目的:黨參是一種常用的補(bǔ)益藥,具有補(bǔ)中益氣、健脾益肺等功效,多以飲片形式應(yīng)用于組方調(diào)劑與中醫(yī)臨床治療中。中藥飲片劃分規(guī)格等級是便于市場交易的一種重要手段,而目前市場中黨參飲片等級劃分標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一,導(dǎo)致市場流通混亂、黨參飲片質(zhì)量參差不齊。本文通過對黨參飲片進(jìn)行等級研究,建立黨參飲片商品等級標(biāo)準(zhǔn);通過不同等級黨參飲片的質(zhì)量對比研究,制訂黨參飲片的等級質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);通過對黨參生品與炮制品中多種有效成分含量測定,研究炮制對黨參有效成分含量的影響。方法:1.通過查閱2015年版《中國藥典》及國家和各地方炮制規(guī)范,確定研究對象黨參飲片包括黨參片及米炒黨參;查閱《76種藥材商品規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)》、《200種中藥材商品電子交易規(guī)格等級標(biāo)準(zhǔn)》、《中藥商品學(xué)》及相關(guān)書籍,考察黨參飲片主產(chǎn)區(qū)山西、甘肅等地,以及河北安國、安徽亳州、哈爾濱三顆樹等中藥材及飲片市場,對黨參飲片產(chǎn)區(qū)分布、等級劃分情況進(jìn)行調(diào)查,并收集不同產(chǎn)地、不同等級的黨參飲片作為實(shí)驗(yàn)樣品。在黨參飲片外觀性狀研究部分,對樣品的直徑、厚度、質(zhì)量、雜質(zhì)含量等性狀可量化指標(biāo)進(jìn)行測定,并采用變異性分析、相關(guān)性分析及單因素方差分析等多種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法,分析出黨參飲片商品等級與外觀性狀指標(biāo)之間是否具有相關(guān)性,并篩選出黨參飲片等級劃分的外觀性狀指標(biāo),建立黨參飲片商品等級標(biāo)準(zhǔn)。2.參照2015年版《中國藥典》,對收集的黨參飲片(黨參片及米炒黨參)進(jìn)行了顯微鑒別及薄層鑒別;參照2015年版《中國藥典》(一部)附錄和第四部通則規(guī)定方法,對黨參飲片進(jìn)行常規(guī)檢查(包括水分、總灰分和醇溶性浸出物),并采用相關(guān)性分析、單因素方差分析對不同等級黨參片的水分、灰分、浸出物進(jìn)行對比研究,比較不同產(chǎn)地黨參飲片、黨參片與米炒黨參水分、總灰分、浸出物之間的差異性,并分別擬訂黨參片、米炒黨參的水分、總灰分、浸出物的限度。在本課題組前期研究基礎(chǔ)上,采用紫外-可見分光光度法,于490 nm條件下下,測定黨參飲片的黨參多糖含量;并采用相關(guān)性分析、單因素方差分析對不同等級黨參片、黨參片與米炒黨參的黨參多糖含量進(jìn)行對比研究,分別擬訂黨參片、米炒黨參的多糖含量限度。在本課題組前期研究基礎(chǔ)上,采用HPLC法進(jìn)行黨參飲片(黨參片及米炒黨參)特征圖譜研究,并進(jìn)行方法學(xué)考察,包括穩(wěn)定性、精密度、重復(fù)性;分別建立黨參片及米炒黨參對照特征圖譜,并進(jìn)行特征峰指認(rèn);比較不同等級、不同產(chǎn)地、不同炮制品黨參飲片HPLC特征圖譜,建立黨參飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。3.通過黨參飲片HPLC特征圖譜研究及文獻(xiàn)研究,選擇黨參中含量或相對峰面積變化與產(chǎn)地、等級、炮制相關(guān)的有效成分(紫丁香苷、黨參苷Ⅰ、黨參炔苷、蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅲ),建立了多指標(biāo)同時測定的HPLC含量測定方法;以黨參飲片為研究對象,并采用相關(guān)性分析、單因素方差分析對測定結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,從化學(xué)成分的角度探索米炒炮制對黨參中有效成分含量的影響。結(jié)果:1.