本文選題：成分分析 + 含量測定��； 參考：《北京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：中藥復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究理論,尚且沒有明確的定義,但是隨著現(xiàn)代分析技術(shù)以及相應(yīng)理論的快速穩(wěn)定發(fā)展,很多研究者在不同層次和不同角度,不斷對其提出新的研究思路和假說。隨著中藥現(xiàn)代化不斷推進(jìn),中藥復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)更是研究熱點(diǎn),發(fā)揮著重要的基礎(chǔ)研究作用,已是闡明中藥藥效藥理作用及其機(jī)制和臨床療效的先決條件。為更深層次開發(fā)研究中藥提供重要支持,是中藥現(xiàn)代化不可缺少的重要組成部分。首先,中藥復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究的前提條件是中藥復(fù)方質(zhì)量控制,中藥指紋圖譜和含量測定對中藥復(fù)方可進(jìn)行綜合評價(jià),全面控制。其次,研究中藥復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)最本質(zhì)的研究是對其化學(xué)成分的確認(rèn),這樣可更清晰的闡述中藥復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。同時(shí),以傳統(tǒng)的藥物化學(xué)為基礎(chǔ),利用現(xiàn)代先進(jìn)分析測試技術(shù),研究藥物進(jìn)入血清中的原型成分和經(jīng)生物轉(zhuǎn)化的代謝產(chǎn)物也作為中藥復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)研究的重要內(nèi)容,對候選藥物篩選,創(chuàng)新中藥和中藥現(xiàn)代化具有重大意義。但是,中藥復(fù)方所含化學(xué)成分?jǐn)?shù)量大,結(jié)構(gòu)類型繁多,含量大小比一,甚至可以達(dá)到痕量級別,也為檢測制造巨大麻煩,而且,傳統(tǒng)研究方法時(shí)間長、效率低,如此多的現(xiàn)實(shí)問題已成為中藥復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)研究的重中之重。因此,如何快速、高效地闡明中藥復(fù)方化學(xué)成分,找到新方法、新技術(shù),突破中藥復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)研究的瓶頸,已成為國內(nèi)外學(xué)者研究熱點(diǎn)問題。糖痹康顆粒(專利申請?zhí)?200810167551.1)主要由黃芪、女貞子、桂枝、赤芍、黃芩、黃連、水蛭、延胡索、雞血藤組成,益氣養(yǎng)陰、解毒化瘀通絡(luò)功效,治療糖尿病周圍神經(jīng)病變具有良好的臨床效果。因該藥未上市,且該制劑的化學(xué)成分尚不明確,為了初步探索糖痹康顆粒的藥效物質(zhì)基礎(chǔ),本課題利用HPLC-DAD高效液相儀、UPLC-LTQ-Orbitrap高分辨液質(zhì)聯(lián)用儀,建立了糖痹康顆粒的質(zhì)量控制方法以及化學(xué)成分快速鑒定方法,并通過建立細(xì)胞模型對糖痹康顆粒中主要成分芍藥內(nèi)酯苷進(jìn)行體外活性作用研究。主要研究內(nèi)容與結(jié)果如下:1糖痹康顆粒質(zhì)量控制研究為了科學(xué)評價(jià)并有效控制糖痹康顆粒劑的質(zhì)量,確保其制備方法穩(wěn)定可行,本實(shí)驗(yàn)通過HPLC高效液相色譜技術(shù),建立了糖痹康顆粒HPLC指紋圖譜以及多成分定量研究方法。結(jié)果表明,本實(shí)驗(yàn)通過對10批糖痹康顆粒進(jìn)行HPLC指紋圖譜構(gòu)建,并分析了糖痹康顆粒的HPLC指紋圖譜與原藥材HPLC圖譜的相關(guān)性,對25個(gè)峰進(jìn)行可能歸屬,明確18個(gè)峰。通過對精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性方法學(xué)考察,可知糖痹康顆粒中25個(gè)共有峰的相對保留時(shí)間和相對保留峰面積的RSD3%,表明所建立的指紋圖譜測定方法符合中藥指紋圖譜建立的技術(shù)要求,可為糖痹康顆粒的制備方法及質(zhì)量控制提供參考。本實(shí)驗(yàn)也通過HPLC-DAD高效液相色譜法,建立了同時(shí)測定糖痹康顆粒中黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素含量的方法,可為多指標(biāo)成分測定質(zhì)量控制提供參考。2糖痹康成分分析研究為了更多檢測出糖痹康顆粒所含化學(xué)成分,實(shí)現(xiàn)化合物的高通量篩選,本實(shí)驗(yàn)利用UPLC-LTQ-Orbitrap的液質(zhì)聯(lián)用分析方法,采用全掃描-動(dòng)態(tài)排除(Full scan-Dynamic exclusion,FS-DE)和數(shù)據(jù)依賴性掃描(data dependent scan,DDS),對糖痹康顆粒進(jìn)行數(shù)據(jù)采集和化學(xué)成分分析。通過利用化合物精確分子量預(yù)測分子式,結(jié)合比對各類化合物對照品的質(zhì)譜裂解規(guī)律,massbank、chemspider、human metlin等數(shù)據(jù)庫質(zhì)譜裂解信息,相關(guān)參考文獻(xiàn)報(bào)道,本實(shí)驗(yàn)在糖痹康顆粒中快速鑒定化合物51個(gè)。黃酮類化合物12個(gè),黃酮苷類化合物8個(gè),生物堿類化合物12個(gè),芍藥苷類化合物6個(gè),苯乙醇苷類化合物2個(gè),酚酸類化合物2個(gè),其他類化合物9個(gè),并對每一種化學(xué)成分進(jìn)行藥材來源歸屬,比較全面反映糖痹康顆粒中化學(xué)成分信息。本實(shí)驗(yàn)通過以上相同方法檢測SD大鼠血清,鑒定體內(nèi)入血成分15個(gè),生物堿類7個(gè),黃酮及其苷類4個(gè),苯乙醇苷類1個(gè),酚酸類1個(gè),代謝產(chǎn)物2個(gè)。通過對糖痹康顆粒體外體內(nèi)化學(xué)成分的檢測鑒定,為其物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供結(jié)果和方法參考,為糖痹康顆粒藥效作用及機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。3芍藥內(nèi)酯苷對大鼠坐骨神經(jīng)雪旺細(xì)胞的保護(hù)作用研究本實(shí)驗(yàn)通過不同濃度的葡萄糖對大鼠坐骨神經(jīng)雪旺細(xì)胞的影響,建立了以150mmol/LD-葡萄糖,培養(yǎng)時(shí)間為48h的細(xì)胞氧化應(yīng)激模型,通過設(shè)立芍藥內(nèi)酯苷高中低組(100μM、20μM、4μM),模型組,陽性藥組(100μM),正常組,利用流式細(xì)胞儀定量檢測細(xì)胞內(nèi)ROS含量和熒光顯微鏡定性觀察細(xì)胞內(nèi)ROS狀態(tài)以及CCK-8檢測細(xì)胞活性,發(fā)現(xiàn)芍藥內(nèi)酯苷可以增加雪旺細(xì)胞增殖并改善氧化應(yīng)激狀態(tài),具有保護(hù)大鼠坐骨神經(jīng)雪旺細(xì)胞的作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R286.0;R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1766809