本文關(guān)鍵詞：急性淋巴細(xì)胞白血病患兒腸道菌群的改變及與近期應(yīng)用抗生素的關(guān)系

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【摘要】：研究背景急性淋巴細(xì)胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)是兒童最常見的惡性腫瘤,但其病因和發(fā)病機(jī)制至今尚不完全清楚,其中免疫微環(huán)境的紊亂是其發(fā)病的重要原因之一。腸道作為免疫系統(tǒng)重要的組成部分,棲息著大量的微生物。腸道免疫系統(tǒng)的發(fā)育很大程度上依賴于與腸道微生物的相互作用。腸道微生物的變化可能會引起人體功能狀態(tài)的改變;同時,疾病狀態(tài)造成的免疫、代謝等方面的紊亂也可以通過對腸道微生物群的分析來評估。但是,ALL狀態(tài)對腸道微生物群有何影響尚未闡明。研究目的1.研究ALL患兒腸道菌群結(jié)構(gòu)的改變,尋找有鑒別意義的微生物標(biāo)記,為進(jìn)一步在細(xì)胞和分子水平研究微生物與黏膜免疫的相關(guān)機(jī)制提供理論依據(jù);2.分析近期應(yīng)用抗生素對ALL患兒腸道菌群的影響;3.分析ALL患兒初診時的腸道菌群多樣性與菌群失調(diào)能否影響化療效果及化療后并發(fā)癥,為ALL的癥狀控制提供新思路。研究對象與方法1.研究對象收集30例初診急性淋巴細(xì)胞白血病患兒的大便標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)組,33例健康同齡兒的大便標(biāo)本作為對照組,根據(jù)3個月內(nèi)有無抗生素(ATBx)使用史,將其分為ALL+ATBx、ALL、CON+ATBx、CON四組。2.目的基因提取與測序提取基因組DNA,進(jìn)行PCR擴(kuò)增和產(chǎn)物純化,對經(jīng)定量和均一化的PCR產(chǎn)物基于Illumina平臺對其進(jìn)行高通量測序,并對測序結(jié)果進(jìn)行生物信息學(xué)分析。3.根據(jù)生物信息學(xué)分析結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析:①通過比較每2組間的α多樣性來比較各組個體的物種多樣性和物種豐度;②通過比較每2組間的β多樣性來比較各組不同個體間的物種分布差異;③通過比較不同分類水平的各物種的相對豐度來描述物種組成方面的差異;④通過線性判別分析效應(yīng)量(LEfSe)分別比較ALL組與CON組、ALL+ATBx組與CON+ATBx組,根據(jù)LDA值發(fā)現(xiàn)具有顯著差異的物種,并篩選具有鑒別意義的微生物標(biāo)志。4.隨訪與回顧性分析通過對入組患兒的隨訪,研究化療效果及化療后感染性并發(fā)癥與患兒治療前腸道菌群多樣性及微生態(tài)失衡的關(guān)系。結(jié)果1.α多樣性方面,將衡量物種多樣性的Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)進(jìn)行比較得到:Shannon index(ALL)Shannon index(CON),P0.05;Shannon index(CON+ATBx)Shannon index(CON),P0.05;Shannon index(ALL+ATBx)Shannon index(CON),P0.01;Simpson index(ALL)Simpson index(CON),P0.05;Simpson index(CON+ATBx)Simpson index(CON),P0.05;Simpson index(ALL+ATBx)Simpson index(CON),P0.01;衡量物種豐度的指數(shù)Chao1指數(shù)和Ace指數(shù)各組間無明顯差異。2.β多樣性方面:PCoa分析與NMDS分析示ALL組與CON組、ALL+ATBx組與CON+ATBx組分別顯示出明顯的分布區(qū)域性。3.物種組成方面:4組樣本在不同分類學(xué)水平的物種組成方面有差異;厚壁菌門/擬桿菌門比值(F/B):F/B(CON+ATBx)F/B(CON),(P0.05);4.LEfSe分析示,ALL+ATBx組與CON+ATBx組間有顯著差異的物種數(shù)明顯少于ALL組與CON組間;比較ALL組與CON組,在ALL組LDA值較大的擬桿菌目的ROC曲線下面積(AUC)為0.735,腸球菌科的AUC為0.724;比較ALL+ATBx組與CON+ATBx組,未發(fā)現(xiàn)AUC0.7的物種。5.隨訪及回顧性分析示:①患兒腸道菌群的Shannon指數(shù):化療第19天微小殘留病變(MRD)≥ 1%組與MRD1%組的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,有并發(fā)癥組與無并發(fā)癥組的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;②患兒腸道菌群的F/B:化療第19天MRD ≥ 1%組與MRD1%組的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,有并發(fā)癥組與無并發(fā)癥組的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論1.ALL患兒的腸道菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生了明顯的改變;2.近期抗生素的使用對ALL引起的α多樣性的降低有干擾作用,并可引起ALL患兒腸道菌群組成成分的變化;3.擬桿菌、腸球菌在患兒腸道菌群中豐度較高,LDA值及AUC較大,可作為鑒別ALL的微生物學(xué)標(biāo)志,在近期無抗生素使用史的兒童群體中具有診斷價值;4.ALL患兒化療前腸道菌群的α多樣性或菌群失調(diào)對患兒的化療效果及化療后感染性并發(fā)癥的發(fā)生無顯著影響。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R733.71

【參考文獻(xiàn)】

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1 黃永坤;楊武;曹志瑯;王艷麗;婁俊麗;姚萍;;正常和不同疾病兒童腸道細(xì)菌DNA含量的動態(tài)測量[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2011年03期

2 陳渝萍,文博;白血病患者化療前腸道菌群狀態(tài)初步分析[J];臨床血液學(xué)雜志;1998年05期

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本文編號：1296406