通過文獻(xiàn)及市場調(diào)研發(fā)現(xiàn),黨參飲片等級文獻(xiàn)調(diào)研結(jié)果為:(1)以直徑、厚度、是否熏硫?yàn)橹笜?biāo)劃分多個規(guī)格和等級:包括黨參寸節(jié)(4個等級)、黨參無硫寸節(jié)(4個等級)、黨參選片(4個等級)、黨參無硫選片(4個等級);(2)以直徑劃分等級:一等(直徑0.8 cm-1.6 cm)、二等(直徑0.6 cm-1.4 cm)、三等(直徑0.4 cm-1.2 cm),并以厚度劃分為黨參厚片或黨參短段,或以不同毫米孔眼的篩子篩分;市場調(diào)研結(jié)果是:黨參片以直徑為劃分依據(jù),劃分為:精選(直徑0.8 cm以上)、大選(0.6 cm-0.8 cm)、中選(0.4 cm-0.6 cm)、小選(0.3 cm-0.4cm)及統(tǒng)貨(不經(jīng)過篩選);米炒黨參多為統(tǒng)貨。本課題組共收集98批(黨參片67批、米炒黨參31批)不同等級、不同產(chǎn)地黨參飲片樣品。本實(shí)驗(yàn)參考《200種中藥材商品電子交易規(guī)格等級標(biāo)準(zhǔn)》、各地方中藥炮制規(guī)范及相關(guān)文獻(xiàn),并結(jié)合市場實(shí)際現(xiàn)狀,選取直徑、厚度2個可量化性狀指標(biāo)(觀察每批樣品無霉變、泛油情況),通過變異性分析、相關(guān)性分析、單因素方差分析、柱狀圖、及統(tǒng)計(jì)描述等統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法,確定黨參飲片直徑、厚度可作為其等級劃分的外觀性狀指標(biāo);并按照均值計(jì)算,黨參飲片商品等級標(biāo)準(zhǔn)擬訂為:黨參片或段:黨參厚片:厚度2-4 mm;黨參短段:厚度5-10 mm一級(大選):直徑0.6 cm以上,無蟲蛀、霉變;二級(中選):直徑0.4 cm以上,無蟲蛀、霉變;三級(小選):直徑0.3 cm以上,無蟲蛀、霉變;統(tǒng)貨:直徑大小均有,無蟲蛀、霉變。米炒黨參:米炒黨參厚片:厚度2-4 mm,無蟲蛀、霉變;米炒黨參短段:厚度5-10 mm,無蟲蛀、霉變。2.本課題組所收集黨參飲片(黨參片或段、米炒黨參)基原均為桔梗科植物黨參Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.。黨參片或段以及米炒黨參橫切面:木栓細(xì)胞數(shù)列至十?dāng)?shù)列,外側(cè)有單個或成群的石細(xì)胞。栓內(nèi)層窄,細(xì)胞略呈長梭形。韌皮部寬廣,乳汁管群常與篩管群相伴徑向排列,外側(cè)常與周圍環(huán)繞的薄壁細(xì)胞形成團(tuán)狀分布,約占韌皮部的1/2;乳汁管內(nèi)充滿黃色顆粒狀物。形成層明顯,成環(huán)。木質(zhì)部導(dǎo)管呈放射狀排列,約占根的1/3~2/3。薄壁細(xì)胞含菊糖,呈扇形、類圓形或不規(guī)則形,表面可見放射狀紋理,淀粉粒。黨參片或段以及米炒黨參均以菊糖、石細(xì)胞、乳汁管、木栓細(xì)胞、梯形或網(wǎng)紋導(dǎo)管等為粉末鑒別的主要特征。薄層鑒別以黨參炔苷為對照品,在硅膠G薄層板上以正丁醇–冰醋酸–水(7:1:0.5)為展開劑,以10%硫酸乙醇溶液為顯色劑,在90℃條件下加熱至顯色清晰,分別置于日光和紫外光燈(365 nm)下檢視。建立了黨參飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的顯微鑒別項(xiàng)及薄層鑒別項(xiàng)。按照2015年版《中國藥典》四部通則規(guī)定方法測定黨參飲片(67批黨參片或段、31批米炒黨參)的水分、總灰分、醇溶性浸出物;基于課題組前期研究,對黨參飲片的黨參多糖含量進(jìn)行測定。黨參片或段水分為8.56%~15.81%,總灰分2.65%~5.81%,醇溶性浸出物63.08%~80.40%,多糖含量10.02%~25.78%;米炒黨參水分5.05%~12.40%,總灰分2.75%~5.61%,醇溶性浸出物51.30%~75.38%,多糖含量4.47%~30.13%。且按照均值±20%,及樣品合格率在80%以上原則,提出了黨參片或段質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中水分不得過13.0%,總灰分不得過5.0%,浸出物含量不得少于55.0%,多糖含量不得少于12.0%;米炒黨參質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中水分不得過10.0%,總灰分不得過5.0%,浸出物含量不得少于55.0%,多糖含量不得少于12.0%。