目的:(1)通過(guò)多位點(diǎn)可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列分析方法(multiple-locus variable-number tandem-repeat analysis,MLVA)研究世界多個(gè)國(guó)家和地區(qū)分離的布魯氏菌的分子流行病學(xué)特征;(2)通過(guò)檢測(cè)布病患者血清中白細(xì)胞介素2(IL-2)、白細(xì)胞介素8(IL-8)和腫瘤壞死因子a(TNF-a)的水平,探討免疫相關(guān)因子IL-2、IL-8和TNF-a與布病的相關(guān)性;(3)分別構(gòu)建含布魯氏菌基因組目的基因FlgE、BLS-FlgE、FlgL和BLS-FlgL的原核表達(dá)載體,表達(dá)純化重組蛋白,并對(duì)FlgE和BLS-FlgE蛋白的布病診斷價(jià)值進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。方法:(1)選擇11個(gè)可變數(shù)目重復(fù)序列(variable-number tandem-repeat,VNTR)位點(diǎn),使用BioNumerics軟件,采用非加權(quán)配對(duì)算術(shù)平均法(Unweighted Pair Group Method with Arithmetic Mean,UPGMA),對(duì)1953年至2013年間全球48個(gè)國(guó)家和地區(qū)分離的布魯氏菌VNTR資料進(jìn)行聚類(lèi)分析,繪制系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)和最小生成樹(shù)(minimum spanning tree,MST),以及菌株的流行分布特征;(2)ELISA法測(cè)定布病患者血清和正常人血清IL-2、IL-8和TNF-a的水平,分析免疫相關(guān)因子與布病的關(guān)系;(3)從NCBI得到布魯氏菌鞭毛蛋白基因FlgE、FlgL和2,4二氧四氫蝶啶合酶基因(BLS)序列,設(shè)計(jì)引物,利用PCR技術(shù)擴(kuò)增得到目的基因,連接載體pET30a,轉(zhuǎn)化Ecoli BL21感受態(tài)細(xì)胞,使用IPTG誘導(dǎo)蛋白表達(dá),通過(guò)SDS-PAGE及Western blot鑒定,用帶His標(biāo)簽的蛋白純化試劑盒純化蛋白。純化后的FlgE鞭毛蛋白和BLS-FlgE融合蛋白建立間接酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(indirect Enzyme Linked Immunosorbent Assay,iELISA)檢測(cè)布病陽(yáng)性血清和健康人血清,計(jì)算iELISA方法的靈敏度和特異度。結(jié)果:(1)布魯氏菌系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的進(jìn)化關(guān)系與經(jīng)典的生物分型方法基本上吻合,但豬種生物5型菌株與其它豬種生物1、2、3和4型菌株關(guān)系較遠(yuǎn);鯨種布魯氏菌也分為兩個(gè)部分,并且關(guān)系較遠(yuǎn)。通過(guò)聚類(lèi)分析布魯氏菌增加?xùn)|非、西非、南非和亞洲譜系。中國(guó)是布病多發(fā)區(qū),主要流行株為羊種布魯氏菌,其次是牛種布魯氏菌,豬種布魯氏菌主要出現(xiàn)中國(guó)南部省份,犬種布魯氏菌只在動(dòng)物中犬中出現(xiàn),人類(lèi)中沒(méi)有出現(xiàn)。(2)布病患者血清IL-2水平低于正常人,而IL-8和TNF-a水平則高于正常人,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Spearman相關(guān)分析顯示IL-8和TNF-a之間存在正相關(guān)(P0.05)(3)成功克隆了FlgE鞭毛蛋白、FlgL鞭毛蛋白、BLS-FlgE融合蛋白和BLS-FlgL融合蛋白,經(jīng)過(guò)優(yōu)化表達(dá)條件,目的蛋白獲得較大量的表達(dá),免疫印跡結(jié)果顯示可被陽(yáng)性病人血清識(shí)別。以FlgE蛋白構(gòu)建iELISA法檢測(cè)得到靈敏度和特異度分別為70.83%和41.67%,以BLS-FlgE蛋白構(gòu)建iELISA法檢測(cè)得到靈敏度和特異度分別為68.75%和52.08%。結(jié)論:(1)布魯氏菌具有種的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)特征,并且具有分離的時(shí)間、地域和宿主的特異性;(2)布病與免疫細(xì)胞因子IL-2、IL-8和TNF-a水平相關(guān)。推測(cè)IL-8和TNF-a存在協(xié)同作用。(3)成功表達(dá)布魯氏菌FlgE鞭毛蛋白、FlgL鞭毛蛋白、BLS-FlgE融合蛋白和BLS-FlgL融合蛋白,以FlgE鞭毛蛋白和BLS-FlgE融合蛋白分別作為診斷抗原靈敏度較高而特異度低,具有早期診斷價(jià)值。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2020
【中圖分類(lèi)】：R378.5
【部分圖文】：

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文4表12747株布魯氏菌的分離宿主、種型及菌株數(shù)量關(guān)系表宿主菌株生物型菌株數(shù)宿主菌株生物型菌株數(shù)麂牛種1型1馴鹿豬種3和4型8家鼠牛種1型1蟾蜍牛種1和3型15假水蚤羊種3型1鯨魚(yú)鯨種28沙漠鼠沙林鼠種1野兔豬種1和2型30麝牛豬種4型1山羊牛種1型、豬種1和2型39水獺鰭種1海豚鯨種和鰭種42紅狐豬種5型2海豹B鯨種和鰭種53馬豬種1型2野豬豬種1和2型133田鼠田鼠種2犬犬種、羊種1型和牛種3型134麋鹿牛種1型3家豬豬種和羊種3型137土壤田鼠種3綿羊羊種、牛種、豬種和綿羊附睪種200駱駝牛種3型4牛牛種、羊種和豬種593牦牛牛種和羊種4人類(lèi)牛種、豬種、鯨種、犬種和B.inopinata874來(lái)源不詳435圖1布魯氏菌分離地區(qū)與菌株的關(guān)系

