紫河車(PlacentaHominis)是經(jīng)過加工過后的人體胎盤,又稱為胞衣等。紫河車的藥用歷史可以追述有幾百年,且其使用于當(dāng)下在不停的發(fā)展中,古今使用史均證明其在臨床上有較好的療效。正因?yàn)槿绱?加上作為中藥材紫河車來源的特殊性,近年來其市場價格也是水漲船高。不少非法分子用豬、牛、羊來源的胎盤充當(dāng)紫河車,同時還有摻假及炮制不當(dāng)所導(dǎo)致的鹽、淀粉、糖、重金屬含量過高,血液清洗不徹底,還有來自于攜帶病毒產(chǎn)婦的胎盤等現(xiàn)象,給市場和患者帶了極其惡劣的影響。而現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)只有簡單的性狀描述,完全達(dá)不到甄別優(yōu)劣的目的。因此有必要進(jìn)行對其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行全面的提高。本文對15批紫河車分別進(jìn)行了性狀、鑒別(顯微、薄層、HPLC、SDS-PAGE)、檢查(水分、總灰分、豬牛羊摻偽、病毒、重金屬及有害元素)、含量測定(總氮量、孕酮、人絨毛促性腺激素)研究,實(shí)驗(yàn)研究表明,顯微鑒別、薄層鑒別、HPLC鑒別和SDS-PAGE鑒別都未能有效顯示正品紫河車和常見豬胎盤、牛胎盤、羊胎盤偽品的區(qū)別。而進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR法對紫河車進(jìn)行定性鑒別,并采用對照藥材作為隨行對照,結(jié)果證明,紫河車正品和常見豬胎盤、牛胎盤、羊胎盤偽品都能夠得到有效的區(qū)分,且重現(xiàn)性較好,因此將其列入標(biāo)準(zhǔn)草案;分別采用酶標(biāo)法檢查乙肝病毒、酶聯(lián)免疫法檢查艾滋病毒抗體和甲肝抗體,其結(jié)果都能夠正常反應(yīng)所檢紫河車藥材的真實(shí)情況。同時根據(jù)實(shí)驗(yàn)所測數(shù)據(jù),也對水分、總灰分以及重金屬及有害元素等四項(xiàng)常規(guī)檢查項(xiàng)進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)擬定。在采用微粒子酶促化學(xué)發(fā)光法對紫河車藥材中的人絨毛膜促性腺激素(βhCG)和孕酮的含量測定研究中結(jié)果顯示,此法所測得紫河車中的βhCG水平乘次不齊,且不穩(wěn)定,所以此項(xiàng)測定不適用于建立標(biāo)準(zhǔn)。相比較而言,使用同樣的檢測方法對紫河車中成分穩(wěn)定的孕酮進(jìn)行測定研究時發(fā)現(xiàn),其在藥材中的含量相對穩(wěn)定,重現(xiàn)性好,靈敏度高,可以列入標(biāo)準(zhǔn)。
【學(xué)位單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R284.1
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 紫河車的化學(xué)成分及藥理作用
    1.2 紫河車的療效及臨床應(yīng)用
        1.2.1 激素樣作用
        1.2.2 免疫調(diào)節(jié)作用
        1.2.3 抗感染作用
        1.2.4 營養(yǎng)和生長因子作用
        1.2.5 抗缺氧耐疲勞作用
    1.3 紫河車質(zhì)量控制研究現(xiàn)狀（現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)、歷史沿革、已有研究）
        1.3.1 現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)
        1.3.2 歷史沿革
        1.3.3 已有研究
    1.4 紫河車目前市場情況和面臨的問題
    1.5 檢測方法的介紹
    參考文獻(xiàn)
第二章 紫河車的性狀
第三章 紫河車的鑒別
    3.1 顯微鑒別研究
    3.2 薄層色譜鑒別研究
        3.2.1 儀器及試藥
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法及內(nèi)容
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.3 HPLC法對紫河車鑒別的研究
        3.3.1 儀器與試藥
        3.3.2 色譜條件
        3.3.3 樣品溶液的制備
    3.4 SDS-PAGE電泳鑒別研究
        3.4.1 儀器與試藥
        3.4.2 蛋白提取過
        3.4.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線定蛋白
        3.4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.5 TaqMan real-time PCR法鑒別研究
        3.5.1 儀器與試藥
        3.5.2 DNA的提取
        3.5.3 實(shí)時熒光定量PCR反應(yīng)
        3.5.4 結(jié)果
    3.6 基于COI序列的DNA條形碼的鑒定研究
        3.6.1 DNA的提取
        3.6.2 COI引物合成
        3.6.3 PCR擴(kuò)增（50μL體系）
        3.6.4 基因測序
        3.6.5 數(shù)據(jù)處理
        3.6.6 討論
    參考文獻(xiàn)
第四章 檢查項(xiàng)
    4.1 水分測定（烘干法）
    4.2 總灰分測定
    4.3 病毒的定性檢測研究
        4.3.1 酶標(biāo)法檢測乙肝病毒表面抗原
        4.3.2 酶標(biāo)法檢測甲肝病毒抗體和人類免疫缺陷病毒抗體
        4.3.3 酶標(biāo)法檢測人類免疫缺陷病毒HIV1/HIV2抗體
    4.4 TaqMan real-time PCR法檢測豬、牛、羊摻偽品
        4.4.1 材料與實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
        4.4.2 主要試劑及儀器
        4.4.3 樣品溶液的制備
        4.4.4 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
        4.4.5 討論
    4.5 異常摻入物（鎂鹽、鋁鹽、淀粉、糖）檢查方法研究
    4.6 ICP-MS法檢測重金屬及有害元素
        4.6.1 儀器與試藥
        4.6.2 溶液的制備
        4.6.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
        4.6.4 供試品溶液的制備
        4.6.5 測定方法
        4.6.6 方法學(xué)考察
        4.6.7 樣品測定
        4.6.8 結(jié)果與討論
    參考文獻(xiàn)
第五章 紫河車的含量測定
    5.1 總氮量測定
        5.1.1 儀器及試藥
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
        5.1.3 方法學(xué)考察
        5.1.4 討論
    5.2 微粒子酶免化學(xué)發(fā)光法（CMIA）檢測人絨毛膜促性腺激素及孕酮的含量
        5.2.1 儀器與試藥
        5.2.2 供試品溶液的制備
        5.2.3 質(zhì)控品使用前的準(zhǔn)備
        5.2.4 測定方法
        5.2.5 測定結(jié)果
            5.2.5.1 人絨毛膜促性腺激素標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性回歸方程
            5.2.5.2 樣品的人絨毛膜促性腺激素含量測定
            5.2.5.3 孕酮的定標(biāo)準(zhǔn)曲線
            5.2.5.4 樣品的孕酮含量測定
        5.2.6 方法學(xué)考察
            5.2.6.1 提取液的選擇
            5.2.6.2 精密度實(shí)驗(yàn)
            5.2.6.3 靈敏度實(shí)驗(yàn)
        5.2.7 討論
創(chuàng)新與展望
參考文獻(xiàn)
附錄 紫河車藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案
致謝

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2877955