目的補腎固表顆粒是徐氏兒科治療反復呼吸道感染的經(jīng)典方,反復呼吸道感染的主要病因為免疫功能低下及紊亂,本實驗通過腹腔注射環(huán)磷酰胺建立免疫低下小鼠模型,以補腎固表顆粒灌胃給藥4周,以玉屏風顆粒為對照組,研究補腎固表顆粒對免疫低下小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用,并通過最大給藥量對補腎固表顆粒進行安全性評價。為補腎固表顆粒防治反復呼吸道感染及臨床用藥的安全性提供理論和實驗依據(jù)。方法實驗一:將60只清潔級雄性ICR小鼠隨機分成6組,即空白對照組,模型組,玉屏風顆粒組,補腎固表顆粒低劑量組、補腎固表顆粒中劑量組、補腎固表顆粒高劑量組,每組10只。除空白組外,其他各組給予環(huán)磷酰胺腹腔注射,按50mg/kg/d,連續(xù)3d,建立免疫低下小鼠模型。造模成功后,各組給予相應藥物灌胃,補腎固表顆粒低、中、高劑量組分別按4.5g/kg/d、9g/kg/d和18g/kg/d灌胃給藥;陽性對照藥玉屏風顆粒按2.25g/kg/d給藥,模型組及空白對照組給予生理鹽水,灌胃體積均為0.5mL/次,每日2次,連續(xù)4周。最后一次給藥后,撤除飼料,自由飲水。次日小鼠麻醉后,摘除眼球取血,室溫靜置2h后放入離心機中離心,轉(zhuǎn)速2500r/min,離心15分鐘,吸取上清液分裝于0.3mL的離心管中,-80℃冰箱保存?zhèn)溆?凍存的血清將用來檢測TNF-α、IL-2及IFN-γ水平等免疫指標。解剖小鼠,摘取小鼠脾臟用電子天平稱重,計算實驗后各組小鼠脾臟系數(shù),隨后提取小鼠脾淋巴細胞,檢測脾淋巴細胞增殖能力、NK細胞殺傷活性。實驗二:選取清潔級ICR小鼠40只,體重18~22g,雌雄各半,按體重隨機分為2組,即空白組、給藥組,每組20只。給藥組以補腎固表顆粒最大濃度(1mL含1.71g生藥)和最大灌胃體積(0.4ml/10g),一日2次,間隔6小時灌胃,對照組給予等體積等次數(shù)的生理鹽水灌胃。連續(xù)觀察14天,觀察并記錄動物異�，F(xiàn)象(精神狀態(tài)、活動、皮毛情況、糞便等分泌物)、體重變化和死亡情況等,對觀察期間死亡小鼠及時進行解剖觀察,其余小鼠在觀察期結(jié)束后進行解剖觀察,有異常變化時做病理組織檢測。結(jié)果1.小鼠體重變化:與空白對照組比較,環(huán)磷酰胺模型小鼠體重減輕,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);與模型組比較,灌胃給藥后,玉屏風顆粒組、補腎固表顆粒各劑量組小鼠體重均增加(P0.05),差異具有統(tǒng)計學意義;補腎固表顆粒低、中、高劑量組之間比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.脾臟系數(shù):與空白對照組比較,環(huán)磷酰胺模型小鼠脾臟系數(shù)減低;與模型組比較,灌胃給藥后,玉屏風顆粒組、補腎固表顆粒各劑量組小鼠脾臟系數(shù)均增加(P0.05),差異具有統(tǒng)計學意義;補腎固表顆粒低、中、高劑量組之間的量效關(guān)系比較,差異不具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.小鼠脾淋巴細胞增殖能力:與空白對照組比較,環(huán)磷酰胺模型組小鼠脾淋巴細胞增殖能力顯著下降(P0.01)。與模型組小鼠相比,灌胃給藥后補腎固表顆粒各劑量組及玉屏風顆粒組脾淋巴細胞的增殖能力提高,并接近正常水平,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.小鼠NK細胞殺傷活性:與空白對照組比較,模型組小鼠NK細胞殺傷活性降低,其差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與模型組比較,灌胃給藥后補腎固表顆粒各劑量組及玉屏風顆粒組NK細胞殺傷活性增高,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。補腎固表顆粒高劑量組殺傷活性強于低劑量組和玉屏風顆粒組,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。5.血清IL-2、IFN-γ及TNF-α水平變化:與空白對照組比較,模型組小鼠血清IL-2、IFN-γ水平降低,TNF-α水平升高,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05),給藥后,補腎固表顆粒各劑量組及玉屏風顆粒組血清IL-2、IFN-γ水平升高,TNF-α水平降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。補腎固表顆粒中、高劑量組升高IL-2水平優(yōu)于玉屏風顆粒組(P0.05)。補腎固表顆粒中、高劑量組升高IFN-γ水平優(yōu)于低劑量組(P0.05)補腎固表顆粒各劑量組間TNF-α水平量效關(guān)系比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。6.急性毒性實驗組小鼠給藥數(shù)分鐘后,小鼠活動稍減,4小時后恢復正常。給藥第2天小鼠食量明顯下降,隨后即增長,無其他異常表現(xiàn)。觀察期間小鼠體重總體呈增長趨勢。通過統(tǒng)計學分析,提示差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。觀察期內(nèi),小鼠毛色光亮,無興奮、躁動、豎毛、凸眼、扭體等反應;攝食、飲水、大小便等均無明顯異常。無小鼠死亡。觀察14天后,對小鼠進行解剖,肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎、胃、腸道等臟器,均未見出血、充血、水腫等明顯的病理變化。結(jié)論1.采用腹腔注射環(huán)磷酰胺能夠建立免疫低下小鼠模型,造模后小鼠飲食減少,扎堆明顯,體重下降,脾臟系數(shù)減低,脾淋巴細胞增殖能力、NK細胞殺傷活性減低,說明環(huán)磷酰胺造模成功。2.補腎固表顆粒能明顯增強免疫低下小鼠脾淋巴細胞增殖能力、NK細胞殺傷活性,提高機體細胞免疫能力。3.補腎固表顆�？梢蕴岣呙庖叩拖滦∈笱錓L-2和IFN-γ水平,降低TNF-α水平,通過調(diào)節(jié)細胞因子水平,從而調(diào)節(jié)細胞免疫和體液免疫功能,增強機體的免疫力。4.補腎固表顆粒常用劑量口服給藥安全。
【學位單位】：山西中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2020
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