布魯氏菌分離時(shí)間與菌株的關(guān)系

布魯氏菌分離來(lái)源與菌株的關(guān)系
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 馬曉菁;葉鋒;姚剛;易新萍;劉帥;谷文喜;吐?tīng)柡椤づ瑺?馬俊杰;鐘旗;;布魯氏菌分離株MLVA分子分型鑒定[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2016年08期

2 毛玲玲;田疆;雷露;劉學(xué)升;張巍;張眉眉;韓悅;姚文清;;遼寧省炭疽芽胞桿菌MLVA分型研究[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2015年03期

3 呂華坤,劉志廣,許衛(wèi)國(guó),劉敬華,章體慧,董海燕,陳永弟,陽(yáng)波,王蓓,朱濤,萬(wàn)康林;江蘇省67株結(jié)核分支桿菌MLVA分型分析[J];中國(guó)人獸共患病雜志;2005年09期

4 陳求揚(yáng);梁慶福;林建;林淑芳;趙永;魏淑貞;逄宇;鄭金鳳;王玉鋒;趙雁林;;福建省耐多藥結(jié)核分枝桿菌MLVA分型分析[J];中國(guó)公共衛(wèi)生;2013年01期

5 邢進(jìn);吳軍;岳秉飛;賀爭(zhēng)鳴;;北京地區(qū)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物綠膿桿菌分離株MLVA分型[J];中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志;2012年05期

6 蔡箴;牛曉平;秦麗云;呂國(guó)平;徐保紅;趙寶華;;基于毛細(xì)管電泳的金黃色葡萄球菌MLVA分型[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2015年13期

7 王洪霞;崔志剛;熊禮鳳;章麗娟;闞飆;;基于微流控的核酸片段分離技術(shù)用于傷寒沙門(mén)菌MLVA分型的研究[J];疾病監(jiān)測(cè);2009年03期

8 陶曉霞;崔志剛;劉國(guó)棟;閆笑梅;張建中;;耐甲氧西林金黃色葡萄球菌MLVA分型研究[J];中國(guó)病原生物學(xué)雜志;2010年02期

9 同重湘;趙秀芹;馬建軍;劉志廣;曹文靜;楊永紅;呂冰;姜元;萬(wàn)康林;;甘肅省臨床分離結(jié)核分枝桿菌MLVA分型初步研究[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2010年07期

10 王娟;張秀明;蘭海麗;孫各琴;盧蘭芬;馮雪琴;李飛;唐國(guó)芳;;中山地區(qū)臨床分離株銅綠假單胞菌MLVA分型初步研究[J];中國(guó)病原生物學(xué)雜志;2012年10期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前8條

1 李偉;使用MLVA方法分析暴發(fā)相關(guān)的豬鏈球菌[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2009年

2 陳春霞;甲型副傷寒沙門(mén)菌PFGE和MLVA分型方案的建立與優(yōu)化[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2012年

3 于瑞星;淋球菌對(duì)頭孢菌素類(lèi)等藥物的敏感性與MLVA分型研究及其聯(lián)合作用的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

4 呂冰;中國(guó)結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)化MLVA分型技術(shù)及MLST分型的研究[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2010年

5 單曉英;中國(guó)腦膜炎奈瑟菌MLVA方法的建立與應(yīng)用[D];山東大學(xué);2015年

6 王春雨;結(jié)核桿菌Taqman PCR檢測(cè)方法建立及吉林省鹿結(jié)核桿菌MLVA分型研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

7 徐穎華;百日咳鮑特氏菌分子鑒定、基因組多態(tài)性與微進(jìn)化的研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

8 鄧艷琴;結(jié)核分枝桿菌基因分型及異煙肼新耐藥突變位點(diǎn)的確認(rèn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 路殿英;布魯氏菌MLVA種型分布及布魯氏菌重組鞭毛蛋白融合表達(dá)、免疫原性研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2020年

2 李智偉;人感染的布魯氏菌的檢測(cè)鑒定與MLVA基因分析的研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2013年

3 趙忠智;布魯氏菌MLVA分子流行病學(xué)特征及體外藥敏研究[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2017年

4 盤(pán)箐;甲型副傷寒沙門(mén)菌MLVA分型方法的建立及應(yīng)用[D];南華大學(xué);2009年

5 吳松羽;炭疽芽孢桿菌MLVA分子分型研究[D];南昌大學(xué);2011年

6 周鑫;中國(guó)萊姆病螺旋體MLVA分型方法的建立與研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2013年

7 張翠彩;鉤端螺旋體MLVA基因分型方法的建立及初步應(yīng)用研究[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2008年

8 陳揚(yáng);耐甲氧西林金黃色葡萄球菌MLVA基因分型及流行狀況研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2014年

9 李卓林;462例肺結(jié)核患者結(jié)核分枝桿菌MLVA基因分型的研究[D];吉林大學(xué);2013年

10 楊杰;布魯菌MLVA和HOOF分型標(biāo)準(zhǔn)操作方法的建立及應(yīng)用[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2871224