本文關(guān)鍵詞：生物鐘基因BMAL1對(duì)鼻咽癌細(xì)胞CNE2增殖和放療敏感性影響的研究　出處：《貴州醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:探討生物鐘基因BMAL1對(duì)鼻咽癌細(xì)胞CNE2增殖、凋亡和放療敏感性的影響。方法:分別構(gòu)建BMAL1基因干擾和過(guò)表達(dá)的慢病毒載體及陰性對(duì)照載體,將載體感染鼻咽癌細(xì)胞CNE2,加入嘌呤霉素篩選2周,構(gòu)建BMAL1基因穩(wěn)定干擾和過(guò)表達(dá)的鼻咽癌細(xì)胞CNE2及其陰性對(duì)照細(xì)胞,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(quantitative real-time PCR,qPCR)和蛋白質(zhì)印跡法(Western blot,WB)檢測(cè)BMAL1基因在mRNA和蛋白水平的干擾和過(guò)表達(dá)效果。細(xì)胞增殖和放療抑制率采用CCK8實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè);細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期采用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測(cè);通過(guò)克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)BMAL1基因?qū)Σ煌瑒┝?0、2、4、6Gy)X射線(xiàn)照射后CNE2放療敏感性的影響。結(jié)果:干擾慢病毒pGMLV-SB3 shRNA3能下調(diào)鼻咽癌細(xì)胞中BMAL1 mRNA和蛋白的表達(dá)量,干擾組mRNA表達(dá)量下調(diào)了 0.806倍(P=0.002),蛋白表達(dá)量下調(diào)了 0.831倍(P0.001);過(guò)表達(dá)慢病毒pGMLV-PA6-BMAL1能上調(diào)鼻咽癌細(xì)胞中BMAL1 mRNA和蛋白的表達(dá)量,過(guò)表達(dá)組mRNA表達(dá)量上調(diào)至7.191倍(P=0.003),蛋白表達(dá)量上調(diào)至2.503倍(P=0.031),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)顯示,BMAL1基因表達(dá)降低后細(xì)胞增殖加快(P0.001),BMAL1表達(dá)升高后細(xì)胞增殖減慢(P0.001),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。BMAL1基因干擾組CNE2細(xì)胞放療后的吸光度值高于陰性對(duì)照組(P0.001),放療后抑制率低于陰性對(duì)照組(P=0.001);BMAL1基因過(guò)表達(dá)組放療后的吸光度值低于陰性對(duì)照組(P0.001),放療抑制率高于陰性對(duì)照組(P0.001),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。BMAL1基因干擾組的凋亡率低于對(duì)照組(P=0.007);BMAL1基因過(guò)表達(dá)組凋亡率高于陰性對(duì)照組(P=0.004),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。細(xì)胞周期分析結(jié)果顯示,8Gy照射24h后,BMAL1基因干擾組CNE2細(xì)胞的S期比例較陰性對(duì)照組升高(P=0.001),BMAL1基因過(guò)表達(dá)組的S期比例較陰性對(duì)照組降低(P0.001),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;BMAL1基因干擾組的G2/M期比例較陰性對(duì)照組降低(P0.001),BMAL1基因過(guò)表達(dá)組的G2/M期比例較陰性對(duì)照組升高(P=0.001),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。8Gy放療后48、72小時(shí),各組細(xì)胞周期分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義�？寺⌒纬蓪�(shí)驗(yàn)顯示,BMAL1干擾組克隆形成率高于陰性對(duì)照組(P=0.032),存活分?jǐn)?shù)高于陰性對(duì)照組(P=0.036),放射增敏比為0.521;BMAL1過(guò)表達(dá)組克隆形成率低于陰性對(duì)照組(P=0.042),存活分?jǐn)?shù)低于陰性對(duì)照組(P=0.037),放射增敏比為1.794。結(jié)論:BMAL1基因可抑制鼻咽癌細(xì)胞CNE2的增殖,并通過(guò)降低S期比例、增加G2/M期阻滯從而增加放療后細(xì)胞凋亡,提高放射敏感性。
【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R739.63

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