發(fā)布時(shí)間：2020-11-02 04:55

　　 目的補(bǔ)腎固表顆粒是徐氏兒科治療反復(fù)呼吸道感染的經(jīng)典方,反復(fù)呼吸道感染的主要病因?yàn)槊庖吖δ艿拖录拔蓙y,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)腹腔注射環(huán)磷酰胺建立免疫低下小鼠模型,以補(bǔ)腎固表顆粒灌胃給藥4周,以玉屏風(fēng)顆粒為對(duì)照組,研究補(bǔ)腎固表顆粒對(duì)免疫低下小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用,并通過(guò)最大給藥量對(duì)補(bǔ)腎固表顆粒進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)。為補(bǔ)腎固表顆粒防治反復(fù)呼吸道感染及臨床用藥的安全性提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法實(shí)驗(yàn)一:將60只清潔級(jí)雄性ICR小鼠隨機(jī)分成6組,即空白對(duì)照組,模型組,玉屏風(fēng)顆粒組,補(bǔ)腎固表顆粒低劑量組、補(bǔ)腎固表顆粒中劑量組、補(bǔ)腎固表顆粒高劑量組,每組10只。除空白組外,其他各組給予環(huán)磷酰胺腹腔注射,按50mg/kg/d,連續(xù)3d,建立免疫低下小鼠模型。造模成功后,各組給予相應(yīng)藥物灌胃,補(bǔ)腎固表顆粒低、中、高劑量組分別按4.5g/kg/d、9g/kg/d和18g/kg/d灌胃給藥;陽(yáng)性對(duì)照藥玉屏風(fēng)顆粒按2.25g/kg/d給藥,模型組及空白對(duì)照組給予生理鹽水,灌胃體積均為0.5mL/次,每日2次,連續(xù)4周。最后一次給藥后,撤除飼料,自由飲水。次日小鼠麻醉后,摘除眼球取血,室溫靜置2h后放入離心機(jī)中離心,轉(zhuǎn)速2500r/min,離心15分鐘,吸取上清液分裝于0.3mL的離心管中,-80℃冰箱保存?zhèn)溆?凍存的血清將用來(lái)檢測(cè)TNF-α、IL-2及IFN-γ水平等免疫指標(biāo)。解剖小鼠,摘取小鼠脾臟用電子天平稱(chēng)重,計(jì)算實(shí)驗(yàn)后各組小鼠脾臟系數(shù),隨后提取小鼠脾淋巴細(xì)胞,檢測(cè)脾淋巴細(xì)胞增殖能力、NK細(xì)胞殺傷活性。實(shí)驗(yàn)二:選取清潔級(jí)ICR小鼠40只,體重18~22g,雌雄各半,按體重隨機(jī)分為2組,即空白組、給藥組,每組20只。給藥組以補(bǔ)腎固表顆粒最大濃度(1mL含1.71g生藥)和最大灌胃體積(0.4ml/10g),一日2次,間隔6小時(shí)灌胃,對(duì)照組給予等體積等次數(shù)的生理鹽水灌胃。連續(xù)觀察14天,觀察并記錄動(dòng)物異常現(xiàn)象(精神狀態(tài)、活動(dòng)、皮毛情況、糞便等分泌物)、體重變化和死亡情況等,對(duì)觀察期間死亡小鼠及時(shí)進(jìn)行解剖觀察,其余小鼠在觀察期結(jié)束后進(jìn)行解剖觀察,有異常變化時(shí)做病理組織檢測(cè)。結(jié)果1.小鼠體重變化:與空白對(duì)照組比較,環(huán)磷酰胺模型小鼠體重減輕,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與模型組比較,灌胃給藥后,玉屏風(fēng)顆粒組、補(bǔ)腎固表顆粒各劑量組小鼠體重均增加(P0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;補(bǔ)腎固表顆粒低、中、高劑量組之間比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.脾臟系數(shù):與空白對(duì)照組比較,環(huán)磷酰胺模型小鼠脾臟系數(shù)減低;與模型組比較,灌胃給藥后,玉屏風(fēng)顆粒組、補(bǔ)腎固表顆粒各劑量組小鼠脾臟系數(shù)均增加(P0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;補(bǔ)腎固表顆粒低、中、高劑量組之間的量效關(guān)系比較,差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力:與空白對(duì)照組比較,環(huán)磷酰胺模型組小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力顯著下降(P0.01)。與模型組小鼠相比,灌胃給藥后補(bǔ)腎固表顆粒各劑量組及玉屏風(fēng)顆粒組脾淋巴細(xì)胞的增殖能力提高,并接近正常水平,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.小鼠NK細(xì)胞殺傷活性:與空白對(duì)照組比較,模型組小鼠NK細(xì)胞殺傷活性降低,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與模型組比較,灌胃給藥后補(bǔ)腎固表顆粒各劑量組及玉屏風(fēng)顆粒組NK細(xì)胞殺傷活性增高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。補(bǔ)腎固表顆粒高劑量組殺傷活性強(qiáng)于低劑量組和玉屏風(fēng)顆粒組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.血清IL-2、IFN-γ及TNF-α水平變化:與空白對(duì)照組比較,模型組小鼠血清IL-2、IFN-γ水平降低,TNF-α水平升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),給藥后,補(bǔ)腎固表顆粒各劑量組及玉屏風(fēng)顆粒組血清IL-2、IFN-γ水平升高,TNF-α水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。補(bǔ)腎固表顆粒中、高劑量組升高IL-2水平優(yōu)于玉屏風(fēng)顆粒組(P0.05)。補(bǔ)腎固表顆粒中、高劑量組升高IFN-γ水平優(yōu)于低劑量組(P0.05)補(bǔ)腎固表顆粒各劑量組間TNF-α水平量效關(guān)系比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6.急性毒性實(shí)驗(yàn)組小鼠給藥數(shù)分鐘后,小鼠活動(dòng)稍減,4小時(shí)后恢復(fù)正常。給藥第2天小鼠食量明顯下降,隨后即增長(zhǎng),無(wú)其他異常表現(xiàn)。觀察期間小鼠體重總體呈增長(zhǎng)趨勢(shì)。通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,提示差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。觀察期內(nèi),小鼠毛色光亮,無(wú)興奮、躁動(dòng)、豎毛、凸眼、扭體等反應(yīng);攝食、飲水、大小便等均無(wú)明顯異常。無(wú)小鼠死亡。觀察14天后,對(duì)小鼠進(jìn)行解剖,肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎、胃、腸道等臟器,均未見(jiàn)出血、充血、水腫等明顯的病理變化。結(jié)論1.采用腹腔注射環(huán)磷酰胺能夠建立免疫低下小鼠模型,造模后小鼠飲食減少,扎堆明顯,體重下降,脾臟系數(shù)減低,脾淋巴細(xì)胞增殖能力、NK細(xì)胞殺傷活性減低,說(shuō)明環(huán)磷酰胺造模成功。2.補(bǔ)腎固表顆粒能明顯增強(qiáng)免疫低下小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力、NK細(xì)胞殺傷活性,提高機(jī)體細(xì)胞免疫能力。3.補(bǔ)腎固表顆�？梢蕴岣呙庖叩拖滦∈笱錓L-2和IFN-γ水平,降低TNF-α水平,通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞因子水平,從而調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫和體液免疫功能,增強(qiáng)機(jī)體的免疫力。4.補(bǔ)腎固表顆粒常用劑量口服給藥安全。
【學(xué)位單位】：山西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2020
【中圖分類(lèi)】：R285.5
【部分圖文】：

