本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-30a通過抑制Beclin1介導(dǎo)的自噬來減緩肝纖維化進(jìn)程　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:在這項(xiàng)研究中,我們旨在探討微小RNA-30a(miR-30a)在肝纖維化中的作用及其可能的作用機(jī)制。材料和方法:我們通過轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)處理肝星狀細(xì)胞(大鼠肝星狀細(xì)胞HSC-T6,人肝星狀細(xì)胞LX-2)構(gòu)建體外肝纖維化模型;我們通過在C57BL/6小鼠體內(nèi)進(jìn)行膽管結(jié)扎或者腹腔注射四氯化碳構(gòu)建體內(nèi)肝纖維化模型。我們通過在肝星狀細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-30a mimics使肝星狀細(xì)胞中高表達(dá)mmiR-30a;通過在小鼠體內(nèi)注射miR-30a agomir(ago-miR-30a)使小鼠體內(nèi)高表達(dá)miR-30a。通過miRNA定量探針檢測(cè)miR-30a在肝星狀細(xì)胞內(nèi)和小鼠體內(nèi)的表達(dá)水平。通過熒光原位雜交技術(shù)(FISH)檢測(cè)miR-30a在肝星狀細(xì)胞內(nèi)的定位情況。通過雙熒光素酶試驗(yàn)驗(yàn)證Beclin1是miR-30a的直接靶點(diǎn)。通過mRFP-GFP-LC3自噬雙熒光、電鏡和蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)肝星狀細(xì)胞自噬水平。結(jié)果:miR-30a在活化的肝星狀細(xì)胞和TGF-β 1誘導(dǎo)的人肝星狀細(xì)胞LX-2的外泌體中表達(dá)明顯下調(diào)。過表達(dá)miR-30a使細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的表達(dá)下調(diào),例如a-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA),金屬蛋白酶組織抑制劑-1(TIMP-1)和Ⅰ型膠原(Collagen Ⅰ);同時(shí)miR-30a過表達(dá)抑制了肝星狀細(xì)胞的細(xì)胞活力。mmiR-30a在肝纖維化模型小鼠中表達(dá)顯著下調(diào),然而,過表達(dá)miR-30a能抑制膽管結(jié)扎誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化進(jìn)程,伴隨細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)表達(dá)的下調(diào)。miR-30a抑制肝星狀細(xì)胞內(nèi)和小鼠纖維化肝組織中的肝星狀細(xì)胞的自噬,同時(shí)促進(jìn)了肝星狀細(xì)胞中脂滴的積聚。miR-30a通過直接靶向結(jié)合Beclin1的3'-UTR區(qū)域,從而抑制靶基因Beclin1的表達(dá)。此外,通過小干擾RNA(siRNA)沉默Beclin1的表達(dá)同樣能抑制人肝星狀細(xì)胞LX-2的自噬,并能抑制人肝星狀細(xì)胞LX-2的活化。結(jié)論:miR-30a在肝纖維化模型中表達(dá)下調(diào),過表達(dá)miR-30a能通過直接抑制Beclin1介導(dǎo)的肝星狀細(xì)胞自噬來抑制肝纖維化進(jìn)程。因此,miR-30a可能是用于調(diào)控肝纖維化的新的潛在的治療靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R575.2

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1 潘勤,李定國(guó);肝星狀細(xì)胞與凋亡[J];中華消化雜志;2002年07期

2 涂傳濤,張順財(cái);過氧化物酶體增殖物激活受體γ與肝星狀細(xì)胞[J];肝臟;2002年02期

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5 張宗h，

本文編號(hào)：1313376