建立了黨參飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的檢查項(xiàng)與含量測定項(xiàng)。建立黨參飲片HPLC特征圖譜,以5號峰(黨參炔苷)為參照峰,分別確定7個特征峰的相對保留時間為:0.26(1號峰)、0.39(2號峰)、0.51(3號峰)、0.66(4號峰)、1.00(5號峰)、1.02(6號峰)、1.30(7號峰);并通過對照品加入法,對黨參飲片特征圖譜中的特征峰進(jìn)行指認(rèn),共指認(rèn)出5個特征峰:1號峰為codonopyrrolidium B,3號峰為京尼平苷,4號峰為黨參苷I,5號峰為黨參炔苷,7號峰為蒼術(shù)內(nèi)酯III。黨參片(或段)等級間比較,大選與統(tǒng)貨的1號峰相對峰面積之間有顯著性差異,大選與小選的3號峰相對峰面積有顯著性差異;黨參片(或段)產(chǎn)地間比較不同產(chǎn)地的1號、2號、3號、7號峰相對峰面積具有一定差異;米炒黨參產(chǎn)地間比較,貴州(引種潞黨參)米炒黨參的1號、2號、6號、7號峰的相對峰面積與山西、甘肅均有顯著性差異,山西與甘肅無顯著性差異;黨參片(或段)和米炒黨參比較,1號、6號峰相對峰面積具有著性差異。建立黨參飲片商品等級標(biāo)準(zhǔn),并已提交。3.建立HPLC法同時測定紫丁香苷、黨參苷I、黨參炔苷、蒼術(shù)內(nèi)酯III,方法學(xué)考察結(jié)果:紫丁香苷在0.25μg/mL~6.67μg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,回歸方程為Y=119120X-10886(r=0.9995,n=6),平均加樣回收率為98.55%;黨參苷I在20.00μg/mL~400.00μg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,回歸方程為Y=20288X-98945(r=0.9998,n=6),平均加樣回收率為102.56%;黨參炔苷在15.00μg/mL~300.00μg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,回歸方程為Y=24690X+249436(r=0.9996,n=6),平均加樣回收率為101.81%;蒼術(shù)內(nèi)酯III在0.39μg/mL~23.50μg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,回歸方程為Y=44256X-10755(r=0.9998,n=6),平均加樣回收率為97.32%。7批黨參片或段測定結(jié)果:紫丁香苷含量0.0112 mg/g~0.0222 mg/g,黨參苷I含量0.4887 mg/g~1.1379 mg/g,黨參炔苷含量0.2281 mg/g~0.4304 mg/g,蒼術(shù)內(nèi)酯III含量0.0257 mg/g~0.0877 mg/g;7批米炒黨參測定結(jié)果:紫丁香苷含量0.0149 mg/g~0.0350 mg/g,黨參苷I含量0.4825 mg/g~1.13743 mg/g,黨參炔苷含量0.2262 mg/g~0.5177 mg/g,蒼術(shù)內(nèi)酯III含量0.0222 mg/g~0.1072mg/g。測定結(jié)果表明:黨參米炒后紫丁香苷、黨參苷I、黨參炔苷含量有所升高,而蒼術(shù)內(nèi)酯III含量有所降低。結(jié)論:1.通過文獻(xiàn)研究、產(chǎn)地調(diào)研及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果分析,參考《200種中藥材商品電子交易規(guī)格等級標(biāo)準(zhǔn)》及各地方炮制規(guī)范及標(biāo)準(zhǔn),并結(jié)合市場情況,通過SPSS統(tǒng)計(jì)分析,篩選黨參飲片的直徑、厚度作為等級劃分的外觀性狀指標(biāo),初步建立了黨參飲片商品等級標(biāo)準(zhǔn)。本研究制訂的商品等級標(biāo)準(zhǔn)緊密結(jié)合黨參飲片市場實(shí)際,具有一定的實(shí)用性、科學(xué)性,對當(dāng)下市場中黨參飲片等級評價有一定的指導(dǎo)意義。2.對收集的98批黨參飲片(67批黨參片或段、31批米炒黨參)進(jìn)行顯微鑒別、薄層鑒別、常規(guī)檢查(水分、總灰分、浸出物)、多糖含量測定及特征圖譜研究;并通過SPSS統(tǒng)計(jì)分析,以各研究項(xiàng)目為指標(biāo),建立黨參飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。