發(fā)布時(shí)間：2017-12-24 06:29

  本文關(guān)鍵詞：蘿卜硫素對(duì)缺氧肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖和遷移影響的研究　出處：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的肺動(dòng)脈高壓(pulmonary hypertension,PH)是臨床上的一種較為常見(jiàn)的疾病,其病因十分復(fù)雜,可由多種心、肺或肺血管疾病等引起。肺血管阻力升高是PH的重要特征。肺血管重塑是肺血管阻力增加的一個(gè)重要病理學(xué)因素,而血管平滑肌細(xì)胞異常增殖和遷移是血管重塑的重要病理基礎(chǔ)。慢性缺氧可以使肺血管收縮、血管壁的張力增高,另外缺氧時(shí)肺內(nèi)會(huì)產(chǎn)生很多種細(xì)胞因子及生長(zhǎng)因子,可以直接作用刺激血管壁平滑肌細(xì)胞以及內(nèi)膜彈力纖維增生,最終導(dǎo)致肺血管阻力增高。舒張肺血管、緩解肺血管重塑是目前臨床藥物治療PH的重要措施。本研究通過(guò)設(shè)計(jì)缺氧細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?探討蘿卜硫素是否對(duì)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移存在抑制作用,為肺動(dòng)脈高壓的藥物治療提供參考信息。方法購(gòu)買原代人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(HPASMC),常規(guī)培養(yǎng)、傳代,選取4-6代處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。1.MTT法檢測(cè)蘿卜硫素對(duì)缺氧HPASMC增殖的影響。隨機(jī)將實(shí)驗(yàn)分為6組:實(shí)驗(yàn)組A往細(xì)胞加入0.5μmol·L-1蘿卜硫素干預(yù),實(shí)驗(yàn)組B往細(xì)胞內(nèi)加入1μmol·L-1蘿卜硫素干預(yù),實(shí)驗(yàn)組C往細(xì)胞加入5μmol·L-1蘿卜硫素干預(yù),實(shí)驗(yàn)組D往細(xì)胞加入10μmol·L-1蘿卜硫素干預(yù),實(shí)驗(yàn)組E往細(xì)胞加入20μmol·L-1蘿卜硫素干預(yù),對(duì)照組往細(xì)胞加入等量的PBS液干預(yù)。按實(shí)驗(yàn)分組加入對(duì)應(yīng)的藥物后,放進(jìn)缺氧環(huán)境內(nèi)培養(yǎng)12h、24h、48h、72h后,用MTT法檢測(cè)細(xì)胞的吸光度(OD值),然后計(jì)算出HPASMC的增殖抑制率。2.用Transwell小室法檢測(cè)蘿卜硫素對(duì)缺氧HPASMC的遷移情況。隨機(jī)將實(shí)驗(yàn)分為5組:實(shí)驗(yàn)組A往細(xì)胞加入1μmol·L-1蘿卜硫素干預(yù),實(shí)驗(yàn)組B往細(xì)胞內(nèi)加入5μmol·L-1蘿卜硫素干預(yù),實(shí)驗(yàn)組C往細(xì)胞加入10μmol·L-1蘿卜硫素干預(yù),實(shí)驗(yàn)組D往細(xì)胞加入20μmol·L-1蘿卜硫素干預(yù),對(duì)照組往細(xì)胞加入等量的PBS液干預(yù)。按照實(shí)驗(yàn)分組加入相應(yīng)的干預(yù)藥物,將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到缺氧的環(huán)境內(nèi)培養(yǎng)48h。用Transwell小室的方法,最后得出各組HPASMC的遷移數(shù)。3.用Western Blot法測(cè)定蘿卜硫素對(duì)缺氧HPASMC p38蛋白的表達(dá)情況。隨機(jī)將實(shí)驗(yàn)分為4組:實(shí)驗(yàn)組A往細(xì)胞加入1μmol·L-1蘿卜硫素干預(yù),實(shí)驗(yàn)組B往細(xì)胞內(nèi)加入5μmol·L-1蘿卜硫素干預(yù),實(shí)驗(yàn)組C往細(xì)胞加入10μmol·L-1蘿卜硫素干預(yù),對(duì)照組往細(xì)胞加入等量的PBS液干預(yù)。按照實(shí)驗(yàn)分組加入相應(yīng)的干預(yù)藥物,將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到缺氧的環(huán)境內(nèi)培養(yǎng)48h。常規(guī)提取細(xì)胞總蛋白,按Western Blot法得到p38蛋白和β-Actin蛋白的灰度條帶。最后對(duì)凝膠圖像進(jìn)行分析得到p38蛋白的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果1.MTT法檢測(cè)HPASMC增殖結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組A、B、C、D、E的HPASMC的細(xì)胞增殖抑制率均比對(duì)照組高(P0.05);對(duì)于細(xì)胞增殖抑制率,實(shí)驗(yàn)組A比對(duì)照組高(P0.05),實(shí)驗(yàn)組B比實(shí)驗(yàn)組A高(P0.05),實(shí)驗(yàn)組C比實(shí)驗(yàn)組B高(P0.05),實(shí)驗(yàn)組D比實(shí)驗(yàn)組C高(P0.05),實(shí)驗(yàn)組E比實(shí)驗(yàn)組D高(P0.05)。各個(gè)濃度組內(nèi),24h細(xì)胞增殖抑制率比12h高(P0.05),48h的比24h的高(P0.05),72h的比48h的高(P0.05)。2.Transwell小室法檢測(cè)HPASMC遷移的結(jié)果顯示,藥物干預(yù)48h后,實(shí)驗(yàn)組A、B、C、D的HPASMC遷移數(shù)均比對(duì)照組少(P0.05);對(duì)于細(xì)胞遷移數(shù),實(shí)驗(yàn)組A比對(duì)照組少(P0.05),實(shí)驗(yàn)組B比實(shí)驗(yàn)組A少(P0.05),實(shí)驗(yàn)組C比實(shí)驗(yàn)組B少(P0.05),實(shí)驗(yàn)組D比實(shí)驗(yàn)組C少(P0.05)。3.Western Blot法測(cè)定HPASMC中p38蛋白表達(dá)的結(jié)果顯示,藥物干預(yù)48h后,實(shí)驗(yàn)組A、B、C人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞p38蛋白的表達(dá)均比實(shí)驗(yàn)組增少(P0.05);細(xì)胞內(nèi)p38蛋白的表達(dá)量,實(shí)驗(yàn)組A比對(duì)照組少(P0.05),實(shí)驗(yàn)組B比實(shí)驗(yàn)組A少(P0.05),實(shí)驗(yàn)組C比實(shí)驗(yàn)組B少(P0.05)。結(jié)論蘿卜硫素可以明顯抑制缺氧人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移,并可抑制缺氧人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的p38蛋白表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R544.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1327267