【摘要】：目的:十溴聯(lián)苯醚(decabromodiphenyl ether,BDE-209)作為一種重要的環(huán)境內分泌干擾物(environmental endocrine disruptors,EEDs)被廣泛用做阻燃劑添加于電器和生活用品中,是一種能夠干擾體內激素的合成、分泌、運輸、結合、作用、代謝的物質,具有神經(jīng)、生殖、甲狀腺和免疫毒性。因有研究表明多溴聯(lián)苯醚的濃度與新生兒的體重呈負相關,減輕附睪重量,其表現(xiàn)出生命早期毒性作用,同時雌激素受體(estrogen receptor,ER)有調控睪丸支持細胞增殖的作用,故為研究睪丸雌激素受體α(estrogen receptorα,ERα)在圍生期BDE-209暴露對F1雄性小鼠血睪屏障的破壞作用,使用ICR小鼠探討B(tài)DE-209對睪丸ERα、Formin1、F-actin,血睪屏障(blood-testis barrier,BTB)相關蛋白(claudin-11,occludin,ZO-1)表達以及BTB結構破壞的影響;此外,使用BDE-209以及ERα的特異性抑制劑MPP(Methyl-Piperidino-Pyrazole)共同作用于SerW3細胞,檢測ERα,Formin1,F-actin和BTB相關蛋白表達水平影響,闡明BDE-209通過上調睪丸ERα致BTB破壞及其分子機制。方法:動物實驗中,取6周齡ICR雄鼠24只,雌鼠48只適應性飼養(yǎng)5天后,合籠取孕鼠,當天記為孕0天(GD0),按隨機數(shù)字表法將小鼠分到對照組(玉米油100mg/kg BW組),BDE-209 100 mg/kg BW組,BDE-209 300mg/kg BW組,BDE-209 500 mg/kg BW組。對妊娠(GD)7天后的F0母鼠進行經(jīng)口灌胃BDE-209處理,每天清晨灌胃處理一次,連續(xù)灌胃至產(chǎn)后(PND)21天。每天清晨對F0孕鼠稱重,紀錄F0孕鼠致F1小鼠出生后21天F0孕鼠體重;記錄PND1 F1小鼠窩仔數(shù),以及PND1至PND35 F1小鼠體重。于PND35和PND105選取F1雄鼠,摘取小鼠眼球保留血樣,待取血結束后選擇頸椎脫臼處死,于冰浴上分離各臟器,將需制作組織形態(tài)學切片臟器按照相應條件儲存,其余臟器立即放于液氮罐中速凍儲存,并及時轉移致-80℃冰箱儲存,當需要對生物樣品進行檢測時取出,且禁止反復凍融。采用實時定量聚合酶鏈反應實驗法,免疫蛋白印跡法,免疫熒光化學發(fā)光法以及免疫組織化學法檢測小鼠睪丸erαmrna和蛋白表達改變,血睪屏障相關蛋白如claudin-11,occludin,zo-1mrna與蛋白表達改變,以及formin1和f-actin蛋白改變,。選擇serw3細胞進行細胞實驗,采用mtt方法檢測24h不同濃度bde-209(0μg/ml、10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml和150μg/ml)和mpp作用后的細胞生存率,確定bde-209染毒劑量。當復蘇或傳代細胞生長狀態(tài)穩(wěn)定后,待細胞覆蓋培養(yǎng)皿80%面積后加入bde-209與mpp,此時細胞密度約為1×108,在bde-209與mpp作用細胞24h后觀察細胞形態(tài)學變化,免疫蛋白印跡法和免疫熒光方法檢測erα,formin1,f-actin,血睪屏障相關蛋白(claudin-11,occludin,zo-1)表達變化。結果:(1)圍生期bde-209暴露致f1雄性小鼠體重與臟器系數(shù)改變:各bde-209劑量組與對照組相比,不同時期體重均出現(xiàn)了不同程度下降(p0.05);f1雄性小鼠生殖系統(tǒng)的各臟器系數(shù)表現(xiàn)為:pnd35時期,附睪的100mg/kgbw組與對照組相比,臟器系數(shù)上升,且差異有統(tǒng)計學意義(p0.05),pnd105時期睪丸:各bde-209組與對照組相比臟器系數(shù)下降,且差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);(2)圍生期bde-209暴露上調f1雄性小鼠睪丸erαmrna,erα蛋白且mpp抑制bde-209上調serw3細胞erα蛋白表達:與對照組相比,pnd35時期的500mg/kgbw組的erαmrna表達上調(p0.05);而pnd105時期f1小鼠的300mg/kgbw組,500mg/kgbw組的erα表達上調(p0.05);通過免疫組織化學法觀察雄性f1小鼠睪丸組織中erα的表達水平,pnd35時期300mg/kgbw與500mg/kgbw組睪丸中erα表達明顯增加;pnd105時期500mg/kgbw組睪丸中erα表達明顯增加;細胞實驗中serw3細胞的bde-209組的erα蛋白的表達量明顯高于對照組(p0.05);(3)圍生期bde-209暴露下調f1雄性小鼠睪丸formin1且mpp抑制bde-209下調serw3細胞formin1表達:pnd35時期300mg/kgbw組,500mg/kgbw組與對照組相比,formin1表達下調(p0.05);而pnd105時期小鼠的所有bde-209組的formin1的表達明顯低于對照組(p0.05);細胞實驗中serw3細胞的bde-209組的Formin1的表達明顯低于對照組(P0.05);(4)圍生期BDE-209暴露下調F1雄性小鼠睪丸F-actin且MPP抑制BDE-209下調SerW3細胞F-actin表達:PND35時期的F-actin的表達變化為300mg/kg BW組,500mg/kg BW組與對照組相比,表達下調(P0.05),細胞實驗中SerW3細胞的各個BDE-209組的F-actin的表達明顯低于對照組(P0.05);(5)圍生期BDE-209暴露下調F1雄性小鼠睪丸BTB相關蛋白的mRNA與蛋白表達且MPP抑制BDE-209下調SerW3細胞BTB相關蛋白表達:PND35與PND105兩個階段的claudin-11 mRNA:300mg/kg BW組,500mg/kg BW組表達明顯低于對照組(P0.05),而ZO-1與occludin分子的mRNA的表達為只有PND35時期各BDE-209組的表達明顯低于對照組(P0.05);PND35時期的claudin-11:500mg/kg組相對于對照組表達下降(P0.05),而在PND105時期,300mg/kg BW組,500mg/kg BW劑量組表達低于對照組(P0.05);PND35與PND105時期ZO-1 300mg/kg BW組,500mg/kg BW組表達量均顯著低于對照組(P0.05);occludinPND105時期BDE-209的300mg/kg BW組,500mg/kg BW組表達明顯低于對照組(P0.05);細胞實驗中BDE-209組的claudin-11,occludin的表達量與對照組相比,明顯較低(P0.05),其余BDE-209組claudin-11,occludin的表達量相對于對照組差異無統(tǒng)計學意義,而ZO-1表達量在BDE-209組與對照組間無差異。(6)圍生期BDE-209暴露致F1雄性小鼠組織形態(tài)學指標:HE切片發(fā)現(xiàn)兩個時期小鼠的睪丸組織的曲系精管出現(xiàn)不同程度損傷以及精子數(shù)目的改變,超微電鏡中各劑量組中緊密連接結構出現(xiàn)了不同程度的破壞,Sertoli細胞內細胞器也出現(xiàn)不同程度改變。結論:十溴聯(lián)苯醚可以引起睪丸組織以及睪丸支持細胞SerW3細胞系中ERα表達上升,Formin1,F-actin以及血睪屏障緊密連接相關蛋白表達下調,并且引起睪丸組織中支持細胞緊密連接破壞,提示BDE-209通過上調ERα表達破壞小鼠血睪屏障。
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【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R114

