病的治療新手段提供堅(jiān)實(shí)的理論依據(jù)。方法:體外建立細(xì)胞模型。人角質(zhì)形成細(xì)胞系（HaCat）培養(yǎng)在含有10%FBS的DMEM培養(yǎng)基中。不同濃度的H₂O₂（125、250、500、1000、10000 uM）;不同濃度的米諾環(huán)素（125、250、500、1000 uM）;1000 uM H₂O₂+米諾環(huán)素（500、1000 uM）作用于HaCat細(xì)胞;PBS處理組作為空白對照組。處理后各組用CCK8法測試細(xì)胞活力。趨化因子芯片檢測確定試驗(yàn)的細(xì)胞因子。提取總RNA,依此為模版逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,再應(yīng)用實(shí)時QRT-PCR檢測細(xì)胞因子CXCL16 mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行檢測。收集上述各組細(xì)胞培養(yǎng)上清,用ELISA檢測細(xì)胞釋放趨化因子CXCL16水平。Transwell趨化實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)檢測上述各處理組細(xì)胞上清對外周血PBMC CD8<... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：37 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

CCK8測試不同濃度H2O2對HaCat細(xì)胞活性的影響

13圖2CCK8測試不同濃度米諾環(huán)素和H2O2對HaCat細(xì)胞活性的影響。Figure2CCK8teststheeffectsofdifferentconcentrationsofminocyclineandH2O2ontheactivityofHaCatcells.2.3H2O2誘導(dǎo)下HaCat細(xì)胞趨化因子的選擇如圖3所示，與對照組相比，H2O2（1000uM）作用于HaCat細(xì)胞后，細(xì)胞因子CXCL16表達(dá)明顯；而H2O2（1000uM）+米諾環(huán)素（1000uM）干預(yù)組，中CXCL16的表達(dá)明顯降低。實(shí)驗(yàn)選擇細(xì)胞因子CXCL16作為實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)。圖3芯片篩選H2O2誘導(dǎo)的HaCat相關(guān)細(xì)胞趨化因子的變化。Figure3ChipscreeningforH2O2-inducedchangesinHaCat-relatedchemokines.2.4PCR檢測CXCL16因子mRNA表達(dá)的變化如圖4所示，與陽性對照組相比，H2O2（1000uM）作用于HaCat細(xì)胞后，細(xì)胞因子CXCL16的表達(dá)明顯增加，用H2O2（1000uM）+米諾環(huán)素（分別500、

13圖2CCK8測試不同濃度米諾環(huán)素和H2O2對HaCat細(xì)胞活性的影響。Figure2CCK8teststheeffectsofdifferentconcentrationsofminocyclineandH2O2ontheactivityofHaCatcells.2.3H2O2誘導(dǎo)下HaCat細(xì)胞趨化因子的選擇如圖3所示，與對照組相比，H2O2（1000uM）作用于HaCat細(xì)胞后，細(xì)胞因子CXCL16表達(dá)明顯；而H2O2（1000uM）+米諾環(huán)素（1000uM）干預(yù)組，中CXCL16的表達(dá)明顯降低。實(shí)驗(yàn)選擇細(xì)胞因子CXCL16作為實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)。圖3芯片篩選H2O2誘導(dǎo)的HaCat相關(guān)細(xì)胞趨化因子的變化。Figure3ChipscreeningforH2O2-inducedchangesinHaCat-relatedchemokines.2.4PCR檢測CXCL16因子mRNA表達(dá)的變化如圖4所示，與陽性對照組相比，H2O2（1000uM）作用于HaCat細(xì)胞后，細(xì)胞因子CXCL16的表達(dá)明顯增加，用H2O2（1000uM）+米諾環(huán)素（分別500、


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