本文關(guān)鍵詞：白藜蘆醇對(duì)鼻咽癌細(xì)胞放療增敏的研究

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【摘要】：目的:研究白藜蘆醇(Resveratrol,RSV)對(duì)鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma,NPC)細(xì)胞放射治療增敏的分子機(jī)制。為白藜蘆醇后續(xù)在臨床上的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:1.白藜蘆醇對(duì)鼻咽癌細(xì)胞活力和增殖的影響1.1 MTT法檢測白藜蘆醇對(duì)鼻咽癌細(xì)胞活力的影響。1.2不同濃度白藜蘆醇作用于鼻咽癌細(xì)胞后用克隆形成實(shí)驗(yàn)計(jì)算克隆形成率。1.3不同濃度白藜蘆醇作用于鼻咽癌細(xì)胞后用流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞周期。2.白藜蘆醇對(duì)鼻咽癌細(xì)胞放射治療增敏的作用2.1白藜蘆醇對(duì)鼻咽癌細(xì)胞放射治療后生存率的影響,利用線性二次模型(LQ),根據(jù)SF值制作放射敏感曲線。2.2流式細(xì)胞儀檢測鼻咽癌細(xì)胞經(jīng)放射治療后細(xì)胞凋亡。3.白藜蘆醇對(duì)放射增敏相關(guān)蛋白表達(dá)的影響3.1免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測白藜蘆醇作用鼻咽癌細(xì)胞放射治療后相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。3.2免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測不同劑量白藜蘆醇作用鼻咽癌細(xì)胞后對(duì)相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。3.3免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測白藜蘆醇作用鼻咽癌細(xì)胞不同時(shí)間段后對(duì)相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。3.4在鼻咽癌細(xì)胞內(nèi)利用慢病毒下調(diào)E2F1基因來研究白藜蘆醇對(duì)鼻咽癌細(xì)胞的影響。3.5在鼻咽癌細(xì)胞內(nèi)利用慢病毒過表達(dá)E2F1基因來研究白藜蘆醇對(duì)鼻咽癌細(xì)胞的影響。4.體內(nèi)實(shí)驗(yàn):通過裸鼠荷瘤模型研究白藜蘆醇對(duì)鼻咽癌細(xì)胞放射增敏的作用結(jié)果:1.白藜蘆醇對(duì)鼻咽癌細(xì)胞活力和增殖的影響1.1 MTT法檢測不同濃度的白藜蘆醇作用鼻咽癌細(xì)胞后,濃度為25 μmoL/L和50μmoL/L的白藜蘆醇作用24小時(shí)后對(duì)細(xì)胞活力沒有明顯影響。1.2濃度為50 μmoL/L的白藜蘆醇處理鼻咽癌細(xì)胞24小時(shí)后可明顯抑制細(xì)胞形成克隆的能力。1.3白藜蘆醇處理細(xì)胞后,G0/G1期的細(xì)胞比例從33.40%上升到69.70%、81.68%,說明白藜蘆醇能使鼻咽癌細(xì)胞阻滯在G0/G1期。1.4結(jié)合上面的結(jié)果,選用濃度為50 μmoL/L的白藜蘆醇,處理時(shí)間為24小時(shí),進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.白藜蘆醇對(duì)鼻咽癌細(xì)胞放射治療增敏的作用2.1克隆形成率隨輻照劑量加大而降低。2.2白藜蘆醇聯(lián)合放射治療后提高了鼻咽癌細(xì)胞細(xì)胞凋亡率。3.白藜蘆醇對(duì)放射增敏相關(guān)蛋白表達(dá)的影響3.1 50 μmoL/L的白藜蘆醇可以抑制E2F1的表達(dá),下調(diào)p-AKT,但是對(duì)p-ERK沒有影響。3.2白藜蘆醇對(duì)E2F1、p-AKT的影響呈劑量效應(yīng),對(duì)p-ERK無影響。3.3白藜蘆醇對(duì)E2F1、p-AKT的影響呈時(shí)間效應(yīng),對(duì)p-ERK無影響。3.4利用慢病毒構(gòu)建了下調(diào)E2F1表達(dá)的的穩(wěn)定細(xì)胞系CNE-1-shE2F1及其對(duì)照株CNE-1-NC,WB檢測出E2F1的表達(dá)可明顯影響p-AKT的表達(dá)水平,但對(duì)p-ERK無影響;通過單克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測CNE-1-shE2F1及其對(duì)照株CNE-1-NC的克隆形成能力觀察到CNE-1-shE2F1的克隆形成率明顯低于CNE-1-NC;流式細(xì)胞技術(shù)檢測CNE-1-shE2F1及其對(duì)照株CNE-1-NC的周期變化,結(jié)果顯示細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期。3.5利用慢病毒構(gòu)建了過表達(dá)E2F1表的的穩(wěn)定細(xì)胞系CNE-1-E2F1及其對(duì)照株CNE-1-NC,用50μmoL/L的白藜蘆醇處理后,免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測出在CNE-1中過表達(dá)E2F1,可以明顯抑制白藜蘆醇引起的p-AKT表達(dá)水平,對(duì)p-ERK無影響;克隆形成檢測結(jié)果表明,在鼻咽癌細(xì)胞中過表達(dá)E2F1可抑制白藜蘆醇引起的克隆形成率;流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞周期表明,在鼻咽癌細(xì)胞中過表達(dá)E2F1可抑制白藜蘆醇引起的G0/G1周期阻滯。4.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明白藜蘆醇和放射治療聯(lián)合后其控制腫瘤體積和體重的效果非常顯著,說明白藜蘆醇可以增強(qiáng)鼻咽癌細(xì)胞對(duì)放射治療的敏感性。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明,白藜蘆醇可以增強(qiáng)鼻咽癌細(xì)胞對(duì)放射治療的敏感性,其機(jī)制可能是白藜蘆醇作用細(xì)胞后通過下調(diào)E2F1和抑制p-AKT來達(dá)到放射增敏的效果。
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R739.63

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