補(bǔ)腎固表顆粒對(duì)免疫低下小鼠的影響及安全性評(píng)價(jià)7表2各組小鼠體重比較()組別n體重造模前造模后給藥后空白對(duì)照組1023.0±1.4124.50±3.8931.60±0.97模型組1023.6±1.8422.20±3.2927.20±2.70玉屏風(fēng)組1023.4±1.6522.60±3.2731.10±0.99▲低劑量組1023.2±1.4022.40±2.1532.20±2.44▲▲▲中劑量組1023.2±1.6922.40±2.1232.60±3.27▲▲▲高劑量組1023.6±2.0722.20±1.9032.80±2.15▲▲▲注：與模型組比較，▲p＜0.05，▲▲p＜0.01,▲▲▲p＜0.001；與空白組比較，P＜0.05圖1各組小鼠體重變化1.3.3補(bǔ)腎固表顆粒對(duì)小鼠脾重及脾臟系數(shù)的影響與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠脾重差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；給藥后，與模型組比較，玉屏風(fēng)顆粒組、補(bǔ)腎固表顆粒各劑量組脾重與脾臟系數(shù)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與玉屏風(fēng)顆粒組比較，補(bǔ)腎固表顆粒高、中、低劑量組脾臟系數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。補(bǔ)腎固表顆粒高、中、低劑量之間脾臟系數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果（見(jiàn)表3、圖2~3）

山西中醫(yī)藥大學(xué)2020屆研究生申請(qǐng)碩士學(xué)位論文8表3各組小鼠脾重與脾臟系數(shù)的比較（）組別n脾重（mg）脾臟系數(shù)(mg/g)空白對(duì)照組10120.56±10.17▲▲▲3.61±0.30模型組1093.3±13.94★★3.34±0.34玉屏風(fēng)組10117.54±22.33▲▲3.87±0.70▲低劑量組10121.93±12.91▲▲▲4.02±0.42▲▲中劑量組10136.15±24.74▲▲▲4.45±0.56▲▲▲高劑量組10135.03±13.67▲▲▲4.37±0.57▲▲▲注：與模型組比較，▲p＜0.05，▲▲p＜0.01,▲▲▲p＜0.001；與空白組比較，★P＜0.05，★★P＜0.01圖2各組小鼠脾臟重量比較圖3各組小鼠脾臟系數(shù)比較1.3.4對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力的影響與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力顯著下降（P＜0.01）。給藥后，

山西中醫(yī)藥大學(xué)2020屆研究生申請(qǐng)碩士學(xué)位論文8表3各組小鼠脾重與脾臟系數(shù)的比較（）組別n脾重（mg）脾臟系數(shù)(mg/g)空白對(duì)照組10120.56±10.17▲▲▲3.61±0.30模型組1093.3±13.94★★3.34±0.34玉屏風(fēng)組10117.54±22.33▲▲3.87±0.70▲低劑量組10121.93±12.91▲▲▲4.02±0.42▲▲中劑量組10136.15±24.74▲▲▲4.45±0.56▲▲▲高劑量組10135.03±13.67▲▲▲4.37±0.57▲▲▲注：與模型組比較，▲p＜0.05，▲▲p＜0.01,▲▲▲p＜0.001；與空白組比較，★P＜0.05，★★P＜0.01圖2各組小鼠脾臟重量比較圖3各組小鼠脾臟系數(shù)比較1.3.4對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力的影響與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力顯著下降（P＜0.01）。給藥后，
【參考文獻(xiàn)】

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