本文關(guān)鍵詞：腫瘤相關(guān)miRNA的表面增強(qiáng)拉曼檢測新方法及細(xì)胞成像分析　出處：《青島科技大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：近年來,隨著癌癥相關(guān)死亡率的逐年上升,癌癥已成為嚴(yán)重威脅人類生命的重大疾病。癌癥的早期診斷和治療仍是人類醫(yī)學(xué)健康面臨的重大挑戰(zhàn)。隨著納米科技的快速發(fā)展,納米探針已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于腫瘤細(xì)胞成像、癌癥早期診斷和腫瘤的治療中。在此基礎(chǔ)上,我們設(shè)計了高靈敏性和高特異性的多功能納米探針用來對細(xì)胞中的microRNA(miRNA)進(jìn)行檢測,并進(jìn)一步對癌細(xì)胞中的多種miRNAs進(jìn)行熒光成像和表面增強(qiáng)拉曼(Surface enhanced Raman scattering,SERS)成像。本論文主要包括兩個部分:(1)構(gòu)建了一種新型的多重信號放大的DNA無酶分子機(jī)器,結(jié)合表面增強(qiáng)拉曼技術(shù),利用納米金作為增強(qiáng)底物,制備了攜帶有大量拉曼分子的納米金生物條碼作為拉曼信號納米探針。目標(biāo)分析物miRNA引發(fā)了DNA鏈替代循環(huán)和雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(HCR),使信號顯著增強(qiáng),并通過磁性分離和洗滌,除去過量的納米金生物條碼,降低了檢測體系的背景值,從而實現(xiàn)了miRNA的高靈敏度檢測。miRNA的檢測限為0.17 fM。進(jìn)一步通過檢測細(xì)胞內(nèi)的miRNA,驗證了該方法在復(fù)雜體系中的實用性。并利用對照實驗RT-PCR的方法行驗證該方法的精確性。與基于酶輔助的擴(kuò)增方法相比,如聚合酶鏈反應(yīng)和等溫DNA有酶循環(huán)放大反應(yīng)(通常是耗時的,并且要求具備嚴(yán)格的實驗條件,例如溫度,鹽的濃度等),該方法具有簡單、穩(wěn)定和高效的優(yōu)點。本方法具有廣泛適用性,只需改變DNA探針的序列,即可檢測不同的miRNA和其他生物活性分子。(2)設(shè)計了一種新型的雙信號切換(dual signal switching,DSS)探針,可進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)多種miRNAs同時成像,并且可對表達(dá)水平顯著不同的的miRNA進(jìn)行活細(xì)胞內(nèi)同時定量檢測。結(jié)合熒光和SERS技術(shù)的互補(bǔ)優(yōu)勢,該方法利用熒光成像實現(xiàn)了細(xì)胞內(nèi)探針的原位跟蹤,并且使用SERS比率的方法實現(xiàn)了多種miRNAs的定量檢測。此外,通過引入不對稱信號放大模式,實現(xiàn)了對活細(xì)胞中表達(dá)水平顯著不同的多種miRNAs的精確檢測。該方法為細(xì)胞內(nèi)生物活性分子成像分析方法供了新的思路和途徑,在腫瘤早期診斷以及基因檢測領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。
【學(xué)位授予單位】：青島科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R730.4;O657.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1320726