本文關(guān)鍵詞：CYP1B1敲除對(duì)小鼠2型糖尿病認(rèn)知功能損害的影響　出處：《武漢大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：第一部分低劑量的鏈脲佐菌素聯(lián)合高脂高糖飼料誘導(dǎo)形成2型糖尿病小鼠目的:CYP1B1(cytochrome P450,family 1,subfamily B,polypeptide 1)基因敲除型小鼠(KO)與野生型小鼠(WT)在低劑量的鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)結(jié)合高脂高糖飼料(high fat-high sucrose diet,HFSD)的情況下誘導(dǎo)形成2型糖尿病小鼠。方法:20-22 g野生型(WT)和CYP1B1基因敲除型(KO)雄性小鼠,隨機(jī)分為高脂高糖膳食組(high fat-high sucrose diet,HFSD)和對(duì)照普通膳食組(Normal chew,NC),即 WT-NC 組、KO-NC組、WT-HFSD 組和 KO-HFSD 組,每組 7 只小鼠。3周對(duì)應(yīng)飼料喂養(yǎng)后,第3周末,禁食8 h,測(cè)其空腹血糖后,HFSD組腹腔注射STZ,劑量為100mg/kg體重,NC組注射相應(yīng)溶劑作為對(duì)照,然后持續(xù)喂養(yǎng)相應(yīng)飼料3周后,小鼠在第6周末禁食8小時(shí)后,測(cè)定小鼠血糖。小鼠2型糖尿病標(biāo)準(zhǔn):禁食后空腹血糖≥11.1mmol/L,出現(xiàn)多飲、多尿、多食、體重增多不明顯的糖尿病·三多一少"的癥狀。結(jié)果:在注射STZ前,與NC組相比,HFSD組小鼠體重增加,注射STZ且相應(yīng)飼料喂養(yǎng)三周后,與NC組比,HFSD組小鼠體重增加不明顯,差異不顯著。在注射STZ藥物前,KO小鼠每只每日進(jìn)食熱能均多于WT,注射STZ藥物且相應(yīng)膳食飼料喂養(yǎng).3周后,在HFSD組,KO小鼠每只每日進(jìn)食熱能比WT組有所增加,NC組差異不明顯。注射STZ前,KO組小鼠空腹血糖低于WT組,KO-NC組和WT-HFSD組小鼠空腹血糖與WT-NC組相比,,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。注射STZ而且相應(yīng)膳食飼料喂養(yǎng)3周后,HFSD組空腹血糖高于NC組,同時(shí)空腹血糖≥11.1mmol/L,KO-NC組和WT-HFSD組空腹血糖與WT-NC組對(duì)比,,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6周高脂高糖飼料和注射STZ藥物100mg/kg后,HFSD組小鼠的體重減少,進(jìn)食熱能增長(zhǎng),空腹血糖≥11.1mmol/L(P0.05)。綜上,成功建立小鼠2型糖尿病模型,空腹血糖≥11.1mmol/L,出現(xiàn)多飲、多尿、多食、體重增多不明顯的癥狀。結(jié)論:低劑量的鏈脲佐菌素聯(lián)合高脂高糖飼料誘導(dǎo)形成2型糖尿病小鼠。第二部分CYP1B1基因敲除對(duì)小鼠2型糖尿病認(rèn)知功能障礙的作用目的:探討 CYP1B1(cytochrome P450,family 1,subfamily B,polypeptide 1)基因敲除型小鼠(KO)與野生型小鼠(WT)在高脂高糖飼料(high fat-high sucrose diet,HFSD)結(jié)合低劑量鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)建立2型糖尿病模型下,觀察此時(shí)小鼠的認(rèn)知功能以及CYP1B1基因敲除的影響。方法:野生型(WT)和CYP1B1基因敲除型(KO)雄性小鼠,隨機(jī)分為高脂高糖膳食組(high fat-high sucrose diet,HFSD)和對(duì)照普通膳食組(Normal chew,NC),即WT-HFSD、KO-HFSD、WT-NC和KO-NC組。2型糖尿病造模成功后,開展空間神經(jīng)行為學(xué)測(cè)驗(yàn)——水迷宮測(cè)驗(yàn)和避暗測(cè)驗(yàn)來(lái)評(píng)估各組小鼠學(xué)習(xí)記憶能力。Morris水迷宮測(cè)驗(yàn)分為五天的定位航行測(cè)驗(yàn)(Place navigation test,PNT)和一天的空間搜索測(cè)驗(yàn)(Spatial probe test,SPT),以評(píng)估各組小鼠學(xué)習(xí)和記憶情況。避暗測(cè)驗(yàn)包含訓(xùn)練期、測(cè)驗(yàn)期、消退期,記載小鼠進(jìn)入暗室前的潛伏期和規(guī)定時(shí)間內(nèi)進(jìn)入的次數(shù),可以反映小鼠的記憶情況。結(jié)果:①5天水迷宮測(cè)驗(yàn)顯示,跟著訓(xùn)練天數(shù)的增加,各組小鼠躲避潛伏期均呈縮短趨向,表明小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力隨訓(xùn)練次數(shù)增加而增強(qiáng)。