本文關(guān)鍵詞：人乳寡糖的分離純化及其結(jié)構(gòu)解析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：人乳寡糖(HMOs)有益生、抗病毒和促進(jìn)嬰兒大腦發(fā)育等多種生物活性,然而人乳寡糖的合成瓶頸限制了人乳寡糖構(gòu)效關(guān)系的研究,這就凸顯了分離純化天然人乳寡糖的重要性。本文以人乳為原料,經(jīng)離心脫脂、除蛋白后獲得HMOs粗提取物,粗品得率為53g/L,其總糖含量為92.5%(W/W),蛋白含量為3.7%(W/W)。首次聯(lián)合運(yùn)用低壓凝膠滲透色譜、高效離子交換色譜、多孔石墨化碳色譜分離純化技術(shù)分離獲得了18個(gè)中性人乳寡糖和8個(gè)酸性人乳寡糖組分,并運(yùn)用電噴霧碰撞誘導(dǎo)串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(ESI-CID-MS/MS)對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析。結(jié)果表明,獲得的寡糖聚合度為3-9,且同一聚合度的寡糖有連接方式不同的異構(gòu)體。在得到的18種天然中性人乳寡糖中,三糖異構(gòu)體有2種,四糖異構(gòu)體有2種,五糖異構(gòu)體有3種,六糖異構(gòu)體有2種,七糖異構(gòu)體有2種,八糖異構(gòu)體有4種,九糖異構(gòu)體有2種：在得到的8種天然酸性人乳寡糖中,三糖異構(gòu)體2種,五糖異構(gòu)體2種,六糖異構(gòu)體2種,七糖和八糖各1種。這些寡糖主鏈的二元結(jié)構(gòu)核心單元Galβ1-4Glc和Galβ1-3GlcNAc或Galβl-4GlcNAc,且還原端二元結(jié)構(gòu)為Gal/β1-4Glc,各二元結(jié)構(gòu)之間通過β1-3或β1-6連接,Fuc可連接在Gal的C2位、Glc的C3位、GlcNAc的C3或C4位；Neu5Ac連接在GlcNAc的C6位、Gal的C3或C6位上。本文首次利用多維色譜技術(shù)將結(jié)構(gòu)復(fù)雜的人乳寡糖進(jìn)行分離,獲得了包括不同異構(gòu)體在內(nèi)的26種天然人乳寡糖,并采用先進(jìn)的ESI-CID-MS/MS技術(shù)確定了它們的結(jié)構(gòu)序列,克服了非衍生寡糖異構(gòu)體分離度較低以及寡糖異構(gòu)體結(jié)構(gòu)確定難的問題,為進(jìn)一步從事人乳寡糖構(gòu)校關(guān)系的研究奠定了方法學(xué)參考。
【關(guān)鍵詞】：人乳寡糖 石墨化碳色譜 分離純化 電噴霧碰撞誘導(dǎo)串聯(lián)質(zhì)譜 結(jié)構(gòu)解析
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R151
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-11
• 第一章 前言11-28
• 1 人乳寡糖的分離純化技術(shù)11-15
• 1.1 薄層色譜法12
• 1.2 凝膠色譜法12
• 1.3 離子交換色譜法12-13
• 1.4 親和色譜法13
• 1.5 高效毛細(xì)管電泳法13
• 1.6 吸附色譜法13-14
• 1.7 多孔石墨化碳色譜14-15
• 2 人乳寡糖的結(jié)構(gòu)與含量分析研究進(jìn)展15-21
• 2.1 人乳寡糖的結(jié)構(gòu)研究16-20
• 2.2 人乳寡糖的含量20-21
• 3 人乳寡糖的合成21-23
• 3.1 人乳寡糖的體內(nèi)合成途徑21-22
• 3.2 人乳寡糖的酶合成22-23
• 3.3 人乳寡糖的化學(xué)合成23
• 4 人乳寡糖的活性研究23-27
• 4.1 免疫調(diào)節(jié)作用24
• 4.2 抗病毒活性24-26
• 4.3 調(diào)節(jié)腸道微生物生長(zhǎng)26
• 4.4 促進(jìn)大腦發(fā)育26-27
• 5 研究目的及意義27-28
• 第二章 人乳寡糖的提取方法研究28-37
• 1 引言28
• 2 試劑儀器及材料28-29
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料28
• 2.2 實(shí)驗(yàn)試劑28
• 2.3 實(shí)驗(yàn)儀器28-29
• 3 實(shí)驗(yàn)方法29-32
• 3.1 脫脂29
• 3.2 除蛋白29-30
• 3.3 粗品POS的理化性質(zhì)研究30-32
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論32-36
• 4.1 總糖和蛋白含量檢測(cè)32-33
• 4.2 單糖組成測(cè)定33-34
• 4.3 唾液酸測(cè)定34-36
• 5 小結(jié)36-37
• 第三章 人乳寡糖的分離純化研究37-52
• 1 引言37
• 2 儀器及試劑37-38
• 2.1 實(shí)驗(yàn)試劑37-38
• 2.2 實(shí)驗(yàn)儀器38
• 3 實(shí)驗(yàn)方法38-41
• 3.1 中性和酸性人乳寡糖的分離38-39
• 3.2 中性人乳寡糖的凝膠柱分離39-40
• 3.3 人乳寡糖的PGC色譜分離40-41
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論41-50
• 4.1 中性和酸性人乳寡糖分離方法討論41-43
• 4.2 中性人乳寡糖的凝膠柱分離效果分析43-46
• 4.3 人乳寡糖的PGC色譜分離46-50
• 5 小結(jié)50-52
• 第四章 人乳寡糖的結(jié)構(gòu)序列分析研究52-70
• 1 引言52
• 2 儀器與試劑52
• 3 實(shí)驗(yàn)方法52-53
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論53-69
• 4.1 中性人乳寡糖的結(jié)構(gòu)序列分析53-64
• 4.2 酸性人乳寡糖的結(jié)構(gòu)序列分析64-69
• 5 小結(jié)69-70
• 結(jié)語70-71
• 創(chuàng)新點(diǎn)71-72
• 參考文獻(xiàn)72-81
• 發(fā)表的學(xué)術(shù)文章81-82
• 致謝82

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本文編號(hào)：277171