目的:為探究中藥昆蟲九香蟲的有效成分,通過九香蟲的小分子化合物分離純化及其對(duì)錳損傷后TM4細(xì)胞的干預(yù)作用研究,進(jìn)一步驗(yàn)證PI3K/c-Src/FAK信號(hào)通路在支持細(xì)胞損傷中的作用。方法:1.采用傳統(tǒng)中藥提取、高效液相色譜、硅膠柱色譜等分離方法對(duì)九香蟲小分子化合物進(jìn)行分離純化。2.采用MTS法檢測(cè)氯化錳溶液對(duì)細(xì)胞損傷的IC50和九香蟲小分子化合物對(duì)細(xì)胞是否有毒性作用,以及九香蟲小分子化合物干預(yù)錳致TM4細(xì)胞損傷后的存活率。3.采用TUNEL法檢測(cè)九香蟲小分子化合物干預(yù)錳致TM4細(xì)胞損傷前后的凋亡率。4.采用劃痕法和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)九香蟲小分子化合物干預(yù)錳致TM4細(xì)胞損傷前后的細(xì)胞遷移情況。5.采用免疫熒光、Western Blot檢測(cè)PI3K/c-Src/FAK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:1.從九香蟲中分離出15種單體化合物,其中多巴胺衍生物5種,甘油酯類化合物1種,生物堿類化合物2種,酸類化合物3種,氨基酸類化合物2種,核苷酸類化合物1種和核苷類化合物1種�；衔�1為一種新的多巴胺衍生物。2.本研究分離得到的九香蟲小分子化合物5可以提高錳致TM4細(xì)胞損傷的存活率以及降低其凋亡率。3.本研究分離得到的九香蟲小分子化合物5可以改善錳損傷后TM4細(xì)胞的遷移能力。4.九香蟲化合物5可以增加錳損傷的支持細(xì)胞PI3K/c-Src/FAK信號(hào)通路上FAK以及相關(guān)緊密連接蛋白Occludin、Claudin-1蛋白的表達(dá),并降低Src蛋白的表達(dá)。結(jié)論:1.從九香蟲中分離出15種單體化合物,其中4種化合物是九香蟲中的未知成分,包括1種新的多巴胺衍生物。2.九香蟲中分離出的化合物5可以改善錳導(dǎo)致的TM4細(xì)胞損傷,其作用機(jī)制與PI3K/c-Src/FAK信號(hào)通路有關(guān)。
【學(xué)位單位】：遵義醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2020
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士論文徐天天9圖1-1九香蟲小分子化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式Figure1-1ChemicalstructuresofthesmallmolecularcompoundsfromCotidiuschinensis

巴胺衍生物[14]。H-6到C-1"、H-8到C-1"（δC198.7）、H-2"到C-1"和H-2"到C-7的HMBC關(guān)聯(lián)（圖2）證實(shí)了羰基位于C-1"。H-2與C-8a的HMBC關(guān)聯(lián)表明C-2和C-8a存在一個(gè)環(huán)氧橋，H-3與C-4a的HMBC關(guān)聯(lián)推斷出C-3和C-4a存在另一個(gè)環(huán)氧橋，H-3與C-3a（δC173.4）的HMBC關(guān)聯(lián)表明C-1存在乙酰氨基。H-2/H-3（J=7.3hz）的鄰端耦合常數(shù)與molossusamideA[14]的結(jié)果一致，表明存在反式-H-2/H-3關(guān)系�；衔�1的絕對(duì)構(gòu)型為2S，3R，這是基于其圓二色性（CD）光譜在286nm處的科頓效應(yīng)[15]。因此，化合物1的結(jié)構(gòu)被建立并命名為cotidioneA.。圖1-2化合物1的HMBC相關(guān)Figure1-2KeyHMBCofcompound1

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士論文徐天天26圖2-1多巴胺衍生物對(duì)TM4細(xì)胞存活率的影響。注：*表示與空白組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。表2-7多巴胺衍生物對(duì)TM4細(xì)胞存活率的影響(±,n=6)Table2-7EffectofdopaminederivativesonTM4cellsurvival(±,n=6)化合物濃度(μg/ml)化合物1化合物2化合物3化合物4化合物50100.000±0.0000100.000±0.0000100.000±0.0000100.000±0.0000100.000±0.00002.594.355±12.609288.403±6.2669*99.331±5.661592.363±18.920995.387±17.5977596.267±11.472489.175±8.0017*95.179±5.995094.978±5.016896.711±3.24491099.318±5.7319101.939±7.481996.227±7.4753109.372±3.4080*104.150±6.61892094.558±5.0325101.481±11.012996.580±16.1629100.981±9.8246100.760±8.8621
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2876385