發(fā)布時(shí)間：2020-11-16 00:56

　　 研究目的(1)探索電針“足三里”穴能否改善脊髓損傷后大鼠腸道傳輸功能和感覺(jué)功能障礙。(2)明確該電針療法對(duì)脊髓損傷大鼠腸道微生態(tài)的調(diào)節(jié)作用。方法選取成年SPF級(jí)SD雌性大鼠96只,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,采用隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行分組,抽取24只大鼠為對(duì)照組(sham,n=24),剩余大鼠采用重物墜落法建立重度脊髓損傷模型(SCI,n=72),每日對(duì)其進(jìn)行術(shù)后護(hù)理及排尿,sham組僅暴露棘突和椎板,不做脊髓損傷處理。所有造模及假手術(shù)組大鼠術(shù)后均予腹腔注射慶大霉素5000U/kg抗感染。24h后將BBB評(píng)分為0分的SCI大鼠隨機(jī)均分為3組:模型組(M,n=24)、電針組(E,n=24)和菌群移植組(FMT,n=24)。sham組和M組每日固定15min,E組每日電針“足三里”穴15min(疏密波,電流強(qiáng)度1-2m A),采集E組新鮮糞便配置成10%懸液,每日按1ml/100g體重灌胃FMT組。于實(shí)驗(yàn)結(jié)束(干預(yù)14天)后無(wú)菌操作收集各組大鼠新鮮糞便,進(jìn)行菌群16Sr DNA測(cè)序和生物信息學(xué)分析各組菌群分布情況,記錄大鼠24h排便量(濕重、干重和含水量),計(jì)算首粒黑便排出時(shí)間,行腸道敏感性測(cè)試,并取其結(jié)腸進(jìn)行HE染色觀察其病理形態(tài)學(xué)改變。結(jié)果1.重度脊髓損傷的大鼠模型建立重物墜落法建立模型72只,術(shù)后24h的BBB評(píng)分均為0分,較sham組,神情倦態(tài),均伴有尿失禁、尿潴留現(xiàn)象,部分出現(xiàn)膿尿及血尿。表明重度脊髓損傷模型均造模成功。2.電針及菌群移植對(duì)腸道傳輸功能影響在濕重上,sham組與FMT組間無(wú)顯著差異(p=0.07),FMT組明顯多余M組(p=0.046);在含水量上,E組與FMT組均顯著大于M組(均為p0.001);首例黑便時(shí)間,E組與FMT組均顯著短于M組(均為p0.001),且E組也顯著短于sham組(p=0.011)。3.電針及菌群移植對(duì)腸道感覺(jué)功能的影響四組間在腹壁撤離反射評(píng)分中均無(wú)顯著差異(均為p0.05);4.電針及菌群移植對(duì)結(jié)腸病理改變的影響HE染色后光鏡下放大100倍及200倍結(jié)果顯示,在形態(tài)學(xué)上,M組腺體排列不規(guī)整,肌層變薄并有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。E組與FMT組類似,均較M組織形態(tài)學(xué)出現(xiàn)明顯改善,腺體排列更規(guī)整,數(shù)量更多,肌層更厚,僅出現(xiàn)輕度肌層萎縮和少量炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)。5.電針及菌群移植對(duì)菌群改變的影響16Sr DNA的結(jié)果顯示,各組樣本取量足夠;使用Shannon指數(shù),Simpson指數(shù),Ace指數(shù)和Chao1指數(shù)進(jìn)行各組間腸道菌群各組比較,各組豐度及均勻度方面無(wú)明顯差別,均P0.05;但各組間菌落結(jié)構(gòu)組成均具有顯著性差異,Beta多樣性指數(shù)顯示,sham組與E組、sham與FMT組組間菌落有顯著性差異(P0.001),M組與E組,M組與FMT組組間菌落有顯著性差異(P0.001),其余各組無(wú)明顯差異;各組間菌落分布在門(mén)、綱、屬水平上菌群組成結(jié)構(gòu)上差異性顯著:其中電針和菌群干預(yù)在門(mén)水平可提高黑色素細(xì)菌門(mén)豐度,降低變形菌門(mén)和放線菌門(mén)的豐度,在綱水平上可有效減少γ-變形菌綱所占比例,但在屬水平上,電針及糞菌移植可能通過(guò)進(jìn)一步調(diào)整布勞蒂亞屬(Blautia)、杜氏桿菌屬(Dubosiella)和桿菌屬(Bacteroides)、桿菌屬(Bacteroides)、阿克曼屬(Akkermansia)及乳酸桿菌屬(Lactobacillus)等菌落豐度從而影響腸道功能。結(jié)論(1)電針“足三里”穴能夠顯著的改善脊髓損傷后腸道的運(yùn)動(dòng)能力,引發(fā)形態(tài)學(xué)的良性變化,形態(tài)學(xué)結(jié)果與行為學(xué)結(jié)果具有一致性。(2)電針療法及其菌群可能通過(guò)改變脊髓損傷后腸道菌群的菌落結(jié)構(gòu)組成,從而改善腸道傳輸功能。
【學(xué)位單位】：上海體育學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2020
【中圖分類】：R245
【部分圖文】：

電針對(duì)重度脊髓損傷大鼠排便功能及腸道微生態(tài)調(diào)節(jié)作用的研究12圖1實(shí)驗(yàn)流程圖3.5實(shí)驗(yàn)方案3.5.1重度脊髓損傷大鼠模型建立方案將大鼠分為兩組，假手術(shù)處理的假手術(shù)組(sham,n=24)和脊髓損傷手術(shù)造模組(spinalcordinjurygroup,SCI,n=72)。所有大鼠腹腔注射3%戊巴比妥鈉，麻醉后剃毛，暴露背部T10至T13附近皮膚。將大鼠固定于手術(shù)臺(tái)，暴露背部進(jìn)行碘伏消毒。sham組大鼠切開(kāi)背部體表皮膚，使用止血鉗鈍性分離淺筋膜，僅在空氣中暴露T10至T13處棘突和椎板5min，直接縫合。慶大霉素購(gòu)于華潤(rùn)雙鶴利民藥業(yè)有限公司，H3702116。脊髓損傷手術(shù)造模組采用重物墜落法參考ThomasAJ等人[78]的方法，使用NYUImpactorI型脊髓撞擊裝置(儀器購(gòu)于美國(guó)w.m.keckcenter)進(jìn)行造模。步驟同上，咬除T11-T12之間椎板，形成骨窗。安裝NYUImpactorI型裝置，采用10g物重，從高度60mm處自由下落撞擊，對(duì)暴露骨窗處形成撞擊，造成脊髓的完全性損傷。撞擊時(shí)可見(jiàn)大鼠尾巴突然甩動(dòng)，下肢突然抽搐，而后肌肉疲軟呈軟癱狀。無(wú)菌小棉球壓迫止血后，依次縫合肌肉層，皮層，傷口浸潤(rùn)硫酸慶大霉素后將大鼠安置于動(dòng)物電熱毯上，待其完全蘇醒后放置籠內(nèi)飼養(yǎng)。3.5.2術(shù)后評(píng)價(jià)模型方案造模結(jié)束24h后，由兩位實(shí)驗(yàn)員獨(dú)立進(jìn)行Basso-Beattie-Bresnahan評(píng)分即BBB評(píng)分：將老鼠放置在空曠地面上，地面干凈不潮濕，讓其自然爬行，觀察老

aAWR評(píng)分0分/1分(大鼠無(wú)反應(yīng)為

bAWR評(píng)分2分
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2885424