目的:篩選鑒定新型小分子GLP-1R激動(dòng)劑S6對(duì)葡萄糖刺激的大鼠胰島素分泌的影響及其機(jī)制。方法:1)基于藥效團(tuán)模型的虛擬篩選與分子對(duì)接技術(shù)相結(jié)合的方法篩選小分子化合物。2)FLIPR^?熒光成像檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)篩選化合物與GLP-1R結(jié)合后細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化。3)胰島素分泌實(shí)驗(yàn)觀察不同條件下的S6對(duì)胰島素分泌的作用。4)鈣離子成像技術(shù)檢測(cè)在不同條件下S6對(duì)胰島β細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響。5)全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)探究S6在不同條件下對(duì)胰島β細(xì)胞電壓依賴性鈣（VDCC）通道、電壓依賴性鉀（Kv）通道以及動(dòng)作電位時(shí)程的影響。6)利用CETSA技術(shù)觀察S6對(duì)GLP-1R的靶向作用。結(jié)果:1)通過虛擬篩選和分子對(duì)接結(jié)合的方法從ZINC小分子數(shù)據(jù)庫(kù)篩選出5809種化合物,后續(xù)進(jìn)行基于口服化合物理化性質(zhì)的篩選,有108種化合物符合要求,最終購(gòu)買到30個(gè)商業(yè)性化合物。2)30個(gè)待測(cè)化合物中有16個(gè)化合物表現(xiàn)出GLP-1R激動(dòng)效應(yīng),其中S6具有最高激動(dòng)作用。3)胰島素分泌結(jié)果表明,S6具有促進(jìn)大鼠胰島素分泌的作用。4)鈣離子成像技術(shù)顯示S6可增加細(xì)胞內(nèi)Ca²⁺濃度。5)... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
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前言
第一部分 小分子GLP-1R激動(dòng)劑S6 的篩選
    1 材料與方法
        1.1 主要藥品與試劑
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 主要溶液的配制
        1.4 計(jì)算機(jī)研究
        1.5 CHO-K1 細(xì)胞的培養(yǎng)
        1.6 鈣離子熒光檢測(cè)技術(shù)觀察化合物對(duì)GLP-1R的激動(dòng)活性
        1.7 數(shù)據(jù)處理
    2 結(jié)果
        2.1 虛擬篩選和化合物理化性質(zhì)的計(jì)算
        2.2 S6 具有最強(qiáng)的GLP-1R激動(dòng)作用
    3 討論
    4 結(jié)論
第二部分 S6葡萄糖濃度依賴性促進(jìn)大鼠胰島素分泌及其電生理機(jī)制
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 主要藥品與試劑
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        1.4 主要溶液的配制方法
        1.5 大鼠胰島組織的分離與培養(yǎng)
        1.6 大鼠β細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
        1.7 組織水平上的胰島素分泌實(shí)驗(yàn)
        1.8 全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)
        1.9 鈣離子成像技術(shù)實(shí)驗(yàn)
        1.10 數(shù)據(jù)處理
    2 結(jié)果
        2.1 S6 葡萄糖濃度依賴性的促進(jìn)胰島素分泌
        2.2 S6 升高β細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度
        2.3 S6 未影響β細(xì)胞電壓依賴性鈣（VDCC）通道
        2.4 S6 抑制β細(xì)胞電壓依賴性鉀（Kv）通道,延長(zhǎng)動(dòng)作電位時(shí)程
        2.5 Kv通道部分參與S6 介導(dǎo)的胰島素分泌作用
2+濃度升高">        2.6 細(xì)胞內(nèi)鈣庫(kù)釋放參與S6 介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)的Ca²⁺濃度升高
    3 討論
    4 結(jié)論
第三部分 GLP-1R介導(dǎo)S6 性促進(jìn)大鼠胰島素分泌的機(jī)制研究
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 主要藥品與試劑
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        1.4 主要溶液的配制方法
        1.5 大鼠胰島組織及β細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
        1.6 CETSA驗(yàn)證GLP-1R與 S6 靶向作用
        1.7 觀察GLP-1R對(duì) S6 誘導(dǎo)的胰島素分泌的影響
        1.8 觀察S6 抑制Kv通道電流與GLP-1R的關(guān)系
2+濃度的影響">        1.9 觀察GLP-1R對(duì) S6 升高細(xì)胞內(nèi)的Ca²⁺濃度的影響
        1.10 數(shù)據(jù)處理
    2 結(jié)果
        2.1 pEX3-GLP-1R表達(dá)載體的鑒定
        2.2 TOB透析式無細(xì)胞表達(dá)體系GLP-1R蛋白的鑒定
        2.3 GLP-1R是 S6 的特異性靶標(biāo)
        2.4 S6 通過GLP-1R促進(jìn)胰島素分泌
2+濃度">        2.5 S6 通過GLP-1R增加β細(xì)胞內(nèi)的Ca²⁺濃度
        2.6 S6 通過GLP-1R抑制Kv通道電流
    3 討論
    4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]胰高血糖素樣肽1（GLP-1）對(duì)心血管疾病治療的研究進(jìn)展[J]. 蔣搖靜,李俊峰,任麗偉,王慶華.  復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2018(06)
[2]胰高血糖素樣肽-1在胃腸道中的作用及機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 嚴(yán)淋,羅和生.  胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志. 2017(08)
[3]GLP-1R結(jié)構(gòu)和功能及小分子藥物篩選研究進(jìn)展[J]. 胡中平,程念,楊帆,蘇正定.  生物技術(shù)通報(bào). 2017(02)
[4]G-蛋白偶聯(lián)受體的功能測(cè)定和高通量藥物篩選[J]. 許治良,高虹,歐陽(yáng)克清,鄭旭煦,蔡昭皙,胡應(yīng)和.  中國(guó)藥理學(xué)通報(bào). 2003(12)



本文編號(hào)：2904010