目的:利用固相微萃取技術(shù)測定細辛揮發(fā)性成分并結(jié)合網(wǎng)絡毒理學預測細辛散劑致肝臟毒性的機制;應用代謝組學和轉(zhuǎn)錄組學方法結(jié)合常規(guī)生化方法研究細辛散劑肝臟毒性,深入探討其肝毒性機制。方法:固相微萃取聯(lián)用氣相色譜-質(zhì)譜儀測定細辛揮發(fā)性成分,利用Swiss Target Prediction預測所測得揮發(fā)性成分的靶點,運用Dis Ge NET得到肝損傷或肝毒性靶點,通過構(gòu)建化合物-靶點、疾病-靶點、化合物-靶點-途徑來預測細辛致肝臟毒性的機制。將80只雄性SD大鼠隨機分為四組:對照組、細辛低劑量組、細辛中劑量組、細辛高劑量組,每組20只,灌胃期間給藥28天,對照組每天灌胃同等體積的蒸餾水。分別詳細記錄各組大鼠體重的變化情況。灌胃結(jié)束后,取血清測定肝功能;對肝臟稱重計算肝臟臟器系數(shù),取肝組織進行常規(guī)HE染色觀察其形態(tài)組織學變化,隨后進行代謝組學檢測,結(jié)合多元統(tǒng)計法篩選差異代謝物,并進行代謝通路分析;取對照組和高劑量組大鼠的肝臟進行轉(zhuǎn)錄組測序來尋找差異表達基因,并對其進行GO富集分析以及通路富集分析;最后,利用Met Scape對篩選的差異代謝物和差異表達基因整合分析,探討細辛致肝臟毒性的機制。結(jié)果:(1)化學成分分析共檢測出31種揮發(fā)性成分,潛在靶點共篩選出248個,與肝臟毒性相交的靶點共11個,共富集到5條代謝通路包括PPAR信號通路、化學致癌作用、膽汁分泌、卟啉及葉綠素代謝、細胞色素P450誘導的外源物質(zhì)代謝。(2)與對照組相比,各給藥組大鼠的體重減輕,臟器系數(shù)增大,其中高劑量組大鼠的變化最明顯(P0.05)。肝功能結(jié)果顯示,灌胃細辛后大鼠ALT、AST、TBil和ALP增高,TP降低,高劑量組肝臟變化最大。HE染色結(jié)果顯示,不同劑量組大鼠顯示出不同程度的肝損傷,表現(xiàn)為肝細胞發(fā)生氣球樣變性、細胞質(zhì)變松散、出現(xiàn)點狀壞死等現(xiàn)象。(3)根據(jù)GC-MS圖譜篩選出14個差異代謝物,與對照組相比,低中高劑量組大鼠肝臟中乳酸、丙氨酸、天冬氨酸、磷酸乙醇酸、�；撬帷⒛咎谴�、山梨糖醇、肌醇的含量升高;脯氨酸、甲硫氨酸、核糖醇、亞精胺、海藻糖、麥芽三糖的含量降低;通路富集結(jié)果顯示,細辛影響肝臟的代謝通路主要有:磷酸肌醇代謝、半乳糖代謝、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝、精氨酸和脯氨酸代謝、�；撬岷蛠喤；撬岬拇x。(4)對轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果分析共發(fā)現(xiàn)有顯著變化的基因共434個,其中顯著上調(diào)的基因有214個,顯著下調(diào)的基因有220個。這些差異表達基因經(jīng)富集分析后主要與晝夜節(jié)律、p53信號傳導途徑、代謝途徑、類固醇生物合成、膽汁分泌等通路有關(guān)。結(jié)論:(1)高劑量細辛散劑長期服用對大鼠肝臟和組織形態(tài)有損傷,且這種損傷與給藥劑量呈正相關(guān),即給藥劑量越高,肝損傷程度越大。(2)細辛對肝臟的毒性作用機制與膽汁酸代謝、氨基酸代謝、磷酸肌醇代謝、半乳糖代謝、晝夜節(jié)律、p53信號傳導途徑密切相關(guān)。
【學位單位】：湖北中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2020
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

湖北中醫(yī)藥大學2020屆碩士學位論文6VisualizationandIntegratedDiscovery，https://david.ncifcrf.gov/）進行通路富集分析。3結(jié)果3.1HPLC測定細辛脂素結(jié)果測定三個批次細辛的中細辛脂素的含量，結(jié)果如下表1.1。依照《中國藥典》2015版細辛項下測定，按干燥品計算，含細辛脂素不得少于0.050%。根據(jù)所測細辛脂素含量可知：在本實驗檢測中，所購買的細辛根及根莖中細辛脂素的含量均符合國家藥典標準，為正品細辛。供試品及對照品色譜圖如圖1.1所示。表1.1細辛脂素含量測定結(jié)果批號細辛脂素含量（μg/mL）百分比（%）20180801268.930.41420180901469.590.41820181100169.990.420注：A:細辛脂素標準品色譜圖；B:細辛樣品色譜圖圖1.1細辛脂素標準品及細辛供試品色譜圖

