本文關鍵詞：MicroRNA-30a通過抑制Beclin1介導的自噬來減緩肝纖維化進程　出處：《南京醫(yī)科大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的:在這項研究中,我們旨在探討微小RNA-30a(miR-30a)在肝纖維化中的作用及其可能的作用機制。材料和方法:我們通過轉化生長因子-β1(TGF-β1)處理肝星狀細胞(大鼠肝星狀細胞HSC-T6,人肝星狀細胞LX-2)構建體外肝纖維化模型;我們通過在C57BL/6小鼠體內進行膽管結扎或者腹腔注射四氯化碳構建體內肝纖維化模型。我們通過在肝星狀細胞中轉染miR-30a mimics使肝星狀細胞中高表達mmiR-30a;通過在小鼠體內注射miR-30a agomir(ago-miR-30a)使小鼠體內高表達miR-30a。通過miRNA定量探針檢測miR-30a在肝星狀細胞內和小鼠體內的表達水平。通過熒光原位雜交技術(FISH)檢測miR-30a在肝星狀細胞內的定位情況。通過雙熒光素酶試驗驗證Beclin1是miR-30a的直接靶點。通過mRFP-GFP-LC3自噬雙熒光、電鏡和蛋白質印跡檢測肝星狀細胞自噬水平。結果:miR-30a在活化的肝星狀細胞和TGF-β 1誘導的人肝星狀細胞LX-2的外泌體中表達明顯下調。過表達miR-30a使細胞外基質(ECM)的表達下調,例如a-平滑肌肌動蛋白(α-SMA),金屬蛋白酶組織抑制劑-1(TIMP-1)和Ⅰ型膠原(Collagen Ⅰ);同時miR-30a過表達抑制了肝星狀細胞的細胞活力。mmiR-30a在肝纖維化模型小鼠中表達顯著下調,然而,過表達miR-30a能抑制膽管結扎誘導的小鼠肝纖維化進程,伴隨細胞外基質(ECM)表達的下調。miR-30a抑制肝星狀細胞內和小鼠纖維化肝組織中的肝星狀細胞的自噬,同時促進了肝星狀細胞中脂滴的積聚。miR-30a通過直接靶向結合Beclin1的3'-UTR區(qū)域,從而抑制靶基因Beclin1的表達。此外,通過小干擾RNA(siRNA)沉默Beclin1的表達同樣能抑制人肝星狀細胞LX-2的自噬,并能抑制人肝星狀細胞LX-2的活化。結論:miR-30a在肝纖維化模型中表達下調,過表達miR-30a能通過直接抑制Beclin1介導的肝星狀細胞自噬來抑制肝纖維化進程。因此,miR-30a可能是用于調控肝纖維化的新的潛在的治療靶點。
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R575.2

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本文編號：1313376