本文選題：五倍子 + 兒茶　； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:艱難梭菌(Clostridium difficile,CD)屬厭氧性梭菌,CD產(chǎn)毒株的危害性大于非產(chǎn)毒株,兩者均可以定植在人類腸道,是引起抗生素相關(guān)性腹瀉的主要病原菌。CD作為傳播媒介,可在院內(nèi)引起感染以及院外引起流行傳播。由艱難梭菌感染(Clostridium difficile infection,CDI)造成的患者的死亡率在全世界呈上升趨勢(shì)。腹瀉為CDI常見臨床癥狀。進(jìn)入21世紀(jì)后,CD高產(chǎn)毒株027/NAPl/BI在加拿大、北美、歐洲等多地區(qū)出現(xiàn)暴發(fā)流行,死亡率及復(fù)發(fā)率高。CD形成的芽孢可抵抗多種理化因素,包括醫(yī)院常用的酒精類消毒劑、潮濕土壤、空氣等。目前指南推薦輕、中度CD患者以口服甲硝唑?yàn)橹?重度患者以口服萬(wàn)古霉素為主。但這兩種藥物治療后可復(fù)發(fā),并且對(duì)人體的副作用比較大。2011年FDA批準(zhǔn)上市的非達(dá)霉素治療艱難梭菌效果顯著,但其價(jià)錢昂貴,使其在臨床應(yīng)用受到限制。中藥在我國(guó)有著悠久的歷史,其中很多中藥具有消炎抗菌的作用。有鑒于此,我們選擇了具有收斂固澀作用的五倍子、清熱燥濕作用的黃芩和黃連、以及具有斂瘡功效的兒茶和具有清熱解毒作用的連翹進(jìn)行CD體外抗菌實(shí)驗(yàn),探討其是否有CD抗菌活性,以便為中藥治療CDI提供思路和方法。方法:1本實(shí)驗(yàn)所用的菌株來(lái)自河北省醫(yī)學(xué)微生物菌種保存中心(Hebei centre for medical culture collection,HBCMCC)。共選取了來(lái)自不同地區(qū)不同分離期間的130株菌株,根據(jù)菌落形態(tài)、特殊氣味、涂片染色、毒素、質(zhì)譜以及16srDNA測(cè)序等鑒定為CD。2提取CD基因組DNA,擴(kuò)增16s~23s間隔區(qū)序列并進(jìn)行電泳,根據(jù)電泳的具體位置來(lái)確定CD的PCR核糖體型別,經(jīng)多重PCR擴(kuò)增毒素基因,擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)電泳來(lái)確定CD的產(chǎn)毒情況,并研究中藥的MIC和CD的PCR核糖體型別之間的關(guān)系。3選取中藥五倍子、黃連、黃芩、兒茶及連翹進(jìn)行煎制,采用瓊脂稀釋法對(duì)中藥五倍子、黃連、黃芩、連翹及兒茶進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。結(jié)果:1本實(shí)驗(yàn)共選取130株cd,菌株主要來(lái)源于石家莊、邢臺(tái)、滄州地區(qū),時(shí)間從2010到2014年,男女比例為70:60。毒素a毒素b陽(yáng)性二元毒素陰性(tcda+tcdb+cdta-cdtb-)的cd數(shù)目是105株,毒素a毒素b陽(yáng)性二元毒素陽(yáng)性(tcda+tcdb+cdta+cdtb+)的cd數(shù)目是3株,毒素a毒素b陰性二元毒素陰性(tcda-tcdb-cdta-cdtb-)的cd數(shù)目是22株。130株cd的pcr核糖體型別數(shù)目共36個(gè),其中hb1型最多,共有23株,其次為hb5型18株,hb6型17株,三者共占44.6%(58/130)。2本實(shí)驗(yàn)測(cè)定了5味中藥對(duì)130株cd的體外抗菌活性,結(jié)果顯示:五倍子對(duì)cd有較強(qiáng)的抗菌活性,其mic為0.086-0.249mg/ml,130株cd的mic分別為:0.086mg/ml(25株)、0.098mg/ml(26株)、0.113mg/ml(27株)、0.125mg/ml(52株)。3黃連對(duì)130株cd的體外抗菌活性較弱,只測(cè)得12株cd的mic,分別為:1.268mg/ml(1株)、2.235mg/ml(1株)、2.229mg/ml(1株)、2.392mg/ml(4株)、2.822mg/ml(3株)、2.882mg/ml(2株)、其余118株的mic2.229mg/ml。4兒茶對(duì)130株cd有抗菌活性,其mic為4.128-22.423mg/ml。130株cd的mic分別為:16.200mg/ml(4株)、8.100mg/ml(22株)、10.217(26株)、8.256mg/ml(25株)、4.128mg/ml(1株)、22.423mg/ml(1株)、11.212mg/ml(25株)、12.191mg/ml(19株)、6.096mg/ml(7株)。5通過黃芩和連翹對(duì)130株cd的體外抗菌實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):黃芩和連翹對(duì)cd無(wú)抗菌活性,其mic分別為3.844mg/ml和3.927mg/ml。6綜合分析中藥的mic值和130株cd的pcr核糖體型別的關(guān)系發(fā)現(xiàn):五倍子的mic值在本地區(qū)優(yōu)勢(shì)型別(hb1、hb5、hb6)菌株組要低于非優(yōu)勢(shì)型別(除hb1、hb5、hb6之外型別)菌株組(x2=4.084,p=0.043);兒茶的mic值在本地區(qū)優(yōu)勢(shì)型別菌株組和非優(yōu)勢(shì)型別菌株組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=0.019,p=0.89)。結(jié)論:1五倍子、兒茶和黃連對(duì)cd有體外抗菌活性,期待作為潛在治療藥物。2黃芩和連翹對(duì)CD無(wú)抗菌活性。3五倍子對(duì)CD的MIC值,在優(yōu)勢(shì)型別菌株組低于非優(yōu)勢(shì)型別菌株組;兒茶對(duì)CD的MIC值,在優(yōu)勢(shì)型別菌株組和非優(yōu)勢(shì)型別菌株組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[Abstract]:Objective : Clostridium difficile ( CD ) belongs to anaerobic clostridial , and the virulence of CD - producing strain is greater than that of non - producing strain . Both of them can be implanted in human intestinal tract , which is the main pathogenic bacterium causing antibiotic - related diarrhea . A total of 130 strains of CD were isolated from different regions . The results showed that the number of cd of 130 strains was 0.08mg / ml ( 25 strains ) , 0.098mg / ml ( 26 strains ) , 0.113 mg / ml ( 27 strains ) and 0.125mg / ml ( 52 strains ) .
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2020859