本文關(guān)鍵詞：石見穿抗人免疫缺陷病毒作用及其有效部位的研究　出處：《廣州中醫(yī)藥大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的:將石見穿進行分離提取,從中篩選出具有抗HIV作用的有效化合物。方法:用75%工業(yè)酒精對石見穿進行回流,再依次用石油醚、乙酸乙酯、氯仿和正丁醇對乙醇提取部位進行萃取。體外細胞實驗從中初步篩選出抗HIV的粗提取物,將石見穿有效粗提取部位通過硅膠柱色譜洗脫,薄層色譜分析,香草醛顯色,以及高效液相色譜儀制備,核磁共振鑒定結(jié)構(gòu)等藥物提取分離的方法分離出有效化合物。體外篩選有效成分的指南為以HIV感染CEMx174細胞的藥效實驗,在顯微鏡下觀察細胞病變效應(yīng)、再用實時熒光定量PCR檢測萃取的部位是否對HIV的細胞內(nèi)HIVRNA相對量和上清中的病毒載量具有抑制作用。統(tǒng)計學方法為先將定量PCR運行后的文件用ABI7300定量PCR儀所攜帶的軟件進行分析,采用Excel建立數(shù)據(jù)庫。之后使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析,檢驗方法采用單向方差分析,假如方差齊則使用LSD法分析,若方差不齊則使用Kruskal-Wallis H方法分析,檢驗標準為α=0.05。制圖軟件選用GraphPad Prism 5.0。結(jié)果:萃取得到石見穿的粗提物,經(jīng)體外細胞感染HIV藥效實驗表明:從不同部位的不同濃度給藥組中,石見穿氯仿部位濃度為20μg/ml的細胞內(nèi)HIVRNA相對量明顯較病毒對照組低(P0.05),且與陽性對照組比較(P=0.1280.05),說明濃度為20μg/ml時與陽性對照組相比無差異,同時,其上清中病毒載量明顯低于病毒對照組(P0.05),與陽性對照組相比(P=0.6110.05),說明上清濃度為20μg/ml時與陽性對照組相比也無差異。將石見穿有效粗提取部位通過硅膠柱色譜洗脫,薄層色譜分析,香草醛顯色,以及高效液相色譜儀制備,核磁共振鑒定結(jié)構(gòu)分離出抗HIV有效化合物22-23流份黃綠色粉末為熊果酸。石見穿的氯仿部位提取分離經(jīng)體外藥效實驗顯示22-23流份,5-6流份有效;RT-PCR結(jié)果表明給藥組石見穿氯仿部位分離得到的22-23流份、5-6流份細胞內(nèi)HIVRNA相對量明顯較病毒對照組低(P0.05),且與陽性對照組比較(P0.05),同時,其上清中病毒載量明顯低于病毒對照組(P0.05),與陽性對照組相比(P0.05)說明與陽性對照組相比無差異。結(jié)論:石見穿氯仿部位對HIV-1具有抑制作用,石見穿氯仿部位分離物得到的22-23流份即熊果酸,5-6流份為抗HIV作用的主要有效化合物。
【學位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R284;R285

【參考文獻】

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1 彭R，

本文編號：1313234