目的:研究12-脂氧合酶(12-Lipoxygenase,12-LOX)抑制劑ML355對小鼠經(jīng)脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)誘導的炎癥反應的拮抗效應及其分子機制。方法:1.將24只成年雄性C57BL/6小鼠按隨機數(shù)字表法分為4組,對照組、LPS組(腹腔注射 LPS 20mg/kg)、ML355 預治療組(30mg/kg、15mg/kg 的 ML355 提前1h腹腔注射+LPS)。建模后12h處死小鼠,收集外周血、腹腔灌洗液和腹腔巨噬細胞,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測血漿和腹腔灌洗液中12羥基二十碳四烯酸(12-HETE)含量,測定腹腔灌洗液中干擾素-γ(IFN-γ)、白細胞介素(IL-1β、IL-6、IL-10)、腫瘤壞死因子(TNF-α)水平及血清中IFN-y、IL-1β水平,采用實時定量聚合酶鏈反應(qRT-PCR)檢測細胞中IFN-y、IL-1β及花生四烯酸-15-脂氧合酶(Alox-15)的 mRNA 表達。2.體外培養(yǎng)小鼠原代腹腔巨噬細胞(PMs),隨機分為4組,對照組、LPS組(LPS 20mg/L)、ML355 預處理組(25μmol/L、50μmol/L 的 ML355 提前干預 1h+LPS)。于LPS作用不同時間點收集各組的細胞上清和細胞團塊。用qRT-PCR檢測細胞中IFN-γ、IL-1β 及 Alox-15 的 mRNA 表達,ELISA 檢測細胞上清液中 12-HETE、IFN-γ、IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10水平,通過蛋白質免疫印跡試驗(Western Blot)檢測12/15-LOX及絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路蛋白的表達。結果:1.LPS模型組血漿和腹腔灌洗液中12-HETE的含量較對照組顯著增高。與LPS模型組比較,ML355預處理后可明顯減少血漿和腹腔灌洗液中12-HETE含量,明顯降低血清和腹腔灌洗液中IFN-γ水平,qRT-PCR結果顯示ML355明顯下調IFN-γ、IL-1β及Alox15基因表達。2.在體外實驗中,與對照組比較,LPS刺激腹腔巨噬細胞后,上清中12-HETE含量呈升高趨勢,但沒有統(tǒng)計學差異,予以ML355預處理后12-HETE含量明顯降低。與LPS組比較,ML355預處理后細胞上清IFN-γ水平顯著下降,細胞內IFN-γ、IL-1β的基因表達明顯下調,p38 MAPK的磷酸化水平差異無顯著變化,而細胞外信號調控蛋白激酶(ERK)、c-Jun N末端激酶(JNK)的磷酸化水平及12/15-LOX蛋白表達減少。結論:(1)ML355可抑制小鼠經(jīng)LPS誘導的炎癥反應。(2)ML355能明顯降低LPS刺激下炎性巨噬細胞中炎性因子IFN-γ的生成,其機制可能是通過抑制12/15-LOX、p-ERK、p-JNK 蛋白來實現(xiàn)的。
【學位單位】：遵義醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2020
【中圖分類】：R965
【部分圖文】：

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文?王星玉??示差異具有統(tǒng)計學意義。??２結果??以下所有的實驗結果中，對照組（Ｃｏｎｔｒｏｌ組）縮寫為Ｃ，?ＬＰＳ模型組縮寫為Ｌ，??ＭＬ３５５?（１５ｍｇ／ｋｇ）?＋ＬＰＳ?組縮寫為?Ｍ?（１５）?＋Ｌ，ＭＬ３５５?（３０ｍｇ／ｋｇ）?＋ＬＰＳ?組縮寫為??Ｍ?（３０）?＋Ｌ。??２．１各組小鼠血漿和腹腔灌洗液中１２－ＨＥＴＥ的含量??實驗結果顯示，與對照組比較，ＬＰＳ模型組血漿和腹腔灌洗液中１２－ＨＥＴＥ的含??量顯著增髙（尸＜０．０５），而ＭＬ３５５預處理后可明顯降低血漿和腹腔灌洗液中１２－ＨＥＴＥ??含量（尸＜０．０５）。??Ａ??２５?ｒ?Ｂ??Ｕ?＾?１０００?－??Ｉ?ｉ?Ｉ?８００?＇?ＪＬ??Ｉ?ｉ?ｉ?６００?－?Ｉ?＾??ｓ?１１１?１２〇：ｔｉ?ｌｌｉ??ｃ?ｖ?ｙ?ｚ?ｃ?ｖ?，，??圖１各組小鼠血漿和腹腔灌洗液中１２－ＨＥＴＥ的含量??注：與對照組相比，＃Ｐ＜０．０５；與ＬＰＳ模型組相比，＊Ｐ＜０．０５？??２．２?ＭＬ３５５對ＬＰＳ模型小鼠腹腔灌洗液中炎性因子的影響??建模后１２ｈ，ＬＰＳ模型組腹腔灌洗液中炎性因子（ＩＦＮ－Ｙ、ＩＬ－ｌｐ、ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－６、ＩＬ－１０）??水平顯著高于對照組（Ｐ＜０．０５），ＭＬ３５５預處理后ＩＬ－ｌｐ、ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－６、ＩＬ－１０?７ＪＣ平??無明顯變化（辦０．０５）。與ＬＰＳ模型組比較，ＭＬ３５５預處理后ＩＦＮ－Ｙ水平下降了，??且差異有統(tǒng)計學意義（尸＜〇．〇５）。??１７??

