本文選題：S-5　切入點：肝癌　出處：《鄭州大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：背景和目的:惡性腫瘤嚴重威脅人類身體健康,原發(fā)性肝癌(簡稱肝癌),90%屬于肝細胞癌,為全世界發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一,在中國其死亡率高居所有癌癥第二位[1-3]。手術切除為肝癌最有效的治療手段,但肝癌發(fā)現(xiàn)時多處于晚期,手術難以切除,并且術后復發(fā)率非常高[4-6]。而目前肝癌治療藥物存在嚴重的毒副作用[7-9],且治療效果也不夠理想,遠未滿足臨床需求。因此,尋找新的安全、有效的抗腫瘤藥物具有重大的社會及經濟效益。細胞凋亡是由基因所控制而主動進行的一種程序性的死亡方式[10,11]。由線粒體所介導的內部細胞凋亡途徑[13]和死亡受體介導的外部凋亡通路[12]為發(fā)生細胞凋亡的兩條主要通路,兩條通路最終均通過caspase-3的活化而產生凋亡效應。細胞的凋亡與癌細胞的增殖抑制有著緊密的聯(lián)系,為更多抗癌藥物的開發(fā)提供了新的思路。S-5是一種3-氧代-1,2-萘醌類似物,該類似物經初步驗證具有良好的抗腫瘤作用。在前期相關工作基礎上,本研究探討S-5在體外對人肝癌細胞Huh-7增殖、凋亡的影響及其機制,為進一步開發(fā)S-5成為新的抗肝癌藥物提供重要理論參考。方法:用不同濃度的S-5(0.94~15μmol·L-1)作用于體外培養(yǎng)的Huh-7細胞,采用MTT法檢測細胞生長抑制率;應用FCM(Annexin V-FITC/PI)雙染法檢測細胞凋亡率;運用吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)雙熒光染色法及透射電鏡技術觀察細胞凋亡形態(tài);JC-1法檢測S-5對線粒體膜電位影響;Western blot法檢測S-5對Huh-7細胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3以及Fas、Fas L和TNF-α蛋白表達的影響。結果:1 S-5可顯著抑制Huh-7細胞的增殖(P0.05),作用24h、48h、72h的IC50值分別為:3.955μmol·L-1、3.522μmol·L-1、1.659μmol·L-1,呈明顯的劑量和時間依賴效應。2 S-5作用Huh-7后細胞凋亡率顯著增加(P0.05),經0.94、1.88、3.75、7.5μmol·L-1處理48h后,細胞凋亡率分別為:(7.37±0.40)%、(34.70±1.32)%、(76.87±1.46)%、(95.0±2.0)%,呈明顯的劑量依賴性。3凋亡細胞的形態(tài)發(fā)生改變,出現(xiàn)凋亡小體及細胞質碎片。4 S-5可誘導線粒體膜電位下降并呈劑量依賴性,經0.94、1.88、3.75、7.5μmol·L-1處理48h后,JC-1聚合物與單體的比值分別為:11.65±3.36、5.69±1.17、2.04±1.54、0.67±0.24。5 S-5可抑制細胞中Bcl-2蛋白表達,上調Bax、Caspase3、Fas、Fas L、TNF-α蛋白的表達,均呈劑量依賴性。結論:1 S-5在體外可顯著抑制Huh-7細胞的增殖。2誘導細胞凋亡是S-5抑制Huh-7細胞增殖的重要機制。3 S-5可通過線粒體凋亡途徑和死亡受體通路誘導Huh-7細胞凋亡。
[Abstract]:Background and objective: malignant tumor is a serious threat to human health. 90% of primary liver cancer (HCC) belongs to hepatocellular carcinoma (HCC), which is one of the most common malignant tumors in the world. In China, the mortality rate is the second highest in all cancers [1-3]. Surgical resection is the most effective treatment for liver cancer. And the recurrence rate is very high [4-6]. However, the current treatment of liver cancer has serious side effects [7-9], and the therapeutic effect is not satisfactory, which is far from meeting the clinical needs. Effective antineoplastic drugs have great social and economic benefits. Apoptosis is a programmed mode of death controlled by genes [1011]. Mitochondrial mediated internal cell apoptosis pathway [13] and death response. Somatic mediated external apoptotic pathway [12] is the two main pathway of apoptosis. The apoptosis of the two pathways is closely related to the inhibition of the proliferation of cancer cells, which provides a new idea for the development of more anticancer drugs. S-5 is a 3-oxo-1-2-naphthoquinone analogue. The antitumor effect of S-5 on Huh-7 proliferation and apoptosis of human hepatoma cells in vitro and its mechanism were studied based on the previous related work, and the antitumor effect of S-5 on the proliferation and apoptosis of human hepatoma cells in vitro was investigated. In order to further develop S-5 as a new anti-hepatoma drug, it provides an important theoretical reference. Methods: the cell growth inhibition rate was detected by MTT assay, the apoptosis rate was detected by FCM(Annexin V-FITC / Pi double staining, and the Huh-7 cells were treated with different concentrations of S-5 0.94 渭 mol 路L -1 and 0.94 渭 mol 路L -1, respectively. The effects of S-5 on mitochondrial membrane potential in Huh-7 cells were observed by acridine orange / ethidium bromide AO/ EBB double fluorescence staining and transmission electron microscopy. Western blot assay was used to detect the expression of Bcl-2OU BaxCaspase-3, Fas-FAS L and TNF- 偽 protein in Huh-7 cells. Results: 1 / 1 S-5 significantly inhibited the proliferation of Huh-7 cells (P 0.05). The IC50 values of 24 h / 48 h and 72 h were 3.955 渭 mol 路L -1, 3.522 渭 mol 路L -1 and 3.522 渭 mol 路L -1, 1.659 渭 mol 路L -1, respectively. In a dose-dependent and time-dependent manner, the apoptotic rate of Huh-7 cells increased significantly after treatment with 0.94 渭 mol 路L -1, 1.88 渭 mol 路L -1 and 3.75 渭 mol 路L -1, respectively. The apoptotic rate was 7.37 鹵0.40 and 34.70 鹵1.32, respectively, in a dose-dependent manner. The apoptotic cells showed obvious dose-dependent changes in morphology. The appearance of apoptotic bodies and cytoplasmic fragments of 4.4-S-5 could induce the decrease of mitochondrial membrane potential in a dose-dependent manner. The ratio of JC-1 polymer to monomer was: 1: 11.65 鹵3.36 鹵5.69 鹵1.174.04 鹵1.540.67 鹵0.24.5 S-5 after 48h treatment with 0.94 ~ 1.88 渭 mol 路L ~ (-1), the expression of Bcl-2 protein was inhibited, and the expression of Bax-Caspase3FasFAS FAS / TNF- 偽 protein was up-regulated. Conclusion: 1 / 1 S-5 can significantly inhibit the proliferation of Huh-7 cells and induce apoptosis in vitro. It is an important mechanism that S-5 inhibits the proliferation of Huh-7 cells. 3. 3 S-5 can induce apoptosis of Huh-7 cells through mitochondrial apoptosis pathway and death receptor pathway.
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.7

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本文編號：1569507