本文關(guān)鍵詞：益生菌鼠李糖乳桿菌GG菌株發(fā)酵液對(duì)酒精性肝病保護(hù)機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：酒精性肝病(Alcoholic liver disease, ALD)是指由于長(zhǎng)期大量飲酒所導(dǎo)致的一系列肝臟病變,在全球范圍內(nèi)都有著極高的發(fā)病率和致死率。長(zhǎng)期慢性的酒精攝入可引起腸道微生物菌群的嚴(yán)重失調(diào)并破壞腸道的天然屏障功能,造成腸源性?xún)?nèi)毒素在血液中含量的大幅增加,激活肝臟巨噬細(xì)胞啟動(dòng)多種促炎因子的表達(dá)以及氧化壓力的產(chǎn)生,導(dǎo)致肝臟脂肪性變性和肝細(xì)胞受損。針對(duì)調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡,增強(qiáng)腸道屏障功能,從而預(yù)防酒精性肝損傷的研究,已經(jīng)成為熱點(diǎn)。益生菌是一類(lèi)能夠?yàn)樗拗魈峁┙】敌б娴幕钚晕⑸?其能夠在腸道內(nèi)定植的特性使得益生菌在維護(hù)腸道菌群平衡,調(diào)節(jié)腸道上皮細(xì)胞緊密連結(jié)中起到至關(guān)重要的作用。實(shí)驗(yàn)室前期研究表明,鼠李糖乳桿菌GG (Lactobacillus rhamnosus GG, LGG)能夠有效抑制腸道有害細(xì)菌的過(guò)度生長(zhǎng),修復(fù)受損的腸道屏障,從而抑制酒精引起的內(nèi)毒素血癥的發(fā)生,阻斷內(nèi)毒素介導(dǎo)的肝臟脂肪化以及相應(yīng)炎癥的產(chǎn)生。盡管益生菌治療酒精性肝病的有效性已經(jīng)被越來(lái)越多的臨床試驗(yàn)所證明,但同時(shí),對(duì)于免疫力低下以及腸道功能受損的病人,采用大量活菌治療也存在一定的危險(xiǎn)性和不確定性。本論文就LGG滅活的菌株發(fā)酵上清液LGGs(Lactobacillus rhamnosus GG supernatant)對(duì)酒精性肝病是否具有保護(hù)作用以及其具體作用機(jī)制進(jìn)行了研究。通過(guò)構(gòu)建小鼠慢性酒精性肝損傷模型,對(duì)LGGs在長(zhǎng)期酒精攝入的情況下對(duì)肝臟的影響進(jìn)行探究,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,LGGs能夠有效緩解肝臟細(xì)胞的脂肪性變性,顯著抑制肝臟巨噬細(xì)胞激活的相關(guān)炎癥反應(yīng)。在對(duì)小鼠腸道樣本的分析以及血清酶學(xué)檢測(cè)中發(fā)現(xiàn),LGGs對(duì)酒精引起的腸道上皮細(xì)胞通透性的增加具有顯著抑制作用,能夠有效阻止內(nèi)毒素血癥的發(fā)生,從一定程度上預(yù)防和緩解酒精攝入引起的肝損傷。進(jìn)一步的,本課題利用人結(jié)腸癌上皮細(xì)胞系構(gòu)建酒精性腸道上皮屏障損傷模型,對(duì)LGGs降低腸道上皮細(xì)胞通透性,增強(qiáng)屏障功能的具體機(jī)制進(jìn)行探究。研究發(fā)現(xiàn),LGGs能夠通過(guò)抑制miR122a在腸道中的表達(dá),促進(jìn)腸道上皮細(xì)胞緊密連接蛋白Occludin的分泌,從而加強(qiáng)腸道上皮細(xì)胞間的屏障功能。此外,實(shí)驗(yàn)室前期研究表明,酒精攝入引起缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)的表達(dá)大幅降低,HIF是細(xì)胞缺氧適應(yīng)及炎癥發(fā)展的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。酒精導(dǎo)致由HIF介導(dǎo)的對(duì)腸粘膜的再生和修復(fù)有重要作用的腸三葉因子(ITF)的表達(dá)受阻,破壞腸道的天然屏障。而LGG被證明能夠抑制酒精對(duì)HIF表達(dá)的影響,促進(jìn)腸道杯狀細(xì)胞釋放ITR修復(fù)受損的腸道屏障。本論文對(duì)HIF所介導(dǎo)的兩個(gè)主要腸道屏障相關(guān)蛋白ITF以及Cathelin相關(guān)抗菌肽(CRAMP)的功能進(jìn)行探究,發(fā)現(xiàn)ITF能夠有效抑制血小板活化因子(PAF)引起的腸道上皮細(xì)胞通透性升高,而CRAMP則對(duì)不同種類(lèi)的細(xì)菌表現(xiàn)出選擇性抑菌作用：大腸桿菌、李斯特菌等致病菌的生長(zhǎng)被顯著抑制而LGG則生長(zhǎng)狀況良好。另外,本論文對(duì)益生菌的重要代謝產(chǎn)物短鏈脂肪酸(SCFA)家族中的丁酸(butyrate)對(duì)HIF表達(dá)的調(diào)節(jié)作用進(jìn)行初步研究,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,丁酸鹽(NaB)能夠大幅提升鐵螯合劑(DFO)誘導(dǎo)的HIF表達(dá)的升高,表明益生菌有可能通過(guò)分泌短鏈脂肪酸這一類(lèi)有益代謝物來(lái)調(diào)節(jié)腸道屏障。本研究對(duì)于更好地理解酒精性肝病致病機(jī)理以及益生菌對(duì)酒精性肝病保護(hù)作用的具體機(jī)制具有重大意義,為酒精性肝病的預(yù)防和治療提供了新的思路和手段。
