目的:在已成功制備梯度孔徑SF-CS-n HA骨軟骨支架的基礎(chǔ)上,通過(guò)復(fù)合BMP2-ADSCs和自體PRP凝膠構(gòu)建骨軟骨移植體修復(fù)比格犬膝關(guān)節(jié)骨軟骨缺損,完成移植體總體性能的檢測(cè),以期為修復(fù)骨軟骨缺損提供一種更加合適的骨軟骨移植體。方法:采用Ⅰ型膠原酶消化的方法提取比格犬ADSCs,培養(yǎng)至第3代,通過(guò)CCK-8法檢測(cè)ADSCs增殖活性,通過(guò)免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)鑒定ADSCs表面抗原的表型。探索LV-BMP2-GDF轉(zhuǎn)染ADSCs的最佳MOI值,對(duì)BMP2-ADSCs進(jìn)行傳代培養(yǎng)后通過(guò)RT-PCR檢測(cè)種子細(xì)胞中BMP-2基因水平。對(duì)比格犬靜脈血通過(guò)離心的方法制備PRP,利用牛凝血酶激活PRP為凝膠狀態(tài),利用ELISA檢測(cè)PRP凝膠中TGF-β1和PDGF-BB釋放水平。利用梯度孔徑SF-CS-n HA骨軟骨支架、BMP2-ADSCs、自體PRP凝膠構(gòu)建骨軟骨移植體,將移植體植入比格犬膝關(guān)節(jié)股骨遠(yuǎn)端滑車中央骨軟骨缺損處。將24只比格犬隨機(jī)分為A組（細(xì)胞-PRP-支架組）、B組（PRP-支架組）、C組（單純支架組）和D組（空白對(duì)照組）,A組:BMP2-ADSCs+PRP凝膠+支架;B組:PR... 

【文章來(lái)源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

%濃度SF-CS-nHA梯度孔徑支架及支架掃描電鏡

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文熊坤17圖2比格犬膝關(guān)節(jié)全層骨軟骨缺損（直徑：4mm，深度：5mm）及移植體植入后狀態(tài)Fig.2Beagledogfullthicknessosteochondraldefect(diameter:4mm,depth:5mm)andpost-implantationstate1.2.5術(shù)后各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)（1）大體觀察注射鹽酸氯胺酮處死各組術(shù)后2月、4月比格犬。沿先前手術(shù)切口逐層剖開(kāi)膝關(guān)節(jié)，暴露骨軟骨缺損模型處。觀察關(guān)節(jié)腔內(nèi)是否存在感染、組織粘連。觀察骨軟骨缺損處的修復(fù)情況，如質(zhì)地、顏色以及與周圍正常軟骨組織的整合情況。截取骨軟骨缺損修復(fù)模型及周圍正常骨軟骨，4%多聚甲醛固定1-2d，加入適量EDTA脫鈣液對(duì)樣本進(jìn)行脫鈣，每3天更換一次脫鈣溶液，脫鈣兩周左右樣本變軟。（2）影像學(xué)觀察骨質(zhì)再生在遵義醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院（遵義市第一人民醫(yī)院）影像科對(duì)A組（細(xì)胞-PRP-支架組）進(jìn)行術(shù)前、術(shù)后、術(shù)后2月、術(shù)后4月進(jìn)行X射線拍照，分析骨軟骨缺損處骨質(zhì)的修復(fù)效果。（3）移植體中BMP2-ADSCs存活情況對(duì)2個(gè)月的實(shí)驗(yàn)組比格犬行1％戊巴比妥鈉（1mL/kg）經(jīng)腹腔注射麻醉后，取仰臥位固定，備皮、碘伏消毒和鋪巾。沿先前的手術(shù)切口膝關(guān)節(jié)外側(cè)手術(shù)切口，逐層剖開(kāi)組織至關(guān)節(jié)腔，找到骨軟骨缺損修復(fù)處，用5mm環(huán)鉆將骨軟骨缺損修復(fù)處的骨軟骨取出，縫合比格犬膝關(guān)節(jié)切口。將取出后的樣本進(jìn)行涂片后迅速轉(zhuǎn)移至暗室中，用

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文熊坤202結(jié)果2.1ADSCs的提娶培養(yǎng)、鑒定和增殖結(jié)果2.1.1ADSCs的提取和培養(yǎng)比格犬脂肪組織剪碎后加入0.1%Ⅰ型膠原酶消化30min，可見(jiàn)脂肪組織幾乎被消化成糊狀時(shí)既消化完成，見(jiàn)圖3。加入完全培養(yǎng)基終止消化，無(wú)菌紗網(wǎng)過(guò)濾，離心，培養(yǎng)基重懸后種入細(xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。1d后可見(jiàn)培養(yǎng)瓶底部有單個(gè)的細(xì)胞和細(xì)胞團(tuán)貼壁，培養(yǎng)液中有較多的脂肪亮點(diǎn)。培養(yǎng)3d后，貼壁細(xì)胞較第1d增多，細(xì)胞團(tuán)周圍細(xì)胞分裂活躍，單個(gè)細(xì)胞多呈梭形、紡錘形或三角形。培養(yǎng)6天后，細(xì)胞基本鋪滿瓶底面積80%以上，細(xì)胞形態(tài)基本一致。傳代至第2代和第3代時(shí)，細(xì)胞呈漩渦狀樣或魚(yú)群樣生長(zhǎng)，生長(zhǎng)活躍，細(xì)胞形態(tài)均一，梭形和紡錘形明顯，見(jiàn)圖4。圖3脂肪粒用0.1%Ⅰ型膠原酶消化30min后的狀態(tài)Fig.3Thestateoffatgranulesafterdigestionwith0.1%collagenasetypeIfor30minutes

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：2904020