目的:研究兒童急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)中的Netrin-1蛋白的表達(dá)水平和其與臨床指標(biāo)的相關(guān)性,并探討Netrin-1調(diào)控ALL細(xì)胞的潛在機(jī)制。方法:采用ELISA法檢測48例ALL患兒和27例非腫瘤疾病對照患兒外周血血清中的Netrin-1水平,比較疾病組和對照組患兒的血清Netrin-1水平并分析Netrin-1水平與ALL臨床指標(biāo)的相關(guān)性。體外培養(yǎng)人白血病細(xì)胞株:Jurkat、Molt-4、SUP-B15和Raji,經(jīng)不同濃度(0~200 ng/ml)Netrin-1蛋白處理后,采用Transwell法檢測各組細(xì)胞的侵襲能力;采用CCK8法檢測各組細(xì)胞增殖的能力;采用Western blot檢測各組細(xì)胞內(nèi)FAK、ERK1/2、PI3K、AKT信號通路關(guān)鍵蛋白的磷酸化水平。結(jié)果:ALL患兒血清中的Netrin-1表達(dá)水平顯著高于對照組(P0.05)。Netrin-1表達(dá)水平與外周血白細(xì)胞(WBC)水平和外周血血小板(PLT)水平呈顯著相關(guān):隨著Netrin-1表達(dá)水平升高,WBC水平總體(r=-0.290,P0.05)呈下降趨勢,PLT水平(r=0.483,P0.05)呈上升趨勢,但當(dāng)Netrin-1濃度處于25~50 ng/ml水平時(shí),Netrin-1水平與WBC(r=0.886,P0.05)呈正相關(guān);WBC大于50×10~9/L和PLT小于20×10~9/L時(shí),患兒的Netrin-1表達(dá)水平均處于25~50 ng/ml,呈顯著降低(P=0.042,P=0.001);Netrin-1表達(dá)水平與年齡、Hb、骨髓幼稚細(xì)胞無顯著相關(guān)性。危險(xiǎn)度分級中,高危組中的Netrin-1表達(dá)水平顯著增高,具有顯著性差異(P=0.017);Netrin-1表達(dá)水平在MRD、中樞神經(jīng)浸潤、遺傳學(xué)異常等分組中的無顯著性差異。Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,Netrin-1促進(jìn)4種白血病細(xì)胞株的侵襲能力(P0.05):隨著Netrin-1濃度增高,侵襲下室的細(xì)胞數(shù)有先增加后降低的趨勢;4種細(xì)胞均在Netrin-1濃度為100 ng/ml時(shí),侵襲下室的細(xì)胞數(shù)最高。不同濃度Netrin-1對細(xì)胞增殖的影響不同:4種細(xì)胞存活率均表現(xiàn)為低濃度升高及高濃度降低的趨勢;Netrin-1濃度為25 ng/ml時(shí),細(xì)胞存活率均較無Netrin-1添加狀態(tài)顯著增加(P0.05),其中SUP-B15細(xì)胞在濃度為100 ng/ml時(shí),細(xì)胞存活率最高。Netrin-1使FAK、Erk1/2、PI3K(P85/55)、Akt信號通路關(guān)鍵分子磷酸化水平顯著上升(P0.05)。結(jié)論:Netrin-1在兒童ALL中存在異常的表達(dá);不同的Netrin-1表達(dá)水平與臨床指標(biāo)的關(guān)系不同,提示不同濃度Netrin-1水平可能對患兒的影響不同;Netrin-1可能通過激活MAPK信號通路與PI3K信號通路來促進(jìn)白血病細(xì)胞的增殖、侵襲能力進(jìn)而影響ALL的發(fā)生發(fā)展,但其在不同濃度區(qū)間呈現(xiàn)差異的影響效果,提示Netrin-1依據(jù)自身濃度差異可能具有不同的調(diào)控機(jī)制。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2020
【中圖分類】：R733.71
【部分圖文】：

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文19圖1ELISA法測定ALL患兒與非白血病對照者的Netrin-1表達(dá)水平Figure1Netrin-1expressionleveldeterminedbyELISAinALLpatientsandnon-leukemiacontrols.

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文23表5不同濃度Netrin-1處理的Jurkat、Molt-4、SUP-B15、Raji細(xì)胞跨膜細(xì)胞數(shù)Table5NumberoftransmenmbranecellsinJurkat、Molt-4、SUP-B15、RajicellstreatedwithdifferentconcentrationofNetrin-1NumberofcellsNetrin-1(ng/ml)02550100200Jurkat72.333±6.252677.400±10.03472.533±5.462479.133±7.472*76.333±5.960Molt-475.933±5.07880.533±5.488*87.333±4.287*87.533±4.824*85.267±3.634*Sup-B1574.800±4.34674.800±4.19580.067±6.5078*80.867±3.563*78.867±3.523Raji71.600±6.25477.067±9.22381.267±10.707*91.267±12.848*84.867±9.288**P＜0.05,comparedwithgroupwithoutNetrin-1addition(0ng/ml).圖2不同濃度Netrin-1對細(xì)胞侵襲能力的影響（A:Jurkat.B:SUP-B15.C:Molt-4.D;Raji.結(jié)晶紫染色，×40）Figure2TheeffectofcellsmigrationabilityaftertreatmentwithdifferentconcentrationsofNetrin-1.（A:Jurkat.B:SUP-B15.C:Molt-4.D;Raji.Crystalvioletdyeing，×40）

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文24圖3不同濃度的Netrin-1處理不同時(shí)間后的細(xì)胞存活率Netrin-1濃度：0、25、50、100、200ng/mlFigure3CellsurvivalrateaftertreatmentwithdifferentconcentrationsofNetrin-1ConcentrationofNetrin-1：0、25、50、100、200ng/ml3.6Netrin-1對Jurkat、Molt-4、SUP-B15、Raji細(xì)胞增殖、粘附、侵襲信號通路的影響WesternBlot分析發(fā)現(xiàn)在Jurkat、Molt-4、SUP-B15、Raji4種白血病細(xì)胞株中，Netrin-1應(yīng)用20min后，均不同程度上調(diào)了FAK、Erk1/2、PI3K(P85/55)、Akt的蛋白磷酸化水平，相應(yīng)總蛋白水平?jīng)]有變化，有顯著性差異。結(jié)果顯示，Netrin-1激活了MAPK(Erk),PI3K/Akt通路，影響了相關(guān)蛋白的表達(dá)（圖4）。
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 Shengjie Feng;Zhuohao He;Hongyu Li;Yizheng Wang;;Ca~(2+) signaling initiated by canonical transient receptor potential channels in dendritic development[J];Neuroscience Bulletin;2015年03期

2 高永生;王春健;蔡淑萍;孫菊杰;張德賢;孫妍琳;穆殿斌;;Netrin-1在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中的表達(dá)及與轉(zhuǎn)移的相關(guān)性[J];山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2015年07期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 金明;鈣離子通過調(diào)節(jié)Rho家族的鳥苷三磷酸酶觸發(fā)神經(jīng)元生長錐轉(zhuǎn)向[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 蔡艷;肺癌組織中Netrin-1及其受體表達(dá)的意義[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

本文編號：2871691