本文關(guān)鍵詞： 腸易激綜合征 肥大細(xì)胞 慢-急性應(yīng)激 5-HT ZXY　出處：《北京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：腸易激綜合征(irritable bowel syndrome,IBS)是一組持續(xù)或間歇發(fā)作,以腹痛、腹脹、排便習(xí)慣和(或)大便性狀改變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)的腸道功能紊亂性疾病。其特征在于腹部疼痛和(或)不適以及紊亂的排便習(xí)慣。其分類主要為便秘型(IBS with constipation,IBS-C)、腹瀉型(IBS with diarrhea,IBS-D)、混合型(mixed IBS,IBS-M)和不定型(unsubtypedIBS,IBS-U),臨床上比較常見的是IBS-D。IBS是臨床最常見的胃腸道疾病之一,已經(jīng)成為一種全球性疾病,患病率高達(dá)10-20%;在國內(nèi),北京地區(qū)發(fā)病率為7.26%。臨床上IBS病程長,癥狀反復(fù)發(fā)作,占消化科門診人數(shù)的50%以上,給社會和家庭帶來很大經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)。然而,現(xiàn)有研究對于IBS的發(fā)病機(jī)制的闡述尚不完全明確,除了在內(nèi)臟高敏感性、腸動力異常等傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為的病理生理基礎(chǔ)上有新的發(fā)現(xiàn)外,在其他多方面均有重要的研究進(jìn)展。IBS作為一種非器質(zhì)性病變的疾病,其西醫(yī)療法主要為解痙藥、止瀉劑、抗抑郁劑、胃腸微生態(tài)制劑等。但西藥存在副作用大、服用次數(shù)頻繁等缺點(diǎn),相比中藥略顯不足。中藥作為治療非器質(zhì)性病變的首要選擇,應(yīng)用在IBS-D中非常廣泛�，F(xiàn)階段科研中治療IBS-D的藥物包括單味中藥和復(fù)方中藥,效果均較明顯。蜘蛛香為敗醬科植物蜘蛛香(Valeriana jatamansi Jones)的干燥根莖和根,收載于《中國藥典》2015版(一部),味微苦、辛,性溫;歸心、脾、胃經(jīng)。主要功效為:消食止瀉,理氣止痛,祛風(fēng)除濕,鎮(zhèn)驚安神。蜘蛛香為云南省少數(shù)民族共用的草藥,是苗藥的主要品種之一。臨床上主要用于治療脘腹脹痛,食積不化,腹瀉痢疾,風(fēng)濕痹痛,腰膝酸軟,失眠等癥狀。前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明蜘蛛香原粉和蜘蛛香環(huán)烯醚萜有效部位均可降低慢性應(yīng)激所致IBS模型大鼠的內(nèi)臟敏感性,顯著減少IBS模型大鼠的排便量,改善精神狀態(tài)。此外,蜘蛛香環(huán)烯醚萜有效部位還能降低外周、增加中樞5-HT含量,下調(diào)結(jié)腸5-羥色胺受體3(5-HT3)表達(dá)水平,從而改善IBS模型大鼠的胃腸道癥狀。表明了蜘蛛香環(huán)烯醚萜有效部位可通過干預(yù)外周和中樞的5-HT通路來改善IBS的相關(guān)癥狀。ZXY是蜘蛛香中環(huán)烯醚萜類降解后的主要成分,其化學(xué)名為:baldrinal(纈草醛),前期研究表明:ZXY對應(yīng)激兼腹瀉模型小鼠和單純的腹瀉模型小鼠均具有止瀉作用,且前者治療作用優(yōu)于后者,可明顯改善利血平致小鼠腹瀉及精神狀態(tài)異常的作用。研究目的:為進(jìn)一步探討ZXY對IBS的治療作用及外周作用機(jī)制,本課題通過觀察ZXY對慢-急性應(yīng)激所致IBS模型大鼠的內(nèi)臟敏感性、排便情況、精神活動變化的影響,評價(jià)ZXY對IBS的治療作用;通過測定IBS模型大鼠結(jié)腸促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)、色氨酸羥化酶1mRNA(TPH1mRNA)、5-羥色胺(5-HT)及其受體的表達(dá)以及肥大細(xì)胞(MC)、蛋白酶活化受體2(PAR2)的表達(dá),探究ZXY產(chǎn)生作用的外周機(jī)制。研究方法:1.采用孤養(yǎng)結(jié)合慢-急性應(yīng)激方法建立IBS大鼠模型:120～140g SD雄性大鼠,隨機(jī)分為空白對照組、IBS模型組、ZXY高、中、低劑量組(0.6mg/kg、0.3mg/kg、0.15mg/kg)、氟西汀組(2.5mg/kg)、匹維溴銨組(25mg/kg)和昂丹司瓊組(1.8mg/kg)。模型組和各藥物組的大鼠每籠1只孤養(yǎng),并施加慢-急性不可預(yù)見性刺激,前21天先給予慢性應(yīng)激,終止慢性應(yīng)激1周后,第28天給予急性應(yīng)激束縛1h。慢性應(yīng)激包括:禁水、禁食、晝夜顛倒、冷刺激、潮濕飼養(yǎng)、致痛以及制動,7種刺激方法隨機(jī)安排,每日一種,每種刺激不可連續(xù)出現(xiàn),使實(shí)驗(yàn)動物不能預(yù)料刺激的發(fā)生,造模成功后,ZXY各劑量組以及陽性藥組動物造模第34天開始每日灌胃給藥,空白對照組與模型組給予灌胃蒸餾水,給藥35天。