補腎固表顆粒對免疫低下小鼠的影響及安全性評價7表2各組小鼠體重比較()組別n體重造模前造模后給藥后空白對照組1023.0±1.4124.50±3.8931.60±0.97模型組1023.6±1.8422.20±3.2927.20±2.70玉屏風組1023.4±1.6522.60±3.2731.10±0.99▲低劑量組1023.2±1.4022.40±2.1532.20±2.44▲▲▲中劑量組1023.2±1.6922.40±2.1232.60±3.27▲▲▲高劑量組1023.6±2.0722.20±1.9032.80±2.15▲▲▲注：與模型組比較，▲p＜0.05，▲▲p＜0.01,▲▲▲p＜0.001；與空白組比較，P＜0.05圖1各組小鼠體重變化1.3.3補腎固表顆粒對小鼠脾重及脾臟系數(shù)的影響與空白對照組比較，模型組小鼠脾重差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；給藥后，與模型組比較，玉屏風顆粒組、補腎固表顆粒各劑量組脾重與脾臟系數(shù)差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。與玉屏風顆粒組比較，補腎固表顆粒高、中、低劑量組脾臟系數(shù)差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。補腎固表顆粒高、中、低劑量之間脾臟系數(shù)差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結(jié)果（見表3、圖2~3）

山西中醫(yī)藥大學2020屆研究生申請碩士學位論文8表3各組小鼠脾重與脾臟系數(shù)的比較（）組別n脾重（mg）脾臟系數(shù)(mg/g)空白對照組10120.56±10.17▲▲▲3.61±0.30模型組1093.3±13.94★★3.34±0.34玉屏風組10117.54±22.33▲▲3.87±0.70▲低劑量組10121.93±12.91▲▲▲4.02±0.42▲▲中劑量組10136.15±24.74▲▲▲4.45±0.56▲▲▲高劑量組10135.03±13.67▲▲▲4.37±0.57▲▲▲注：與模型組比較，▲p＜0.05，▲▲p＜0.01,▲▲▲p＜0.001；與空白組比較，★P＜0.05，★★P＜0.01圖2各組小鼠脾臟重量比較圖3各組小鼠脾臟系數(shù)比較1.3.4對小鼠脾淋巴細胞增殖能力的影響與空白對照組比較，模型組小鼠脾淋巴細胞增殖能力顯著下降（P＜0.01）。給藥后，

山西中醫(yī)藥大學2020屆研究生申請碩士學位論文8表3各組小鼠脾重與脾臟系數(shù)的比較（）組別n脾重（mg）脾臟系數(shù)(mg/g)空白對照組10120.56±10.17▲▲▲3.61±0.30模型組1093.3±13.94★★3.34±0.34玉屏風組10117.54±22.33▲▲3.87±0.70▲低劑量組10121.93±12.91▲▲▲4.02±0.42▲▲中劑量組10136.15±24.74▲▲▲4.45±0.56▲▲▲高劑量組10135.03±13.67▲▲▲4.37±0.57▲▲▲注：與模型組比較，▲p＜0.05，▲▲p＜0.01,▲▲▲p＜0.001；與空白組比較，★P＜0.05，★★P＜0.01圖2各組小鼠脾臟重量比較圖3各組小鼠脾臟系數(shù)比較1.3.4對小鼠脾淋巴細胞增殖能力的影響與空白對照組比較，模型組小鼠脾淋巴細胞增殖能力顯著下降（P＜0.01）。給藥后，
【參考文獻】

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本文編號：2866595