目的:探討載脂蛋白E（Apolipoprotein E,ApoE）基因敲除小鼠在內(nèi)皮損傷情況下,左頸總動(dòng)脈部分結(jié)扎術(shù)（Partial carotid ligation,PCL）對(duì)小鼠血管內(nèi)膜增生、脂質(zhì)數(shù)量、血管功能的影響,同時(shí)研究二甲雙胍對(duì)PCL引起的小鼠血管損傷的保護(hù)作用。在細(xì)胞水平上研究二甲雙胍對(duì)棕櫚酸誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷的作用及前動(dòng)力蛋白2（Prokineticin 2,PK2）、前動(dòng)力蛋白受體1（Prokineticin Receptor1,PKR1）、磷酸化內(nèi)皮型一氧化氮合酶（Phosphate endothelial nitric oxide synthase,p-eNOS）、內(nèi)皮型一氧化氮合酶（Endothelial nitric oxide synthase,eNOS）蛋白表達(dá)水平的變化。方法:將ApoE基因敲除小鼠分為4組,分別是PD（Paigen’s high-fat diet）飲食組（對(duì)照組）、PD飲食+左頸總動(dòng)脈部分結(jié)扎手術(shù)組（PCL手術(shù)組）、PD飲食+二甲雙胍+手術(shù)組（PCL+二甲雙胍組）、PD飲食+二甲雙胍組（二甲雙胍組）。通過(guò)HE染色法觀察內(nèi)膜增生情況;通過(guò)觀... 

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小鼠頸動(dòng)脈部分結(jié)扎術(shù)示意圖

17結(jié)果1.二甲雙胍抑制左頸總動(dòng)脈內(nèi)膜的增生為了研究二甲雙胍對(duì)血管內(nèi)膜的影響，我們將ApoE基因敲除小鼠的左頸總動(dòng)脈用石蠟包埋，進(jìn)行切片染色。結(jié)果顯示，對(duì)照組結(jié)構(gòu)完整，彈力膜較為模糊；二甲雙胍組血管結(jié)構(gòu)完整，彈力膜清晰。PCL手術(shù)組血管內(nèi)膜增生嚴(yán)重，結(jié)構(gòu)模糊，細(xì)胞核分布散亂，增生部分有大量空泡。PCL+二甲雙胍組血管內(nèi)膜增生較多，血管結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞核分布有序如圖2A。定量分析表明，相比于對(duì)照組，PCL手術(shù)組小鼠左頸總動(dòng)脈中內(nèi)膜增生面積顯著增加(P<0.01)；相比于PCL手術(shù)組，PCL+二甲雙胍組小鼠左頸總動(dòng)脈內(nèi)膜增生面積顯著減少(P<0.05)。相比于對(duì)照組，二甲雙胍組小鼠左頸總動(dòng)脈內(nèi)膜增生面積顯著減少(P<0.01)如圖2B。表明二甲雙胍能抑制血管內(nèi)膜的增生。圖2二甲雙胍緩解血管內(nèi)膜的增生注：（A）左頸總動(dòng)脈HE染色（放大倍數(shù)200×）及左頸總局部放大（放大倍數(shù)4000×）；（B）相比于對(duì)照組，PCL手術(shù)組小鼠左頸總動(dòng)脈中內(nèi)膜增生面積顯著增加**P<0.01，n=4；相比于PCL手術(shù)組，PCL+二甲雙胍組小鼠左頸總動(dòng)脈內(nèi)膜增生面積顯著減少*P<0.05，n=4。相比于對(duì)照組，二甲雙胍組小鼠左頸總動(dòng)脈內(nèi)膜增生面積顯著減少**P<0.01，n=4。2.二甲雙胍減少左頸總動(dòng)脈中脂質(zhì)含量為了評(píng)估二甲雙胍對(duì)ApoE基因敲除小鼠血管中的脂質(zhì)斑塊的影響。我們分離小鼠左頸總動(dòng)脈進(jìn)行冰凍切片，油紅O染色，對(duì)其定量分析。形態(tài)結(jié)果顯示，對(duì)照組血管結(jié)構(gòu)完整，血管彈力膜清晰可見(jiàn)，有少量脂質(zhì)。二甲雙胍組血管結(jié)構(gòu)

18完整，血管彈力膜清晰可見(jiàn)，脂質(zhì)區(qū)域不明顯。PCL手術(shù)組血管中膜和內(nèi)膜界限不明顯，血管中脂質(zhì)區(qū)域面積很大。PCL+二甲雙胍組血管彈力膜清晰可見(jiàn)，中膜內(nèi)膜界限模糊，血管中脂質(zhì)區(qū)域面積較大如圖3A；定量分析表明，相比于對(duì)照組，PCL手術(shù)組小鼠左頸總動(dòng)脈中脂質(zhì)面積顯著增加(P<0.01)；相比于PCL手術(shù)組，PCL+二甲雙胍組小鼠左頸總動(dòng)脈脂質(zhì)面積顯著減少(P<0.05)。相比于對(duì)照組，二甲雙胍組小鼠左頸總動(dòng)脈脂質(zhì)面積顯著減少(P<0.01)如圖3B。表明二甲雙胍可以減少血管中脂質(zhì)含量。圖3二甲雙胍減少血管中脂質(zhì)含量注：（A）左頸總動(dòng)脈油紅O染色（放大倍數(shù)200×）；（B）相比于對(duì)照組，PCL手術(shù)組小鼠左頸總動(dòng)脈中脂質(zhì)面積顯著增加**P<0.01，n=4；相比于PCL手術(shù)組，PCL+二甲雙胍組小鼠左頸總動(dòng)脈脂質(zhì)面積顯著減少*P<0.05，n=4。相比于對(duì)照組，二甲雙胍組小鼠左頸總動(dòng)脈脂質(zhì)面積顯著減少**P<0.01，n=4。3.二甲雙胍減少左頸總動(dòng)脈脂質(zhì)斑塊的形成我們觀察了二甲雙胍是否與左頸總動(dòng)脈脂質(zhì)斑塊發(fā)展程度有關(guān)，將ApoE敲除小鼠的胸主動(dòng)脈、主動(dòng)脈弓、左右頸總動(dòng)脈整體取出，置于10倍顯微鏡下拍照，觀察對(duì)照組血管表面光滑，質(zhì)地柔軟，彈性較好。二甲雙胍組血管表面光滑，質(zhì)地柔軟，彈性較好。PCL手術(shù)組血管表面粗糙，質(zhì)地堅(jiān)硬，硬化程度較大，彈性較差。PCL+二甲雙胍組血管表面光滑，質(zhì)地較硬，硬化程度較輕，彈性較好（4A）。定量分析結(jié)果顯示，相比于對(duì)照組，PCL手術(shù)組小鼠左頸總動(dòng)脈血管硬化長(zhǎng)度與左頸總動(dòng)脈血管總長(zhǎng)度比值明顯增加(P<0.01)；相比于PCL手術(shù)組，


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