小鼠睪丸、附睪和前列腺組織細(xì)胞外囊泡蛋白質(zhì)組分的鑒定
發(fā)布時間：2020-12-10 22:37
目的:通過鑒定小鼠睪丸、附睪和前列腺組織細(xì)胞外囊泡（extracellular vesicles,EVs）的蛋白,明確睪丸、附睪和前列腺來源的細(xì)胞外囊泡的蛋白組分在精子發(fā)育成熟及功能維持方面所發(fā)揮的不同作用。方法:使用TEI（Total Exosome Isolation）方法分別富集小鼠睪丸、附睪和前列腺組織的EVs,用免疫印跡分析EVs標(biāo)記蛋白的表達,在透射電鏡下觀察EVs形態(tài),用動態(tài)光散射粒徑分析儀（dynamic light scattering,DLS）分析顆粒大小分布。通過液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC MS/MS）分析三種EVs的蛋白組分。運用DAVID 6.8在線分析工具從細(xì)胞組分、分子功能和生物學(xué)過程三方面對小鼠睪丸、附睪和前列腺組織的EVs蛋白進行GO（gene ontology）富集分析。結(jié)果:1.免疫印跡分析富集到的EVs表達CD63、TSG101等細(xì)胞外囊泡標(biāo)記物。在透射電鏡下觀察EVs多呈圓形杯狀,用動態(tài)光散射粒徑分析儀（dynamic light scattering,DLS）分析顆粒大小分布,發(fā)現(xiàn)睪丸組織來源的EVs分布范圍較大（13-450nm）,以30-1...
【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省
【文章頁數(shù)】：93 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
免疫印跡分析睪丸、附睪和前列腺組織EVs的標(biāo)記蛋白提取小鼠睪丸、附睪和前列腺組織和EVs蛋白，12%的SDS-PAGE凝膠，組織上樣量10μg，EVs上樣量30μg
山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文92.2睪丸、附睪和前列腺組織EVs的電鏡觀察與DLS粒徑測量透射電鏡觀察小鼠睪丸，附睪和前列腺組織的EVs，多呈圓形杯狀，睪丸和附睪標(biāo)本中大小囊泡均可見到，前列腺標(biāo)本中以小囊泡多見（見圖1-2）。為了進一步明確睪丸、附睪和前列腺組織的EVs大小分布，我們用DLS對睪丸、附睪和前列腺組織EVs的樣品進行測量。結(jié)果顯示睪丸組織EVs在13-450nm之間廣泛分布，直徑為30-140nm的囊泡數(shù)量最多；附睪組織EVs直徑大小分布在13-24nm、24-50nm、50-250nm三個區(qū)段，直徑在105nm左右的囊泡數(shù)量最多；前列腺組織EVs中30-220nm的囊泡數(shù)量是最多的，其中在50nm和90nm左右有兩個峰值，另外在7-28nm處還有集中的一群小囊泡（見圖1-3）。DLS結(jié)果與電鏡下觀察到的結(jié)果相一致，表明睪丸、附睪和前列腺組織EVs的大小分布確實有一定的差異。圖1-2電鏡觀察睪丸、附睪和前列腺組織EVs的形態(tài)電鏡下，通過負(fù)染顯示EVs呈“杯狀”。(A)睪丸組織EVs；(B)附睪組織EVs；(C)前列腺組織EVs。箭頭指示EVs，標(biāo)尺為100nm。圖1-3DLS分析睪丸、附睪和前列腺組織EVs的粒徑分布范圍
山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文92.2睪丸、附睪和前列腺組織EVs的電鏡觀察與DLS粒徑測量透射電鏡觀察小鼠睪丸，附睪和前列腺組織的EVs，多呈圓形杯狀，睪丸和附睪標(biāo)本中大小囊泡均可見到，前列腺標(biāo)本中以小囊泡多見（見圖1-2）。為了進一步明確睪丸、附睪和前列腺組織的EVs大小分布，我們用DLS對睪丸、附睪和前列腺組織EVs的樣品進行測量。結(jié)果顯示睪丸組織EVs在13-450nm之間廣泛分布，直徑為30-140nm的囊泡數(shù)量最多；附睪組織EVs直徑大小分布在13-24nm、24-50nm、50-250nm三個區(qū)段，直徑在105nm左右的囊泡數(shù)量最多；前列腺組織EVs中30-220nm的囊泡數(shù)量是最多的，其中在50nm和90nm左右有兩個峰值，另外在7-28nm處還有集中的一群小囊泡（見圖1-3）。DLS結(jié)果與電鏡下觀察到的結(jié)果相一致，表明睪丸、附睪和前列腺組織EVs的大小分布確實有一定的差異。圖1-2電鏡觀察睪丸、附睪和前列腺組織EVs的形態(tài)電鏡下，通過負(fù)染顯示EVs呈“杯狀”。(A)睪丸組織EVs；(B)附睪組織EVs；(C)前列腺組織EVs。箭頭指示EVs，標(biāo)尺為100nm。圖1-3DLS分析睪丸、附睪和前列腺組織EVs的粒徑分布范圍
