目的:研究12-脂氧合酶(12-Lipoxygenase,12-LOX)抑制劑ML355對(duì)小鼠經(jīng)脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的拮抗效應(yīng)及其分子機(jī)制。方法:1.將24只成年雄性C57BL/6小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為4組,對(duì)照組、LPS組(腹腔注射 LPS 20mg/kg)、ML355 預(yù)治療組(30mg/kg、15mg/kg 的 ML355 提前1h腹腔注射+LPS)。建模后12h處死小鼠,收集外周血、腹腔灌洗液和腹腔巨噬細(xì)胞,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血漿和腹腔灌洗液中12羥基二十碳四烯酸(12-HETE)含量,測(cè)定腹腔灌洗液中干擾素-γ(IFN-γ)、白細(xì)胞介素(IL-1β、IL-6、IL-10)、腫瘤壞死因子(TNF-α)水平及血清中IFN-y、IL-1β水平,采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)檢測(cè)細(xì)胞中IFN-y、IL-1β及花生四烯酸-15-脂氧合酶(Alox-15)的 mRNA 表達(dá)。2.體外培養(yǎng)小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞(PMs),隨機(jī)分為4組,對(duì)照組、LPS組(LPS 20mg/L)、ML355 預(yù)處理組(25μmol/L、50μmol/L 的 ML355 提前干預(yù) 1h+LPS)。于LPS作用不同時(shí)間點(diǎn)收集各組的細(xì)胞上清和細(xì)胞團(tuán)塊。用qRT-PCR檢測(cè)細(xì)胞中IFN-γ、IL-1β 及 Alox-15 的 mRNA 表達(dá),ELISA 檢測(cè)細(xì)胞上清液中 12-HETE、IFN-γ、IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10水平,通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡試驗(yàn)(Western Blot)檢測(cè)12/15-LOX及絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1.LPS模型組血漿和腹腔灌洗液中12-HETE的含量較對(duì)照組顯著增高。與LPS模型組比較,ML355預(yù)處理后可明顯減少血漿和腹腔灌洗液中12-HETE含量,明顯降低血清和腹腔灌洗液中IFN-γ水平,qRT-PCR結(jié)果顯示ML355明顯下調(diào)IFN-γ、IL-1β及Alox15基因表達(dá)。2.在體外實(shí)驗(yàn)中,與對(duì)照組比較,LPS刺激腹腔巨噬細(xì)胞后,上清中12-HETE含量呈升高趨勢(shì),但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,予以ML355預(yù)處理后12-HETE含量明顯降低。與LPS組比較,ML355預(yù)處理后細(xì)胞上清IFN-γ水平顯著下降,細(xì)胞內(nèi)IFN-γ、IL-1β的基因表達(dá)明顯下調(diào),p38 MAPK的磷酸化水平差異無(wú)顯著變化,而細(xì)胞外信號(hào)調(diào)控蛋白激酶(ERK)、c-Jun N末端激酶(JNK)的磷酸化水平及12/15-LOX蛋白表達(dá)減少。結(jié)論:(1)ML355可抑制小鼠經(jīng)LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。(2)ML355能明顯降低LPS刺激下炎性巨噬細(xì)胞中炎性因子IFN-γ的生成,其機(jī)制可能是通過(guò)抑制12/15-LOX、p-ERK、p-JNK 蛋白來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
【學(xué)位單位】：遵義醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2020
【中圖分類】：R965
【部分圖文】：

