本文關鍵詞： GPR84 敗血癥 炎癥反應 巨噬細胞　出處：《華東師范大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：敗血癥是一種全身性的炎癥反應,其發(fā)病率和死亡率都比較高。目前對敗血癥的治療主要采用抗菌治療,但因為有時不能準確地診斷出致病菌,所以該治療手段存在一定的局限性。利用抗炎性藥物實行的免疫治療能夠阻斷敗血癥患者的劇烈炎癥反應,被認為是有效的治療手段。然而,由于對敗血癥的長期性炎癥反應及其調控機制缺乏有效的研究,這種免疫治療手段還沒有達到預期的治療效果。從GEO數(shù)據(jù)庫中檢索發(fā)現(xiàn),在敗血癥感染性休克兒童的血液樣本中,GPR84呈現(xiàn)出高表達,這提示GPR84可能在敗血癥這一疾病中發(fā)揮了一定的調控作用。游離脂肪酸受體GPR84(G-protein coupled receptor 84)是游離脂肪酸受體家族的成員,并含有7次跨膜蛋白結構,也是一種G蛋白偶聯(lián)受體。研究發(fā)現(xiàn),Gpr84參與促進炎癥反應,并且通過調控巨噬細胞的功能介導炎癥反應。在小鼠中,Gpr84在LPS刺激的骨髓巨噬細胞中高表達。在RAW264.7細胞中,Gpr84的激活劑能夠通過激活Gpr84增強脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)誘導的IL-12βp40的表達。為研究Gpr84是否參與調控敗血癥這一疾病,本論文進行了以下的實驗研究:在本實驗前期研究中,利用CRISPR/Cas9技術構建Gpr84敲除小鼠,通過對小鼠基因進行DNA測序分析,發(fā)現(xiàn)敲除小鼠的Gpr84基因的一個外顯子中共敲除172bp長度的堿基序列。對小鼠骨髓巨噬細胞的Gpr84的mRNA和蛋白的表達量進行分析,發(fā)現(xiàn)在Gpr84-/-小鼠的骨髓巨噬細胞中Gpr84均不表達。因而Gpr84敲除小鼠構建成功,為后續(xù)從體外細胞水平和體內水平研究Gpr84對敗血癥的調控作用奠定了基礎。通過腹腔注射LPS構建小鼠敗血癥模型,從機體水平研究Gpr84對敗血癥的調控作用。結果顯示,Gpr84敲除的敗血癥小鼠存活率明顯高于野生型敗血癥小鼠。Gpr84敲除后,敗血癥小鼠的血清中TNF-α、IL-6和IL-12βp40的表達明顯低于野生型小鼠。在敗血癥模型中,Gpr84敲除小鼠的腹腔液中IL-6和IL-12βp40的表達量也低于野生型小鼠。隨后從野生小鼠和Gpr84敲除小鼠體內提取骨髓細胞體外誘導分化為骨髓巨噬細胞以及提取腹腔巨噬細胞,進行體外細胞實驗。利用RT-PCR和Q-PCR等方法分析了游離脂肪酸受體Gpr84在小鼠骨髓巨噬細胞和腹腔巨噬細胞的表達量,結果發(fā)現(xiàn),在細胞受到LPS刺激時,與游離脂肪酸受體家族其它受體相比,Gpr84呈高表達,這一結果與Wang J等人的研究結果相一致。接著檢測在LPS刺激條件下,Gpr84在巨噬細胞中發(fā)揮的調控作用,以及通過巨噬細胞對炎癥的調控作用。結果顯示,與野生小鼠相比,Gpr84敲除小鼠來源的骨髓巨噬細胞和腹腔巨噬細胞,在受到LPS刺激時,細胞中促炎癥相關的細胞因子TNF-α、IL-6、IL-12αp35和IL-12βp40的轉錄表達量降低。Gpr84敲除后,骨髓巨噬細胞受LPS刺激后其吞噬細菌能力下降。Gpr84對腹腔巨噬細胞的吞噬細菌的能力沒有顯著性影響。Gpr84敲除與否不影響LPS刺激時巨噬細胞中趨化因子的轉錄表達,也不影響LPS誘導的巨噬細胞遷移能力。綜上所述,Gpr84能夠參與促進炎癥反應,主要通過增強LPS誘導的巨噬細胞中促炎癥應子如TNF-α、IL-6和IL-12βp40的轉錄表達,從而加劇炎癥反應。Gpr84敲除后能降低敗血癥小鼠血清中促炎癥因子TNF-α、IL-6和IL-12βp40及腹腔液中IL-6和IL-12β p40的表達量,減輕小鼠體內炎癥反應,提高敗血癥小鼠存活率。本論文為研究以Gpr84作為可能的藥物靶點提供新的理論基礎。
[Abstract]:Gpr84 ( Gpr84 ) is a member of free fatty acid receptor family . In conclusion , Gpr84 could reduce the expression of TNF - 偽 , IL - 6 and IL - 12尾p40 in peritoneal fluid . Gpr84 could reduce the expression of TNF - 偽 , IL - 6 and IL - 12尾p40 in macrophages .

【學位授予單位】：華東師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R515.3;R-332

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