【參考文獻】：
期刊論文
[1]附睪小體功能蛋白及sRNA研究進展[J]. 肖娟,王訊,羅毅,李曉開,李學(xué)偉. 遺傳. 2018(03)
[2]調(diào)控精子成熟和功能的生殖道胞外囊泡研究進展[J]. 李坤,倪崖. 生命科學(xué). 2017(06)
[3]細(xì)胞外囊泡研究新進展[J]. 王琎,陳建英. 中國組織工程研究. 2017(04)
[4]外泌體與生殖細(xì)胞生長發(fā)育的研究進展[J]. 胡頲,胡蓉. 國際生殖健康/計劃生育雜志. 2017(01)
本文編號：2909395
【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省
【文章頁數(shù)】：93 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
免疫印跡分析睪丸、附睪和前列腺組織EVs的標(biāo)記蛋白提取小鼠睪丸、附睪和前列腺組織和EVs蛋白，12%的SDS-PAGE凝膠，組織上樣量10μg，EVs上樣量30μg
山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文92.2睪丸、附睪和前列腺組織EVs的電鏡觀察與DLS粒徑測量透射電鏡觀察小鼠睪丸，附睪和前列腺組織的EVs，多呈圓形杯狀，睪丸和附睪標(biāo)本中大小囊泡均可見到，前列腺標(biāo)本中以小囊泡多見（見圖1-2）。為了進一步明確睪丸、附睪和前列腺組織的EVs大小分布，我們用DLS對睪丸、附睪和前列腺組織EVs的樣品進行測量。結(jié)果顯示睪丸組織EVs在13-450nm之間廣泛分布，直徑為30-140nm的囊泡數(shù)量最多；附睪組織EVs直徑大小分布在13-24nm、24-50nm、50-250nm三個區(qū)段，直徑在105nm左右的囊泡數(shù)量最多；前列腺組織EVs中30-220nm的囊泡數(shù)量是最多的，其中在50nm和90nm左右有兩個峰值，另外在7-28nm處還有集中的一群小囊泡（見圖1-3）。DLS結(jié)果與電鏡下觀察到的結(jié)果相一致，表明睪丸、附睪和前列腺組織EVs的大小分布確實有一定的差異。圖1-2電鏡觀察睪丸、附睪和前列腺組織EVs的形態(tài)電鏡下，通過負(fù)染顯示EVs呈“杯狀”。(A)睪丸組織EVs；(B)附睪組織EVs；(C)前列腺組織EVs。箭頭指示EVs，標(biāo)尺為100nm。圖1-3DLS分析睪丸、附睪和前列腺組織EVs的粒徑分布范圍
山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文92.2睪丸、附睪和前列腺組織EVs的電鏡觀察與DLS粒徑測量透射電鏡觀察小鼠睪丸，附睪和前列腺組織的EVs，多呈圓形杯狀，睪丸和附睪標(biāo)本中大小囊泡均可見到，前列腺標(biāo)本中以小囊泡多見（見圖1-2）。為了進一步明確睪丸、附睪和前列腺組織的EVs大小分布，我們用DLS對睪丸、附睪和前列腺組織EVs的樣品進行測量。結(jié)果顯示睪丸組織EVs在13-450nm之間廣泛分布，直徑為30-140nm的囊泡數(shù)量最多；附睪組織EVs直徑大小分布在13-24nm、24-50nm、50-250nm三個區(qū)段，直徑在105nm左右的囊泡數(shù)量最多；前列腺組織EVs中30-220nm的囊泡數(shù)量是最多的，其中在50nm和90nm左右有兩個峰值，另外在7-28nm處還有集中的一群小囊泡（見圖1-3）。DLS結(jié)果與電鏡下觀察到的結(jié)果相一致，表明睪丸、附睪和前列腺組織EVs的大小分布確實有一定的差異。圖1-2電鏡觀察睪丸、附睪和前列腺組織EVs的形態(tài)電鏡下，通過負(fù)染顯示EVs呈“杯狀”。(A)睪丸組織EVs；(B)附睪組織EVs；(C)前列腺組織EVs。箭頭指示EVs，標(biāo)尺為100nm。圖1-3DLS分析睪丸、附睪和前列腺組織EVs的粒徑分布范圍
【參考文獻】：
期刊論文
[1]附睪小體功能蛋白及sRNA研究進展[J]. 肖娟,王訊,羅毅,李曉開,李學(xué)偉. 遺傳. 2018(03)
[2]調(diào)控精子成熟和功能的生殖道胞外囊泡研究進展[J]. 李坤,倪崖. 生命科學(xué). 2017(06)
[3]細(xì)胞外囊泡研究新進展[J]. 王琎,陳建英. 中國組織工程研究. 2017(04)
[4]外泌體與生殖細(xì)胞生長發(fā)育的研究進展[J]. 胡頲,胡蓉. 國際生殖健康/計劃生育雜志. 2017(01)
本文編號：2909395
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