本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)染TRA2B siRNA對肺腺癌A549細(xì)胞凋亡的影響并老年肺癌病例臨床分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:TRA2B是富含有絲氨酸/精氨酸的蛋白家族成員之一,它其中一個(gè)重要的功能是參與前體mRNA的選擇性剪接,既往研究發(fā)現(xiàn)TRA2B在宮頸癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胃癌、結(jié)腸癌等多種惡性腫瘤中高表達(dá),目前已經(jīng)有以TRA2B為靶點(diǎn)的腫瘤基因治療,并且獲得了初步的成果,但是國內(nèi)外關(guān)于TRA2B基因在肺癌的研究依然很少。本實(shí)驗(yàn)通過運(yùn)用RNA干擾技術(shù),將si RNA-TRA2B成功轉(zhuǎn)染至肺腺癌A549細(xì)胞后,觀察A549細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化和對A549細(xì)胞凋亡的影響,以及TRA2B在A549細(xì)胞上的表達(dá)情況,探索TRA2B在肺癌發(fā)生中的作用,為進(jìn)一步將TRA2B作為靶點(diǎn)的肺癌基因靶向治療提供理論性的依據(jù)。分析老年肺癌患者的病例,討論影像學(xué)檢查在肺癌的早期診斷及早期治療的意義。方法:設(shè)計(jì)針對肺腺癌TRA2B基因的siRNA-TRA2B,利用脂質(zhì)體Lipofectamine TM 2000,將構(gòu)建好的siRNA-TRA2B成功轉(zhuǎn)染至肺腺癌A549細(xì)胞,運(yùn)用顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化;運(yùn)用Real-time PCR技術(shù)檢測TRA2B mRNA的表達(dá)水平,并篩選出最有效的干擾RNA;運(yùn)用Western blot技術(shù)檢測TRA2B的蛋白表達(dá)水平,并篩選出最有效的干擾RNA;選擇干擾效果最好的siRNA-TRA2B轉(zhuǎn)染,運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染siRNA-TRA2B后A549細(xì)胞的凋亡水平,運(yùn)用Western blot技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染si RNA-TRA2B后A549細(xì)胞中凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表達(dá)水平,探討轉(zhuǎn)染siRNA-TRA2B后,對Bcl-2、Bax表達(dá)的影響。通過選擇3例老年肺癌患者的病例,將影像學(xué)檢查與術(shù)后的病理結(jié)果進(jìn)行對比分析,探討影像學(xué)檢查對肺癌的早期發(fā)現(xiàn)的重要臨床價(jià)值。結(jié)果:利用脂質(zhì)體LipofectamineTM 2000,將siRNA-TRA2B成功轉(zhuǎn)染至肺腺癌A549細(xì)胞后:(1)顯微鏡下觀察A549細(xì)胞發(fā)現(xiàn):轉(zhuǎn)染前,細(xì)胞狀況良好,貼壁生長,多呈梭形,細(xì)胞質(zhì)飽滿,大小適中,核仁清晰,轉(zhuǎn)染24、48h后細(xì)胞皺縮,貼壁不佳,轉(zhuǎn)染效率達(dá)到90%以上。(2)Real-time PCR檢測TRA2B mRNA的表達(dá)水平,并篩選出干擾效果最好的siRNA,結(jié)果顯示:siRNA-TRA2B作用于A549細(xì)胞24h,48h后,TRA2B mRNA表達(dá)明顯下調(diào),而Mock組、Negative Control組及Black組的mRNA表達(dá)水平無明顯變化,同時(shí)篩選出1-TRA2B-homo-544組干擾效果最好。(3)Western blot檢測TRA2B蛋白的表達(dá)水平,并篩選出干擾效果最好的siRNA,結(jié)果顯示:siRNA-TRA2B作用于A549細(xì)胞24h,48h后,TRA2B蛋白的表達(dá)明顯下降,而Mock組、Negative Control組及Black組的蛋白表達(dá)水平無明顯變化,同時(shí)篩選出1-TRA2B-homo-544組干擾效果最好。(4)流式細(xì)胞術(shù)檢測干擾效果最好的siRNA-TRA2B組的細(xì)胞凋亡水平,結(jié)果顯示:siRNA-TRA2B組凋亡率(48.02±0.495)%,Negative Control組凋亡率(8.60±0.251)%,Mock組凋亡率(8.47±0.156)%,Black組凋亡率(9.10±0.355)%,siRNA-TRA2B組與Mock組、Negative Control組及Black組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),Mock組、Negative Control組與Black組之間兩兩比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),轉(zhuǎn)染siRNA-TRA2B后可促進(jìn)細(xì)胞凋亡。(5)Western blot技術(shù)檢測干擾效果最好的siRNA-TRA2B組的凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表達(dá)水平,結(jié)果顯示:siRNA組A549細(xì)胞中凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)水平明顯下降,Bax的表達(dá)水平明顯上升,而Mock組、Negative Control組及Black組的Bcl-2、Bax的表達(dá)水平無明顯變化。3例老年肺癌患者的影像學(xué)結(jié)果與病理結(jié)果一致,因此,影像學(xué)檢查可以作為肺癌的早期發(fā)現(xiàn)的重要手段。結(jié)論:通過應(yīng)用RNA干擾技術(shù),可下調(diào)A549細(xì)胞中TRA2B的表達(dá),抑制細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,TRA2B將有可能成為肺癌基因治療的一個(gè)新靶點(diǎn)。影像學(xué)檢查對老年病人肺癌的早期的發(fā)現(xiàn)及早期的診治有著重要的意義。
【關(guān)鍵詞】：TRA2B siRNA 肺癌 A549 細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 第一部分 基礎(chǔ)研究11-34
• 前言11-13
• 材料與方法13-19
• 結(jié)果19-26
• 討論26-30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-34
• 第二部分 臨床病例分析34-36
• 病例摘要34-35
• 討論35-36
• 綜述 SR蛋白及TRA2蛋白在惡性腫瘤研究中的進(jìn)展36-45
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 附錄45-46
• 致謝46-47

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  本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)染TRA2B siRNA對肺腺癌A549細(xì)胞凋亡的影響并老年肺癌病例臨床分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：289024