湖北中醫(yī)藥大學2020屆碩士學位論文81715.087Camphene莰烯79-92-51.40%1815.2644-nonenol4-萜烯醇562-74-30.77%1915.4753,5-Dimethoxytoluene3，5-二甲氧基甲苯4179-19-55.42%2015.886Elemicin欖香素487-11-62.20%2115.986Nerolidol橙花叔醇40716-66-30.27%2216.286γ-Asaroneγ-細辛腦5353-15-10.87%2317.0312-nonanol2-莰醇464-45-90.17%2417.453methylisopropylalcohol對甲基苯異丙醇1197-01-90.12%2517.831Myristicine肉豆蔻醚607-91-017.66%2618.208Patchoulialcohol百秋李醇5986-55-01.50%2718.7974-allylanisole4-烯丙基苯甲醚140-67-00.80%2819.8533,4,5-trimethoxytoluene3，4，5-三甲氧基甲苯6443-69-29.19%2920.5192-isopropyl-5-methylanisole2-異丙基-5-甲基茴香醚1076-56-80.29%3024.2973,4-propiophenone3，4-（亞甲基二氧）苯丙酮28281-49-40.07%3125.063Carcinol卡枯醇18607-90-40.93%圖1.2細辛揮發(fā)性成分總離子流圖3.3化學成分靶點及肝毒性靶點通過SwissTargetPrediction平臺檢索出與31種揮發(fā)性成分相關(guān)的靶

基于代謝組學和轉(zhuǎn)錄組學的細辛散劑肝毒性機制研究9點共2534個，篩選Probability大于0.05為潛在靶點共248個。各候選化合物所含靶點數(shù)目見下表1.3，將化合物與其相關(guān)靶點的相互作用網(wǎng)絡可視化，如圖1.3所示。經(jīng)過篩選共有23個化合物有對應靶點，其中甲基丁香酚、3，4-（亞甲基二氧）苯丙酮、橙花叔醇、3，4，5-三甲氧基甲苯、百秋李醇含有靶點數(shù)目較多，分別為52、46、26、25、20個靶點。DisGeNET數(shù)據(jù)庫中以“Drug-InducedLiverDisease”和“Chemically-InducedLiverToxicity”為關(guān)鍵詞搜索肝毒性靶點，整理后共得376個靶點，將疾病與其相關(guān)靶點的相互作用網(wǎng)絡可視化，如圖1.4所示。注：化合物靶點圖1.3化合物與其相關(guān)靶點的相互作用網(wǎng)絡圖注：疾病靶點圖1.4疾病與其相關(guān)靶點的相互作用網(wǎng)絡圖
【參考文獻】

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1 董小艷;周禎祥;游姣娥;李晶晶;汪瓊;黃芳;;細辛散劑長期毒性對SD大鼠肝腎功能的影響[J];光明中醫(yī);2015年12期

2 練雪萍;艾妮;陸曉燕;范驍輝;;毒理基因組學及其在中藥安全性研究中的應用進展[J];中國中藥雜志;2015年14期

3 謝麗華;樊星;李澤君;熊克朝;呼丹;劉悅;吳純啟;丁日高;王茜莎;王全軍;;轉(zhuǎn)錄組學技術(shù)在中藥肝毒性研究中的應用[J];中草藥;2015年10期

4 李曉宇;黃娜娜;孫蓉;;蛋白組學技術(shù)在中藥肝毒性中的應用[J];中國藥物警戒;2015年05期

5 黃幼異;孫蓉;;系統(tǒng)生物學技術(shù)用于中藥肝毒性發(fā)現(xiàn)與評價的研究進展[J];中國藥物警戒;2013年04期

6 劉志華;孫曉波;;網(wǎng)絡藥理學:中醫(yī)藥現(xiàn)代化的新機遇[J];藥學學報;2012年06期

7 范驍輝;趙筱萍;金燁成;申秀萍;劉昌孝;;論建立網(wǎng)絡毒理學及中藥網(wǎng)絡毒理學研究思路[J];中國中藥雜志;2011年21期

8 楊偉峰;周禎祥;汪瓊;李晶晶;;超劑量細辛對SD大鼠肺組織和呼吸功能影響的實驗研究[J];河南中醫(yī)學院學報;2009年04期

9 田廣宇;陳文霞;周禎祥;;細辛的現(xiàn)代臨床應用與思考[J];湖北中醫(yī)學院學報;2009年03期

10 蔡青;周禎祥;陳澤斌;李晶晶;汪瓊;胡平;;細辛長期毒性對大鼠肺組織形態(tài)學及動脈血氣的影響[J];湖北中醫(yī)雜志;2007年04期

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1 李亞敏;基于網(wǎng)絡藥理學和多組學的細辛肺毒性機制研究[D];湖北中醫(yī)藥大學;2019年

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1 李宗瑾;基于轉(zhuǎn)錄組學和代謝組學研究大腸桿菌K12碳降解物阻遏作用[D];深圳大學;2017年

2 游姣娥;細辛對SD大鼠心臟毒性的藥理學及NMR代謝組學研究[D];湖北中醫(yī)藥大學;2016年

3 紀彩;基于毒理基因組學的川楝子肝毒性研究[D];浙江大學;2015年

4 徐建兵;細辛毒性靶器官研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2013年

本文編號：2859124