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文?王星玉??Ａ?Ｂ??４００?ｒ?１５０?ｒ?＃??ｉｍｖ?：Ｌｉｉｉ??Ｃ?Ｖ?、ｘＶ?、ｘＶ?。?Ｖ?、ｘＶ?、ｘＶ??Ｃ?Ｄ??２０００「?＃?＿?２００?ｒ?＃??ｌ?１５００?■?■?＿?Ｉ?１５０?ＩＴ??丨：Ｌ?１１１?ｉ：：Ｌｉｉｉ??。?Ｖ?、ｘｖ?ＸＶ?。?Ｖ?，Ｖ?＞＞??Ｅ??８００?ｒ??ｆ?６〇０?＇?＃?ｉ?丄??ｉ４〇°－?ｉｌｊ??Ｕ?Ｊ?Ｊ??Ｃ?ｖ?、ｘＶ?、ｘｖ??圖２?ＭＬ３５５對ＬＰＳ模型小鼠腹腔灌洗液中炎性因子的影響??注：與對照組相比，＃Ｐ＜０．０５；與ＬＰＳ模型組相比，＊Ｐ＜０．０５？??１８??

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文?王星玉??２．３?ＭＬ３５５對ＬＰＳ模型小鼠血清中促炎因子的影響??建模后１２ｈ，ＬＰＳ模型組血清中促炎因子（ＩＦＮ－ｙ、ＩＬ－ｌｐ）水平顯著高于對照組??（尸＜０．０５），ＭＬ３５５預處理后ＩＬ－１｜３水平無明顯變化（Ｊ°＞０．０５）。與ＬＰＳ模型組比較，??ＭＬ３５５預處理后ＩＦＮ－ｙ水平明顯降低（尸＜０．０５）。??Ａ?Ｂ??４００?ｒ?１５０?ｒ??Ｉ?３〇０?Ｉ?Ｉ?１００１?■??１?Ｌｉｕ?１?Ｌ?■?１１??Ｃ?Ｖ?、ｘＶ?、ｘｖ?。?ｖ?、ｘＶ?、ｘｖ??圖３?ＭＬ３５５對ＬＰＳ模型小鼠血清中促炎因子的影響??注：與對照俎相比，＃尸＜０．０５；與ＬＰＳ模型組相比，＞＜０．０５。??２．４?ＭＬ３５５對ＬＰＳ模型小鼠ＰＭｓ中炎性因子ＩＦＮ￣ｙ、ＩＬ－ｉｐ及Ａｌｏｘｌ５??ｍＲＮＡ表達的影響??建模后１２ｈ，ＬＰＳ模型組中炎性因子ＩＦＮ－丫、ＩＬ－ｉｐ的ｍＲＮＡ表達較對照組明顯??上調（Ｐ＜０．０５?），而ＬＰＳ模型組與對照組相比，Ａｌｏｘｌ?５?ｍＲＮＡ表達無明顯變化（辦０．０５?）。??與ＬＰＳ模型組比較，給予ＭＬ３５５后ＩＦＮ－ｙ、ＩＬ－ｌｐ及Ａｌｏｘｌ５基因表達水平明顯下調??（尸＜０．０５）?〇??１９??
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本文編號：2869651