目的:Ph染色體陰性的經(jīng)典骨髓增殖性腫瘤（MPN）以紅系、粒系和巨核系中一系或多系髓細胞過度增殖為主要特征,是一種惡性血液腫瘤疾病。臨床上主要以真性紅細胞增多癥（PV）、原發(fā)性血小板增多癥（ET）和原發(fā)性骨髓纖維化（PMF）多見。目前,研究證實MPN的主要分子病因包括JAK2、MPL和CALR基因突變,在MPN疾病中相互排斥發(fā)生。其中,JAK2基因突變見于95%的PV患者,突變類型主要為JAK2 V617F和JAK2 exon12。MPLW515是最常見的MPL基因突變類型,僅見于1%-10%的ET和PMF患者。CALR基因的突變熱點位于9號外顯子,主要表現(xiàn)為兩種突變類型（52-bp缺失和5-bp插入）,主要見于ET和PMF患者。其余未檢測到上述三種驅(qū)動基因主要熱點突變的MPN稱為“三陰性”MPN（TN-MPN）,主要見于15%的ET和低于10%的PMF患者。近年來,研究者在少數(shù)MPN患者中發(fā)現(xiàn)了驅(qū)動基因雙突變的患者,以JAK2 V617F和CALR基因共突變多見,可見于PV、ET及PMF患者。臨床工作中我們首次發(fā)現(xiàn)JAK2 exonl2（JAK2 N533S不典型突變）和CALR（5... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

JAK2N533S和CALRtype1雙突變患者初診的臨床結(jié)果

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文182.2臨床水平分析患者JAK2N533S和CALRtypeⅠ型共突變的克隆關(guān)系2.2.1BFU-E和CFU-G集落形成圖提取患者新鮮外周血中單個核細胞，用DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基將提取的單個核細胞稀釋成1×102cells/mL的細胞密度，輕柔吹打混勻成單細胞懸液，用有限稀釋法培養(yǎng)獲取單細胞克隆，然后挑取單細胞克隆，分別用含3U/mlrhEPO和100ng/mlrhG-CSF的甲基纖維素培養(yǎng)基培養(yǎng)單細胞克隆15天，誘導(dǎo)形成暴發(fā)型紅系集落形成單位（BFU-E）和粒細胞集落形成單位（CFU-G），結(jié)果如下：圖2BFU-E和CFU-G集落形成圖(X10)2.2.2BFU-E及CFU-G單個集落JAK2N533S和CALR-typeⅠ型突變檢測結(jié)果我們共挑取了17個BFU-E集落和21個CFU-G集落，并提取每個集落細胞的DNA，用相應(yīng)引物對JAK2exon12和CALRexon9進行PCR擴增，然后取10ul擴增產(chǎn)物進行一代測序。我們用九格圖對測序結(jié)果進行描述分析，九格圖的橫軸從左到右依次為CALR野生型（WT）、CALRtypeⅠ型雜合型（Het）和純合型（Hom），縱軸自上而下依次為JAK2N533S純合型（Hom）、雜合型（Het）和野生型（WT）。我們用一個點表示一個集落，紅點代表BFU-E集落，藍點代表CFU-G集落，用每個點在九格圖的位置代表檢測結(jié)果。具體結(jié)果如下：

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文19①挑取的17個BFU-E集落，經(jīng)檢測全部攜帶JAK2N533S雜合突變，14個(82%)集落攜帶CALRtype1雜合突變，2個(12%)集落為CALR野生型，1個(6%)集落檢測到CALRtype1純合突變。②挑取的21個CFU-G集落，經(jīng)檢測均存在JAK2N533S雜合突變，20個(95%)集落攜帶CALRtype1雜合突變，1個(5%)集落為CALR野生型。圖3BFU-E及CFU-G單個集落JAK2N533S和CALR-typeⅠ型突變檢測結(jié)果圖（左上：BFU-E集落測序結(jié)果分析九格圖右上：BFU-E集落測序峰圖左下：CFU-G集落測序結(jié)果分析九格圖右下：CFU-G集落測序峰圖）2.2.3患者毛囊DNA中JAK2N533S和CALR基因突變檢測的結(jié)果我們在紅系及粒系所有集落中均檢測出JAK2N533S雜合突變，推測該突變可能為胚系突變。因此，我們通過提取該患者的毛囊DNA，檢測JAK2N533S及CALR基因突變情況并進行一代測序，結(jié)果發(fā)現(xiàn)JAK2N533S雜合突變?nèi)詾殛栃�，而CALR基因為野生型，從而驗證了JAK2N533S突變?yōu)榕呦低蛔�。JAK2N533S和CALR基因測序峰圖如下：


本文編號：2923561