以腹部回撤反射評分(AWR)、糞便評分和體重增長率為指標(biāo)評價(jià)實(shí)驗(yàn)動物的內(nèi)臟敏感性和胃腸功能變化;以糖水偏嗜度評價(jià)實(shí)驗(yàn)動物的精神活動變化。2.通過測定AWR評分、糞便評分、體重增長率及糖水偏嗜度探究ZXY對IBS模型大鼠的治療作用:在實(shí)驗(yàn)開始前及實(shí)驗(yàn)的第14、27、41、55、65天測定實(shí)驗(yàn)大鼠的AWR評分;在實(shí)驗(yàn)開始前及實(shí)驗(yàn)第25、54、68天測定實(shí)驗(yàn)大鼠糞便評分;在實(shí)驗(yàn)開始前及實(shí)驗(yàn)的第13、25、37、52、69天測定實(shí)驗(yàn)大鼠的體重增長率;在實(shí)驗(yàn)前及實(shí)驗(yàn)第24、32、58、69天測定實(shí)驗(yàn)大鼠糖水偏嗜度。3.通過醋酸扭體法測定ZXY對小鼠腹痛的影響。4.通過免疫組化法測定大鼠結(jié)腸CRF的表達(dá);PCR法測定大鼠結(jié)腸TPH1mRNA的表達(dá);高效液相分析法測定大鼠結(jié)腸中5-HT、5-HIAA成分的表達(dá);Western Blot法測定大鼠結(jié)腸中5-HT1A、5-HT3、SERT蛋白的表達(dá);甲苯胺藍(lán)染色法測定結(jié)腸中MC的數(shù)量;Western Blot法測定結(jié)腸中PAR2蛋白的表達(dá)。研究結(jié)果:實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:1.實(shí)驗(yàn)前,各組大鼠AWR評分、糞便評分、體重增長率以及糖水偏嗜度沒有明顯差異(P0.05);造模后,模型組大鼠AWR評分、糞便評分明顯高于空白對照組(P0.05),體重增長率以及糖水偏嗜度明顯低于空白對照組(P0.05)。經(jīng)過ZXY給藥治療后,各治療組的AWR評分、糞便評分均明顯低于模型組(P0.05),ZXY高、中劑量組體重增長率及糖水偏嗜度明顯高于模型組(P0.05)。2.ZXY中劑量可顯著提高熱板法刺激下小鼠的痛閾(p0.05);ZXY高劑量及中劑量均可減少醋酸作用下20分鐘內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)(p0.05)。3.模型組大鼠結(jié)腸CRF、TPH1mRNA、5-HT、5-HT3A表達(dá)明顯升高(P0.05),結(jié)腸5-HT1A、SERT的表達(dá)明顯降低(P0.05)。ZXY高劑量組大鼠結(jié)腸CRF表達(dá)較模型組明顯下降(P0.05),ZXY低劑量可以明顯降低大鼠結(jié)腸TPH1mRNA表達(dá)(P0.05),ZXY各劑量組均可降低大鼠結(jié)腸5-HT和5-HIAA的含量(P0.05),ZXY高劑量及中劑量可以有效提高結(jié)腸內(nèi)5-HT1A受體的蛋白表達(dá)(p0.05);ZXY高、中、低劑量均可下調(diào)結(jié)腸內(nèi)5-HT3A受體的蛋白表達(dá)(p0.05);ZXY高劑量也可提高結(jié)腸內(nèi)SERT轉(zhuǎn)運(yùn)體的蛋白表達(dá)(p0.05)。4.IBS模型組大鼠結(jié)腸MC數(shù)量及PAR2表達(dá)明顯升高(P0.05);ZXY高、中劑量可以明顯降低結(jié)腸MC數(shù)量(P0.05),ZXY各劑量組大鼠結(jié)腸PAR2表達(dá)均較模型組明顯下降(P0.05)。研究結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)采用腹部回撤反射AWR評分指標(biāo)評價(jià)慢-急性應(yīng)激所致IBS模型大鼠的內(nèi)臟敏感性;采用糞便評分和體重增長率評價(jià)大鼠的胃腸功能狀況;采用糖水偏嗜度評價(jià)大鼠的精神狀態(tài);采用醋酸扭體法判斷小鼠腹痛程度,明確了藥效學(xué)評價(jià)指標(biāo)。研究結(jié)果表明:在孤養(yǎng)的情況下,用禁水、禁食、晝夜顛倒、冷刺激、潮濕飼養(yǎng)、致痛、制動結(jié)合急性束縛可以成功建立IBS大鼠模型。蜘蛛香環(huán)烯醚萜類成分ZXY具有改善慢-急性應(yīng)激所致IBS模型大鼠內(nèi)臟高敏感性、胃腸功能亢進(jìn)和精神活動異常的作用。作用機(jī)制可能是通過調(diào)控結(jié)腸5-HT上下游因子和影響結(jié)腸MC及PAR2而緩解IBS的臨床癥狀。通過對本課題的研究,為研究蜘蛛香治療IBS的物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)理提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù),并為治療IBS的臨床新藥研究提供了新思路。
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【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1536284