目的:探討mi R-20a的表達(dá)水平對(duì)宮頸癌細(xì)胞siha遷移與侵襲的影響,并且進(jìn)一步研究mi R-20a與下游靶基因DOCK4之間的關(guān)系以及mi R-20a的表達(dá)水平對(duì)DOCK4表達(dá)的影響,研究mi R-20a與宮頸癌發(fā)生發(fā)展之間的可能機(jī)制。方法:培養(yǎng)宮頸癌細(xì)胞Siha,通過轉(zhuǎn)染mi R-20a mimics以及mi R-20a inhibitor構(gòu)建mi R-20a的高、低表達(dá)模型,先進(jìn)行oligo的細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率,然后通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測宮頸癌細(xì)胞Siha的遷移、侵襲能力的變化。另外,生物學(xué)信息分析mi R-20a的下游靶基因,然后培養(yǎng)宮頸癌細(xì)胞Hela,先分別進(jìn)行oligo、質(zhì)粒的細(xì)胞效率評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)染,通過構(gòu)建雙熒光酶報(bào)告基因載體后行雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測來驗(yàn)證下游靶基因與mi R-20a的結(jié)構(gòu)性結(jié)合作用,同時(shí)利用Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測靶基因DOCK4蛋白水平的表達(dá)。結(jié)果:1.細(xì)胞轉(zhuǎn)染后,各組細(xì)胞中mi R-20a相關(guān)序列的轉(zhuǎn)染效率達(dá)到70%以上,與mimics NC組相比,mi R-20a mimics組的細(xì)胞遷移能力升高(P=0.025),侵襲能力上升(P=0.018);而與inhibitor NC組相比,mi R-20a inhibitor組的細(xì)胞遷移能力降低(P=0.023,侵襲能力下降(P=0.032);2.經(jīng)生物信息學(xué)分析預(yù)測DOCK4為mi R-20a的潛在靶點(diǎn)之一,用雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)對(duì)其驗(yàn)證顯示,共轉(zhuǎn)染野生型DOCK4-Wt報(bào)告載體和mi R-20a mimics時(shí),細(xì)胞熒光素酶活性明顯被抑制;而共轉(zhuǎn)染突變型DOCK4-Mut報(bào)告載體和mi R-20amimics細(xì)胞熒光素酶活性無明顯變化。3.細(xì)胞轉(zhuǎn)染后,與mimics NC組相比,mi R-20a mimics組細(xì)胞中DOCK4表達(dá)升高(P=0.001);而與inhibitor NC組相比,mi R-20a inhibitor組細(xì)胞中的DOCK4表達(dá)降低(P=0.01)。結(jié)論:1.宮頸癌中,mi R-20a表達(dá)上調(diào)促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的遷移與侵襲參與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展;2.mi R-20a通過靶向DOCK4并正向調(diào)節(jié)DOCK4實(shí)現(xiàn)其在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2020
【中圖分類】：R737.33
【文章目錄】：
摘要
Abstract
常見縮寫詞中英文對(duì)照表
前言
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
2 結(jié)果
    2.1 miR-20a表達(dá)水平對(duì)宮頸癌細(xì)胞遷移、侵襲影響
    2.2 miR-20a靶向作用于DOCK4 并上調(diào)其表達(dá)
3 討論
4 結(jié)論
    4.1 miR-20a的表達(dá)對(duì)宮頸癌細(xì)胞遷移、侵襲的影響
    4.2 miR-20a靶向DOCK4 在宮頸癌細(xì)胞中發(fā)揮作用
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
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