本文關(guān)鍵詞：激活素A對匹魯卡品誘導(dǎo)的原代皮質(zhì)神經(jīng)元損傷的保護作用的研究　出處：《吉林大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:癲癇是一種常見的慢性神經(jīng)系統(tǒng)疾病,由神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)異常放電引起,其發(fā)病機制十分復(fù)雜,至今仍未完全闡明。谷氨酸是腦中最重要的一種興奮性神經(jīng)遞質(zhì),主要是通過谷氨酸受體介導(dǎo)發(fā)揮作用。本課題通過建立匹魯卡品誘導(dǎo)原代皮質(zhì)神經(jīng)元癲癇模型,觀察記錄神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)變化,檢測各組神經(jīng)元離子型谷氨酸受體不同亞基m RNA及蛋白的表達變化,進而探討離子型谷氨酸受體與癲癇之間、激活素A與離子型谷氨酸受體之間的關(guān)系。方法:分離孕16d Wistar大鼠胎鼠原代皮質(zhì)神經(jīng)元,培養(yǎng)至14d,鑒定并分組。模型組:匹魯卡品3m M處理原代神經(jīng)元24h。激活素A處理組:采用不同濃度的激活素A(5 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml)處理神經(jīng)元24h。匹魯卡品+激活素A組:匹魯卡品3m M處理原代神經(jīng)元24h后采用不同濃度的激活素A(5 ng/ml、10ng/ml、20 ng/ml)處理神經(jīng)元24h。對照組不做任何處理。通過神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)改變、全細胞膜片鉗技術(shù)檢測模型是否成功,RT-PCR、免疫熒光細胞化學(xué)染色、Western Blot等方法檢測離子型谷氨酸受體各亞基的表達變化,探討離子型谷氨酸受體在癲癇神經(jīng)元損傷過程中可能的作用機制以及激活素A對神經(jīng)元的保護作用。結(jié)果:1、形態(tài)學(xué)實驗結(jié)果顯示,激活素A能夠增加體外培養(yǎng)的原代皮質(zhì)神經(jīng)元初級樹突的數(shù)目和長度。2、匹魯卡品3m M誘導(dǎo)原代皮質(zhì)神經(jīng)元損傷后,神經(jīng)元初級樹突的數(shù)目和長度減少,并有癇樣放電。激活素A可以促進損傷后初級樹突數(shù)目和長度生長。3、RT-PCR結(jié)果顯示,不同濃度的激活素A(5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml)處理原代皮質(zhì)神經(jīng)元24h,谷氨酸受體的NR1、NR2A、NR2B、Glu R1、Glu R2、Glu R4亞基m RNA表達水平與對照組相比幾乎沒有變化;而Glu R3亞基m RNA表達水平增加。模型組NR1、NR2A、NR2B、Glu R1、Glu R3、Glu R4亞基m RNA的表達水平顯著降低;而Glu R2 m RNA的表達水平?jīng)]有變化。匹魯卡品+激活素A組,當(dāng)激活素A的濃度為10ng/ml、20ng/ml時,谷氨酸受體的NR2A、NR2B、Glu R1、Glu R3、Glu R4亞基m RNA表達水平與模型組相比均顯著增加。4、免疫熒光細胞化學(xué)染色結(jié)果顯示,與對照組相比原代皮質(zhì)神經(jīng)元經(jīng)激活素A處理后,NR2A、NR2B、Glu R1、Glu R4亞基蛋白表達水平幾乎沒有變化。模型組,NR2A、NR2B、Glu R1、Glu R4亞基蛋白的表達水平顯著降低。匹魯卡品+激活素A組,NR2A、NR2B、Glu R1、Glu R4亞基蛋白表達水平與模型組相比均顯著升高。5、Western Blot結(jié)果顯示,原代皮質(zhì)神經(jīng)元經(jīng)激活素A處理后,NR2B、Glu R1蛋白表達幾乎沒有變化。模型組NR2B、Glu R1蛋白的表達顯著降低。匹魯卡品+激活素A組,NR2B、Glu R1蛋白表達水平與損傷組相比均顯著升高。結(jié)論:1、匹魯卡品可以誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的原代皮質(zhì)神經(jīng)元癇樣放電,建立體外原代皮質(zhì)神經(jīng)元癲癇模型。2、離子型谷氨酸受體的NR2A、NR2B、Glu R1、Glu R4亞基參與了匹魯卡品誘導(dǎo)的原代皮質(zhì)神經(jīng)元損傷過程。3、激活素A通過離子型谷氨酸受體的NR2A、NR2B、Glu R1、Glu R4亞基對匹魯卡品誘導(dǎo)的原代皮質(zhì)神經(jīng)元損傷發(fā)揮保護作用。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R742.1

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