目的:Ph染色體陰性的經(jīng)典骨髓增殖性腫瘤（MPN）以紅系、粒系和巨核系中一系或多系髓細(xì)胞過(guò)度增殖為主要特征,是一種惡性血液腫瘤疾病。臨床上主要以真性紅細(xì)胞增多癥（PV）、原發(fā)性血小板增多癥（ET）和原發(fā)性骨髓纖維化（PMF）多見(jiàn)。目前,研究證實(shí)MPN的主要分子病因包括JAK2、MPL和CALR基因突變,在MPN疾病中相互排斥發(fā)生。其中,JAK2基因突變見(jiàn)于95%的PV患者,突變類型主要為JAK2 V617F和JAK2 exon12。MPLW515是最常見(jiàn)的MPL基因突變類型,僅見(jiàn)于1%-10%的ET和PMF患者。CALR基因的突變熱點(diǎn)位于9號(hào)外顯子,主要表現(xiàn)為兩種突變類型（52-bp缺失和5-bp插入）,主要見(jiàn)于ET和PMF患者。其余未檢測(cè)到上述三種驅(qū)動(dòng)基因主要熱點(diǎn)突變的MPN稱為“三陰性”MPN（TN-MPN）,主要見(jiàn)于15%的ET和低于10%的PMF患者。近年來(lái),研究者在少數(shù)MPN患者中發(fā)現(xiàn)了驅(qū)動(dòng)基因雙突變的患者,以JAK2 V617F和CALR基因共突變多見(jiàn),可見(jiàn)于PV、ET及PMF患者。臨床工作中我們首次發(fā)現(xiàn)JAK2 exonl2（JAK2 N533S不典型突變）和CALR（5... 

【文章來(lái)源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

JAK2N533S和CALRtype1雙突變患者初診的臨床結(jié)果

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文182.2臨床水平分析患者JAK2N533S和CALRtypeⅠ型共突變的克隆關(guān)系2.2.1BFU-E和CFU-G集落形成圖提取患者新鮮外周血中單個(gè)核細(xì)胞，用DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基將提取的單個(gè)核細(xì)胞稀釋成1×102cells/mL的細(xì)胞密度，輕柔吹打混勻成單細(xì)胞懸液，用有限稀釋法培養(yǎng)獲取單細(xì)胞克隆，然后挑取單細(xì)胞克隆，分別用含3U/mlrhEPO和100ng/mlrhG-CSF的甲基纖維素培養(yǎng)基培養(yǎng)單細(xì)胞克隆15天，誘導(dǎo)形成暴發(fā)型紅系集落形成單位（BFU-E）和粒細(xì)胞集落形成單位（CFU-G），結(jié)果如下：圖2BFU-E和CFU-G集落形成圖(X10)2.2.2BFU-E及CFU-G單個(gè)集落JAK2N533S和CALR-typeⅠ型突變檢測(cè)結(jié)果我們共挑取了17個(gè)BFU-E集落和21個(gè)CFU-G集落，并提取每個(gè)集落細(xì)胞的DNA，用相應(yīng)引物對(duì)JAK2exon12和CALRexon9進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后取10ul擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行一代測(cè)序。我們用九格圖對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行描述分析，九格圖的橫軸從左到右依次為CALR野生型（WT）、CALRtypeⅠ型雜合型（Het）和純合型（Hom），縱軸自上而下依次為JAK2N533S純合型（Hom）、雜合型（Het）和野生型（WT）。我們用一個(gè)點(diǎn)表示一個(gè)集落，紅點(diǎn)代表BFU-E集落，藍(lán)點(diǎn)代表CFU-G集落，用每個(gè)點(diǎn)在九格圖的位置代表檢測(cè)結(jié)果。具體結(jié)果如下：

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文19①挑取的17個(gè)BFU-E集落，經(jīng)檢測(cè)全部攜帶JAK2N533S雜合突變，14個(gè)(82%)集落攜帶CALRtype1雜合突變，2個(gè)(12%)集落為CALR野生型，1個(gè)(6%)集落檢測(cè)到CALRtype1純合突變。②挑取的21個(gè)CFU-G集落，經(jīng)檢測(cè)均存在JAK2N533S雜合突變，20個(gè)(95%)集落攜帶CALRtype1雜合突變，1個(gè)(5%)集落為CALR野生型。圖3BFU-E及CFU-G單個(gè)集落JAK2N533S和CALR-typeⅠ型突變檢測(cè)結(jié)果圖（左上：BFU-E集落測(cè)序結(jié)果分析九格圖右上：BFU-E集落測(cè)序峰圖左下：CFU-G集落測(cè)序結(jié)果分析九格圖右下：CFU-G集落測(cè)序峰圖）2.2.3患者毛囊DNA中JAK2N533S和CALR基因突變檢測(cè)的結(jié)果我們?cè)诩t系及粒系所有集落中均檢測(cè)出JAK2N533S雜合突變，推測(cè)該突變可能為胚系突變。因此，我們通過(guò)提取該患者的毛囊DNA，檢測(cè)JAK2N533S及CALR基因突變情況并進(jìn)行一代測(cè)序，結(jié)果發(fā)現(xiàn)JAK2N533S雜合突變?nèi)詾殛?yáng)性，而CALR基因?yàn)橐吧�，從而�?yàn)證了JAK2N533S突變?yōu)榕呦低蛔�。JAK2N533S和CALR基因測(cè)序峰圖如下：


本文編號(hào)：2923561