【關(guān)鍵詞】：酒精性肝病 益生菌 腸上皮細(xì)胞緊密連結(jié) 缺氧誘導(dǎo)因子
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R575.5
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-12
• 英文縮略12-13
• 第一章 緒論13-22
• 1.1 酒精性肝病概況13
• 1.2 酒精性肝病發(fā)病機(jī)制13-16
• 1.2.1 酒精及其代謝產(chǎn)物引起的肝細(xì)胞損傷14
• 1.2.2 氧化應(yīng)激與脂質(zhì)過(guò)氧化14-15
• 1.2.3 腸源性?xún)?nèi)毒素介導(dǎo)的肝臟損傷15-16
• 1.3 酒精性肝病的診斷和治療16-17
• 1.3.1 傳統(tǒng)治療手段16-17
• 1.3.2 新型療法17
• 1.4 益生菌在酒精性肝病中的應(yīng)用17-19
• 1.4.1 益生菌定義17-18
• 1.4.2 益生菌在肝臟疾病中的應(yīng)用18-19
• 1.5 腸道屏障作用19-21
• 1.5.1 腸道屏障的組成19-20
• 1.5.2 miR122a對(duì)腸道屏障的調(diào)控20
• 1.5.3 缺氧誘導(dǎo)因子以及短鏈脂肪酸20-21
• 1.6 研究?jī)?nèi)容和意義21-22
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料和方法22-31
• 2.1 酒精性肝損傷以及LGGs治療酒精性肝損傷的小鼠模型的構(gòu)建22
• 2.1.1 小鼠模型的構(gòu)建22
• 2.1.2 人結(jié)腸癌細(xì)胞Caco-2細(xì)胞的培養(yǎng)22
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料22-25
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)所用菌株22-23
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器23
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑23-24
• 2.2.4 實(shí)驗(yàn)所用引物及菌株24-25
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法25-31
• 2.3.1 血液生化分析25
• 2.3.2 肝臟甘油三酯檢測(cè)25
• 2.3.3 檢測(cè)肝臟中細(xì)胞因子的含量25
• 2.3.4 肝臟病理組織學(xué)分析25-27
• 2.3.5 肝臟脂肪分析,油紅O染色27
• 2.3.6 總RNA的提取以及實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR27-28
• 2.3.7 細(xì)胞及組織中總蛋白的提取28
• 2.3.8 BCA法測(cè)蛋白濃度28-29
• 2.3.9 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot)分析29
• 2.3.10 跨上皮細(xì)胞電阻(TEER)的測(cè)定及FD-4滲透性實(shí)驗(yàn)29
• 2.3.11 熒光素酶實(shí)驗(yàn)29-30
• 2.3.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析30-31
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-44
• 3.1 LGGs在小鼠酒精肝模型中對(duì)肝臟的保護(hù)作用31-35
• 3.1.1 LGGs改善酒精喂養(yǎng)小鼠肝臟的脂肪變性31-34
• 3.1.2 LGGs有效緩解酒精引起的肝臟損傷34-35
• 3.2 LGGs對(duì)酒精引起腸道功能紊亂的影響35-39
• 3.2.1 LGGs對(duì)酒精引起的腸道滲透性變化的影響35-37
• 3.2.2 LGGs對(duì)腸道緊密連接蛋白的影響37-38
• 3.2.3 LGGs在回腸以及Caco-2細(xì)胞中對(duì)miR122a表達(dá)的影響38-39
• 3.3 缺氧誘導(dǎo)因子HIF調(diào)控的腸道屏障相關(guān)蛋白的功能研究39-44
• 3.3.1 抗菌肽CRAMP的選擇性抑菌作用39-41
• 3.3.2 腸三葉因子對(duì)Caco-2細(xì)胞腸道屏障完整性的作用41-42
• 3.3.3 丁酸對(duì)缺氧誘導(dǎo)因子的調(diào)控作用42-44
• 第四章 小結(jié)與討論44-47
• 4.1 小鼠肝臟及血清的病理分析44
• 4.2 LGGs通過(guò)抑制miR122a的表達(dá)上調(diào)Occludin表達(dá)44-45
• 4.3 缺氧誘導(dǎo)因子在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控的腸道屏障相關(guān)蛋白功能的初步研究45-47
• 參考文獻(xiàn)47-54
• 在讀期間科研成果54-55
• 致謝55

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本文編號(hào)：288829