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文?王星玉??示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。??２結(jié)果??以下所有的實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，對(duì)照組（Ｃｏｎｔｒｏｌ組）縮寫為Ｃ，?ＬＰＳ模型組縮寫為Ｌ，??ＭＬ３５５?（１５ｍｇ／ｋｇ）?＋ＬＰＳ?組縮寫為?Ｍ?（１５）?＋Ｌ，ＭＬ３５５?（３０ｍｇ／ｋｇ）?＋ＬＰＳ?組縮寫為??Ｍ?（３０）?＋Ｌ。??２．１各組小鼠血漿和腹腔灌洗液中１２－ＨＥＴＥ的含量??實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，ＬＰＳ模型組血漿和腹腔灌洗液中１２－ＨＥＴＥ的含??量顯著增髙（尸＜０．０５），而ＭＬ３５５預(yù)處理后可明顯降低血漿和腹腔灌洗液中１２－ＨＥＴＥ??含量（尸＜０．０５）。??Ａ??２５?ｒ?Ｂ??Ｕ?＾?１０００?－??Ｉ?ｉ?Ｉ?８００?＇?ＪＬ??Ｉ?ｉ?ｉ?６００?－?Ｉ?＾??ｓ?１１１?１２〇：ｔｉ?ｌｌｉ??ｃ?ｖ?ｙ?ｚ?ｃ?ｖ?，，??圖１各組小鼠血漿和腹腔灌洗液中１２－ＨＥＴＥ的含量??注：與對(duì)照組相比，＃Ｐ＜０．０５；與ＬＰＳ模型組相比，＊Ｐ＜０．０５？??２．２?ＭＬ３５５對(duì)ＬＰＳ模型小鼠腹腔灌洗液中炎性因子的影響??建模后１２ｈ，ＬＰＳ模型組腹腔灌洗液中炎性因子（ＩＦＮ－Ｙ、ＩＬ－ｌｐ、ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－６、ＩＬ－１０）??水平顯著高于對(duì)照組（Ｐ＜０．０５），ＭＬ３５５預(yù)處理后ＩＬ－ｌｐ、ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－６、ＩＬ－１０?７ＪＣ平??無(wú)明顯變化（辦０．０５）。與ＬＰＳ模型組比較，ＭＬ３５５預(yù)處理后ＩＦＮ－Ｙ水平下降了，??且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（尸＜〇．〇５）。??１７??

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文?王星玉??Ａ?Ｂ??４００?ｒ?１５０?ｒ?＃??ｉｍｖ?：Ｌｉｉｉ??Ｃ?Ｖ?、ｘＶ?、ｘＶ?。?Ｖ?、ｘＶ?、ｘＶ??Ｃ?Ｄ??２０００「?＃?＿?２００?ｒ?＃??ｌ?１５００?■?■?＿?Ｉ?１５０?ＩＴ??丨：Ｌ?１１１?ｉ：：Ｌｉｉｉ??。?Ｖ?、ｘｖ?ＸＶ?。?Ｖ?，Ｖ?＞＞??Ｅ??８００?ｒ??ｆ?６〇０?＇?＃?ｉ?丄??ｉ４〇°－?ｉｌｊ??Ｕ?Ｊ?Ｊ??Ｃ?ｖ?、ｘＶ?、ｘｖ??圖２?ＭＬ３５５對(duì)ＬＰＳ模型小鼠腹腔灌洗液中炎性因子的影響??注：與對(duì)照組相比，＃Ｐ＜０．０５；與ＬＰＳ模型組相比，＊Ｐ＜０．０５？??１８??

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文?王星玉??２．３?ＭＬ３５５對(duì)ＬＰＳ模型小鼠血清中促炎因子的影響??建模后１２ｈ，ＬＰＳ模型組血清中促炎因子（ＩＦＮ－ｙ、ＩＬ－ｌｐ）水平顯著高于對(duì)照組??（尸＜０．０５），ＭＬ３５５預(yù)處理后ＩＬ－１｜３水平無(wú)明顯變化（Ｊ°＞０．０５）。與ＬＰＳ模型組比較，??ＭＬ３５５預(yù)處理后ＩＦＮ－ｙ水平明顯降低（尸＜０．０５）。??Ａ?Ｂ??４００?ｒ?１５０?ｒ??Ｉ?３〇０?Ｉ?Ｉ?１００１?■??１?Ｌｉｕ?１?Ｌ?■?１１??Ｃ?Ｖ?、ｘＶ?、ｘｖ?。?ｖ?、ｘＶ?、ｘｖ??圖３?ＭＬ３５５對(duì)ＬＰＳ模型小鼠血清中促炎因子的影響??注：與對(duì)照俎相比，＃尸＜０．０５；與ＬＰＳ模型組相比，＞＜０．０５。??２．４?ＭＬ３５５對(duì)ＬＰＳ模型小鼠ＰＭｓ中炎性因子ＩＦＮ￣ｙ、ＩＬ－ｉｐ及Ａｌｏｘｌ５??ｍＲＮＡ表達(dá)的影響??建模后１２ｈ，ＬＰＳ模型組中炎性因子ＩＦＮ－丫、ＩＬ－ｉｐ的ｍＲＮＡ表達(dá)較對(duì)照組明顯??上調(diào)（Ｐ＜０．０５?），而ＬＰＳ模型組與對(duì)照組相比，Ａｌｏｘｌ?５?ｍＲＮＡ表達(dá)無(wú)明顯變化（辦０．０５?）。??與ＬＰＳ模型組比較，給予ＭＬ３５５后ＩＦＮ－ｙ、ＩＬ－ｌｐ及Ａｌｏｘｌ５基因表達(dá)水平明顯下調(diào)??（尸＜０．０５）?〇??１９??
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