本文關(guān)鍵詞：高效親和層析填料的制備，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：蛋白A親和層析載量高、操作簡單、一步就能得到純度很高的抗體,無論是在歐美發(fā)達(dá)國家還是中國,絕大部分抗體純化的第一步都選擇了蛋白A親和層析。每升蛋白A親和層析填料價格超過1萬美元,是抗體產(chǎn)品生產(chǎn)成本中的重要因素。為了降低抗體生產(chǎn)成本,本文嘗試制備蛋白A親和層析填料,最終得到了高質(zhì)量的填料。首先,我們選擇了3種不同材料的基質(zhì)作為填料的骨架,即Sepharose 4FF、Profinity Epoxide和Polar MC60-Epoxy,其中Sepharose 4FF在600cm/h的線性流速時的壓力就高達(dá)3.5bar,背景壓力高、耐壓性較差,首先被排除,Profinity Epoxide在保留時間僅為0.5分鐘時的動態(tài)載量就達(dá)到了靜態(tài)載量的52.8%,傳質(zhì)速率比Polar MC60-Epoxy明顯要好,所以我們最終選擇了Profinity Epoxide作為我們進(jìn)行交聯(lián)的骨架。其次,通過比濁法確定了蛋白A在不同鹽濃度下的穩(wěn)定性,通過正交實驗確定了最佳pH和最佳溫度,通過全因素實驗確定了最佳的鹽濃度和反應(yīng)時間。然后比較了不同蛋白A添加量對載量的影響,確定了最佳的蛋白A添加量。通過這幾個實驗確定了所有影響交聯(lián)的參數(shù),即pH為8.5,鹽濃度為1.3mol/L Na2SO4,反應(yīng)溫度為37℃,反應(yīng)時間為4小時,蛋白A的添加量為8mg蛋白A/mL基質(zhì)。最后我們又進(jìn)行了放大和重復(fù),證明了該工藝穩(wěn)定可放大。最后,我們對所制備的蛋白A親和層析填料進(jìn)行了評價。自制的蛋白A親和層析填料在保留時間為8分鐘時動態(tài)載量為34.5mg/mL,在線性流速為1000cm/h時背景壓力僅為2.7bar,實際使用時的蛋白A脫落為10ppm。最后,用自制的蛋白A親和層析填料純化了3株抗體,結(jié)果顯示自制填料純化抗體收率高,純度好。本文建立了一種有效的蛋白A親和層析填料制備方法,所得填料剛性強(qiáng)、傳質(zhì)快、背壓低、載量高、收率高、純度好,可以有效降低抗體的生產(chǎn)成本,為國產(chǎn)蛋白A親和填料的制備提供了一種行之有效的方法。
【關(guān)鍵詞】：親和層析 蛋白A 抗體 純化 交聯(lián)
【學(xué)位授予單位】：北京理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-11
• 第1章 緒論11-19
• 1.1 本論文研究的目的和意義11-12
• 1.2 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢12-19
• 1.2.1 蛋白A簡介12-15
• 1.2.2 蛋白A親和層析的原理15-17
• 1.2.3 蛋白A親和層析填料的現(xiàn)狀17-19
• 第2章 基質(zhì)的選擇19-26
• 2.1 引言19
• 2.2 材料與試劑19-20
• 2.2.1 主要儀器與設(shè)備19-20
• 2.2.2 主要試劑與材料20
• 2.2.3 主要溶液及配方20
• 2.3 實驗方法20-22
• 2.3.1 基質(zhì)的剛性20-21
• 2.3.2 基質(zhì)的傳質(zhì)速率21-22
• 2.4 實驗結(jié)果22-25
• 2.4.1 三種基質(zhì)的剛性22-23
• 2.4.2 基質(zhì)的傳質(zhì)速率23-25
• 2.5 小結(jié)25-26
• 第3章 偶聯(lián)條件的優(yōu)化26-38
• 3.1 引言26
• 3.2 材料與試劑26-27
• 3.2.1 主要儀器與設(shè)備26
• 3.2.2 主要試劑與材料26-27
• 3.2.3 主要溶液及配方27
• 3.3 實驗方法27-33
• 3.3.1 蛋白A的穩(wěn)定性27-28
• 3.3.2 偶聯(lián)條件的優(yōu)化28-31
• 3.3.3 蛋白A的加入量31-32
• 3.3.4 放大與與重復(fù)32-33
• 3.4 實驗結(jié)果33-37
• 3.4.1 蛋白A的穩(wěn)定性33
• 3.4.2 偶聯(lián)條件的優(yōu)化33-36
• 3.4.3 蛋白A的加入量36-37
• 3.4.4 放大與重復(fù)37
• 3.5 小結(jié)37-38
• 第4章 填料的評價38-45
• 4.1 引言38
• 4.2 材料與試劑38-39
• 4.2.1 主要儀器與設(shè)備38
• 4.2.2 主要試劑與材料38
• 4.2.3 主要溶液及配制方法38-39
• 4.3 實驗方法39-40
• 4.3.1 蛋白A親和層析填料的動態(tài)載量39
• 4.3.2 蛋白A親和層析填料的壓力流速關(guān)系39
• 4.3.3 蛋白A的脫落39-40
• 4.3.4 實際抗體純化應(yīng)用40
• 4.4 實驗結(jié)果40-44
• 4.4.1 蛋白A親和層析填料的動態(tài)載量40-41
• 4.4.2 蛋白A親和層析填料的壓力流速關(guān)系41-42
• 4.4.3 蛋白A的脫落42
• 4.4.4 實際抗體純化應(yīng)用42-44
• 4.5 小結(jié)44-45
• 結(jié)論45-47
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 致謝52

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 包海生;高秀峰;鄭雪妮;李永生;;殼聚糖鋅離子固定化親和層析填料的制備與性質(zhì)[J];中國生物工程雜志;2012年05期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 耿彥杰;高效親和層析填料的制備[D];北京理工大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：高效親和層析填料的制備，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：267808