研究背景炎癥性腸�。↖nflammatory Bowel Disease,IBD）是一種病因未明的腸道慢性非特異性炎癥性疾病,近年來其發(fā)病率逐漸升高,IBD不僅嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量,而且加重了家庭及社會的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。為了尋找新的藥物靶點(diǎn)以及更好的治療方法,仍需要進(jìn)一步深入研究IBD的發(fā)病機(jī)制。近年來,肥大細(xì)胞在IBD發(fā)生發(fā)展中的作用越來越被重視,主要表現(xiàn)為肥大細(xì)胞可以促進(jìn)腸道炎癥反應(yīng)及破壞屏障功能。然而,肥大細(xì)胞在IBD中的具體致病機(jī)制尚未完全闡明。外泌體（Exosomes）作為細(xì)胞間物質(zhì)傳遞及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要載體,可由多種類型的細(xì)胞分泌,而不同細(xì)胞來源的外泌體具有不同的生物學(xué)功能。外泌體被受體細(xì)胞攝取后,外泌體所攜帶的mi RNA（Micro RNA）、lnc RNA（Long non-coding RNA）等可調(diào)控受體細(xì)胞的基因或蛋白表達(dá)。研究表明,外泌體在免疫調(diào)節(jié)中起重要作用,與系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn),IBD患者血清中的外泌體mi RNA表達(dá)水平異常。腸道黏膜屏障作為機(jī)體抵抗外來有害物質(zhì)的重要防線,對于預(yù)防IBD的發(fā)生及恢復(fù)... 

【文章來源】：廣州醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

透射電鏡觀察下可見典型外泌體形態(tài)，

結(jié)果31圖1B.Westernblotting檢測蛋白樣品中外泌體標(biāo)記蛋白CD63、TSG101和陰性對照蛋白GM130、Histone、Calnexin的表達(dá)情況。2人肥大細(xì)胞來源外泌體可被腸上皮細(xì)胞攝取用熒光染料PKH67標(biāo)記從人肥大細(xì)胞條件培養(yǎng)基中提取的外泌體，將所得外泌體與CaCO2、NCM460及HT29細(xì)胞共培養(yǎng)24h，再用DAPI對細(xì)胞核進(jìn)行染色，觀察三種腸上皮細(xì)胞中PKH67標(biāo)記外泌體的熒光位置，結(jié)果顯示三種腸上皮細(xì)胞內(nèi)可觀察到大量綠色熒光，成團(tuán)聚集，主要位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，表明人肥大細(xì)胞來源外泌體可被CaCO2、NCM460及HT29三種腸上皮細(xì)胞攝�。▓D2）。

廣州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文32圖2.熒光顯微鏡下觀察人肥大細(xì)胞外泌體被腸上皮細(xì)胞CaCO2、NCM460及HT29攝取情況，PKH67為綠色熒光，DAPI為藍(lán)色熒光。3腸上皮細(xì)胞攝取人肥大細(xì)胞來源外泌體后細(xì)胞通透性增加為了研究人肥大細(xì)胞來源外泌體對腸上皮細(xì)胞通透性的影響，我們建立了CaCO2及NCM460兩種腸上皮細(xì)胞屏障模型，對照組及實(shí)驗(yàn)組分別加入PBS溶液及含外泌體PBS溶液共培養(yǎng)72h，然后加入FITC-Dextran溶液孵育2h后通過酶標(biāo)儀測定Transwell小室基底部液體OD值的大小來確定腸上皮細(xì)胞的通透性變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與PBS組對比，加入外泌體處理后的Transwell小室基底部液體OD值變大（圖3）。CaCO2及NCM460兩種腸上皮細(xì)胞屏障模型的趨勢一致，由此表明腸上皮細(xì)胞攝取人肥大細(xì)胞外泌體后腸上皮細(xì)胞通透性增加。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：2931286