【參考文獻】

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1 李俊;戴瑞雪;陳道俊;王承敏;林浩飛;李玉榮;唐靜;翟金霞;;十溴聯(lián)苯醚對小鼠血睪屏障的損傷及絲裂原活化蛋白激酶通路相關蛋白的影響[J];中華預防醫(yī)學雜志;2016年12期

2 戴瑞雪;翟金霞;任征;丁承輝;林浩飛;李玉榮;李俊;;父源性十溴聯(lián)苯醚暴露下調雄性子鼠睪酮水平和精子數(shù)[J];安徽醫(yī)科大學學報;2015年10期

3 CHEN Li;CAO Dan;LI Lu Xi;ZHAO Yan;XIE Chang Ming;ZHANG Yun Hui;;Assessment of Exposure to Polybrominated Dipheny Ethers via Inhalation and Diet in China[J];Biomedical and Environmental Sciences;2014年11期

4 王漢永;翟金霞;劉婷;戴瑞雪;任征;丁承輝;林浩飛;;十溴聯(lián)苯醚對青春期雄性小鼠精子數(shù)及睪酮的影響[J];中華疾病控制雜志;2014年10期

5 朱虔兮;黃宇烽;;內分泌干擾物對精液質量的影響[J];中華男科學雜志;2011年10期

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本文編號：2311026