HFSD誘導(dǎo)的WT小鼠第三天到第五天的潛伏期顯著高于NC組,說(shuō)明學(xué)習(xí)能力明顯受損(P0.05)。小鼠的KO-NC組與WT-NC組相比,逃避潛伏期較短,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。無(wú)論HFSD組還是NC組,KO型小鼠的逃避潛伏期均較短�？臻g搜索實(shí)驗(yàn)測(cè)試小鼠的記憶能力,KO型小鼠在原平臺(tái)象限的時(shí)間明顯長(zhǎng)于WT型小鼠,且KO-HFSD組小鼠在原平臺(tái)象限的時(shí)間明顯長(zhǎng)于WT-HFSD組(P0.05),表明CYP1B1基因敲除可減緩2型糖尿病造成的小鼠認(rèn)知功能損害,對(duì)2型糖尿病小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力有一定的保護(hù)作用。②避暗實(shí)驗(yàn)中,在第一天的訓(xùn)練期,潛伏期在各組之間無(wú)明顯差異,在第二天的測(cè)驗(yàn)期和第五天的消退期,潛伏期在各組之間有明顯差異,無(wú)論是NC組還是HFSD組,KO組均高于WT組,且KO-HFSD低于KO-NC,WT-HFSD低于WT-NC,但第2天的測(cè)驗(yàn)期和第5天的消退期,KO-HFSD與WT-HFSD對(duì)比,潛伏期增加,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。在訓(xùn)練期,測(cè)驗(yàn)期和消退期,訓(xùn)練錯(cuò)誤次數(shù)WT均高于KO,KO-HFSD高于KO-NC,WT-HFSD高于WT-NC,第2天的測(cè)驗(yàn)期與第5天的消退期,KO-HFSD與WT-HFSD對(duì)比,錯(cuò)誤次數(shù)降低,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:CYP1B1基因敲除可改善小鼠2型糖尿病造成的認(rèn)知功能損害,對(duì)2型糖尿病小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力有保護(hù)作用。第三部分CYP1B1基因敲除對(duì)低劑量鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)聯(lián)合高脂高糖膳食誘導(dǎo)形成2型糖尿病小鼠的神經(jīng)相關(guān)因子的影響目的:探討 CYP1B1(cytochrome P450,family 1,subfamily B,polypeptide 1)基因敲除型小鼠(KO)與野生(WT)小鼠在低劑量鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)聯(lián)合高脂高糖膳食誘導(dǎo)形成2型糖尿病的神經(jīng)相關(guān)因子的變化。方法:神經(jīng)行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,摘眼球取血后,斷椎處死小鼠,提取各組小鼠大腦皮層組織,用Trizol勻漿并提取總RNA,實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)腦組織皮層中腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(Brain derived neurotrophic factor,BDNF)水平。結(jié)果:腦源性的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和學(xué)習(xí)記憶關(guān)系緊密,因?yàn)锽DNF可以增強(qiáng)神經(jīng)突觸聯(lián)系,對(duì)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子和神經(jīng)遞質(zhì)的合成有很大影響。大腦皮層組織中腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)mRNA的水平,普通膳食組里,CYP1B1基因敲除小鼠的BDNF基因水平顯著高于野生小鼠,并且高脂高糖膳食顯著下調(diào)兩組小鼠皮層中BDNF mRNA的表達(dá)。結(jié)論:CYP1B1基因敲除可以上調(diào)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的水平,并在普通膳食時(shí)上調(diào)BDNF的表達(dá)水平。
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R587.1

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

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本文編號(hào)：1312456