目的:探討載脂蛋白E（Apolipoprotein E,ApoE）基因敲除小鼠在內(nèi)皮損傷情況下,左頸總動脈部分結(jié)扎術(shù)（Partial carotid ligation,PCL）對小鼠血管內(nèi)膜增生、脂質(zhì)數(shù)量、血管功能的影響,同時研究二甲雙胍對PCL引起的小鼠血管損傷的保護作用。在細胞水平上研究二甲雙胍對棕櫚酸誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞損傷的作用及前動力蛋白2（Prokineticin 2,PK2）、前動力蛋白受體1（Prokineticin Receptor1,PKR1）、磷酸化內(nèi)皮型一氧化氮合酶（Phosphate endothelial nitric oxide synthase,p-eNOS）、內(nèi)皮型一氧化氮合酶（Endothelial nitric oxide synthase,eNOS）蛋白表達水平的變化。方法:將ApoE基因敲除小鼠分為4組,分別是PD（Paigen’s high-fat diet）飲食組（對照組）、PD飲食+左頸總動脈部分結(jié)扎手術(shù)組（PCL手術(shù)組）、PD飲食+二甲雙胍+手術(shù)組（PCL+二甲雙胍組）、PD飲食+二甲雙胍組（二甲雙胍組）。通過HE染色法觀察內(nèi)膜增生情況;通過觀... 

【文章來源】：湖北科技學(xué)院湖北省

【文章頁數(shù)】：40 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

小鼠頸動脈部分結(jié)扎術(shù)示意圖

17結(jié)果1.二甲雙胍抑制左頸總動脈內(nèi)膜的增生為了研究二甲雙胍對血管內(nèi)膜的影響，我們將ApoE基因敲除小鼠的左頸總動脈用石蠟包埋，進行切片染色。結(jié)果顯示，對照組結(jié)構(gòu)完整，彈力膜較為模糊；二甲雙胍組血管結(jié)構(gòu)完整，彈力膜清晰。PCL手術(shù)組血管內(nèi)膜增生嚴重，結(jié)構(gòu)模糊，細胞核分布散亂，增生部分有大量空泡。PCL+二甲雙胍組血管內(nèi)膜增生較多，血管結(jié)構(gòu)完整，細胞核分布有序如圖2A。定量分析表明，相比于對照組，PCL手術(shù)組小鼠左頸總動脈中內(nèi)膜增生面積顯著增加(P<0.01)；相比于PCL手術(shù)組，PCL+二甲雙胍組小鼠左頸總動脈內(nèi)膜增生面積顯著減少(P<0.05)。相比于對照組，二甲雙胍組小鼠左頸總動脈內(nèi)膜增生面積顯著減少(P<0.01)如圖2B。表明二甲雙胍能抑制血管內(nèi)膜的增生。圖2二甲雙胍緩解血管內(nèi)膜的增生注：（A）左頸總動脈HE染色（放大倍數(shù)200×）及左頸總局部放大（放大倍數(shù)4000×）；（B）相比于對照組，PCL手術(shù)組小鼠左頸總動脈中內(nèi)膜增生面積顯著增加**P<0.01，n=4；相比于PCL手術(shù)組，PCL+二甲雙胍組小鼠左頸總動脈內(nèi)膜增生面積顯著減少*P<0.05，n=4。相比于對照組，二甲雙胍組小鼠左頸總動脈內(nèi)膜增生面積顯著減少**P<0.01，n=4。2.二甲雙胍減少左頸總動脈中脂質(zhì)含量為了評估二甲雙胍對ApoE基因敲除小鼠血管中的脂質(zhì)斑塊的影響。我們分離小鼠左頸總動脈進行冰凍切片，油紅O染色，對其定量分析。形態(tài)結(jié)果顯示，對照組血管結(jié)構(gòu)完整，血管彈力膜清晰可見，有少量脂質(zhì)。二甲雙胍組血管結(jié)構(gòu)

18完整，血管彈力膜清晰可見，脂質(zhì)區(qū)域不明顯。PCL手術(shù)組血管中膜和內(nèi)膜界限不明顯，血管中脂質(zhì)區(qū)域面積很大。PCL+二甲雙胍組血管彈力膜清晰可見，中膜內(nèi)膜界限模糊，血管中脂質(zhì)區(qū)域面積較大如圖3A；定量分析表明，相比于對照組，PCL手術(shù)組小鼠左頸總動脈中脂質(zhì)面積顯著增加(P<0.01)；相比于PCL手術(shù)組，PCL+二甲雙胍組小鼠左頸總動脈脂質(zhì)面積顯著減少(P<0.05)。相比于對照組，二甲雙胍組小鼠左頸總動脈脂質(zhì)面積顯著減少(P<0.01)如圖3B。表明二甲雙胍可以減少血管中脂質(zhì)含量。圖3二甲雙胍減少血管中脂質(zhì)含量注：（A）左頸總動脈油紅O染色（放大倍數(shù)200×）；（B）相比于對照組，PCL手術(shù)組小鼠左頸總動脈中脂質(zhì)面積顯著增加**P<0.01，n=4；相比于PCL手術(shù)組，PCL+二甲雙胍組小鼠左頸總動脈脂質(zhì)面積顯著減少*P<0.05，n=4。相比于對照組，二甲雙胍組小鼠左頸總動脈脂質(zhì)面積顯著減少**P<0.01，n=4。3.二甲雙胍減少左頸總動脈脂質(zhì)斑塊的形成我們觀察了二甲雙胍是否與左頸總動脈脂質(zhì)斑塊發(fā)展程度有關(guān)，將ApoE敲除小鼠的胸主動脈、主動脈弓、左右頸總動脈整體取出，置于10倍顯微鏡下拍照，觀察對照組血管表面光滑，質(zhì)地柔軟，彈性較好。二甲雙胍組血管表面光滑，質(zhì)地柔軟，彈性較好。PCL手術(shù)組血管表面粗糙，質(zhì)地堅硬，硬化程度較大，彈性較差。PCL+二甲雙胍組血管表面光滑，質(zhì)地較硬，硬化程度較輕，彈性較好（4A）。定量分析結(jié)果顯示，相比于對照組，PCL手術(shù)組小鼠左頸總動脈血管硬化長度與左頸總動脈血管總長度比值明顯增加(P<0.01)；相比于PCL手術(shù)組，


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