此標(biāo)準(zhǔn)在2015年版《中國藥典》的基礎(chǔ)上增加了黨參多糖含量測定項(xiàng)以及HPLC特征圖譜項(xiàng),從而對黨參飲片進(jìn)行更加科學(xué)、綜合、全面的質(zhì)量控制。3.建立并采用HPLC法對14批黨參飲片中的有效成分(紫丁香苷、黨參苷Ⅰ、黨參炔苷、蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅲ)進(jìn)行含量測定,該方法具有良好的準(zhǔn)確性、專屬性和可行性;測定及比較研究結(jié)果為評價黨參飲片的質(zhì)量及探索米炒炮制對黨參中有效成分含量的影響提供理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2020
【中圖分類】：R284.1
【部分圖文】：

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文152.3.1.3.4黨參片厚度統(tǒng)計(jì)分析黨參片性狀指標(biāo)測量結(jié)果表明，飲片厚度均值為6.67mm，范圍為1.28mm-18.74mm，大多數(shù)不符合2015年版《中國藥典》一部黨參飲片項(xiàng)下切厚片（2-4mm）的規(guī)定。課題組前期調(diào)研結(jié)果顯示，市場上通常以厚度為指標(biāo)將黨參片劃分為“黨參片”、“黨參段”和“黨參寸節(jié)”3種規(guī)格[29]，因此，運(yùn)用SPSSv20.0統(tǒng)計(jì)軟件對黨參片的厚度作統(tǒng)計(jì)描述及頻數(shù)分布直方圖，結(jié)果見圖1-1。圖1-1黨參片厚度頻數(shù)分布直方圖統(tǒng)計(jì)描述顯示，厚度符合2015年版《中國藥典》規(guī)定的黨參片樣本數(shù)量僅占總樣本量的10.9%，占總樣本量80%的厚度范圍為3.89mm~10.29mm，占總樣本量90%的厚度范圍為3.35mm~11.77mm，由此可見，目前市場上黨參片厚度大部分不符合藥典規(guī)定。根據(jù)數(shù)據(jù)范圍，查閱歷版《中國藥典》和各地方炮制標(biāo)準(zhǔn)發(fā)現(xiàn)（如表1-8、1-9所示），1963年、1977年版《中國藥典》中規(guī)定黨參飲片“切段或切片”，而自1985年版開始修改為“切厚片”；且多部地方炮制規(guī)范中均保留了黨參飲片“切段”的炮制方法。綜上所述，根據(jù)市場實(shí)際情況與數(shù)據(jù)分析，為了有利于市場監(jiān)管和標(biāo)準(zhǔn)施行，建議在黨參飲片項(xiàng)下加入“黨參段”的規(guī)格。

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文26圖2-1黨參片（或段）木栓層外側(cè)石細(xì)胞10×20圖2-2黨參片（或段）乳汁管10×4圖2-3黨參片（或段）乳汁管10×40圖2-4黨參片（或段）菊糖10×40圖2-5黨參片（或段）韌皮部外側(cè)10×4圖2-6黨參片（或段）木質(zhì)部10×10圖注：Ck，corktissue木栓組織；C，cortex皮層；Ph，phloem韌皮部；Ca，cambium形成層；Xy，xylem木質(zhì)部；La，laticifer乳汁管；V，vessel導(dǎo)管米炒黨參：同黨參片（或段）。LaPhCkCCavXy

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文26圖2-1黨參片（或段）木栓層外側(cè)石細(xì)胞10×20圖2-2黨參片（或段）乳汁管10×4圖2-3黨參片（或段）乳汁管10×40圖2-4黨參片（或段）菊糖10×40圖2-5黨參片（或段）韌皮部外側(cè)10×4圖2-6黨參片（或段）木質(zhì)部10×10圖注：Ck，corktissue木栓組織；C，cortex皮層；Ph，phloem韌皮部；Ca，cambium形成層；Xy，xylem木質(zhì)部；La，laticifer乳汁管；V，vessel導(dǎo)管米炒黨參：同黨參片（或段）。LaPhCkCCavXy
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2883339