本文關(guān)鍵詞：晚期糖基化終產(chǎn)物（AGEs）及可溶性受體（sRAGE）在冠心病患者冠脈側(cè)支循環(huán)形成中的表達(dá)及意義

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【摘要】：【背景】在糖尿病患者的研究中,晚期糖基化終產(chǎn)物(advanced glycation end-products,AGEs)與細(xì)胞表面的晚期糖基化終產(chǎn)物受體(receptor of advanced glycation end-products,RAGE)相互結(jié)合起著抑制血管增生的作用。動物實(shí)驗(yàn)中也得出相同的結(jié)果[1,2]。但是,循環(huán)中可溶性RAGE(soluble RAGE,s RAGE)因?yàn)槟芘c細(xì)胞表面RAGE競爭性結(jié)合AGEs,阻斷細(xì)胞表面RAGE與配體結(jié)合,從而s RAGE與AGE相互作用具有促進(jìn)血管增生及促進(jìn)冠脈側(cè)支循環(huán)(coronary collateral circulation,CCC)形成的作用[3]。目前,AGEs和s RAGE的研究主要限于糖尿病患者及糖尿病動物模型,尚未發(fā)現(xiàn)在糖尿病以外的人和動物的相關(guān)研究。本研究選擇AGEs和s RAGE的原因是我們前期動物實(shí)驗(yàn)的蛋白芯片檢測所用的動物模型是非糖尿病的側(cè)支循環(huán)形成動物模型,而蛋白芯片結(jié)果卻顯示血漿中RAGE有高表達(dá),可能說明AGEs和s RAGE相互作用不僅存在于糖尿病患者中,也可能廣泛存在于非糖尿病患者中。【目的】探討AGEs和s RAGE在臨床冠心病患者側(cè)支循環(huán)形成良好與側(cè)支形成不良中的表達(dá)水平及可能影響因素,目的是篩選出新的、更強(qiáng)的有促進(jìn)側(cè)支循環(huán)形成作用的分子生物學(xué)標(biāo)志物,為冠心病診療提供新方法和理論依據(jù)�！痉椒ā�1.前期動物實(shí)驗(yàn):結(jié)扎大鼠左前降支,建立側(cè)支循環(huán)形成心肌缺血動物模型,用蛋白芯片檢測側(cè)支循環(huán)形成良好組及側(cè)支循環(huán)形成不良組血漿蛋白表達(dá)差異,篩選出可能與側(cè)支循環(huán)形成相關(guān)的蛋白因子,本研究主要在臨床病人中擴(kuò)大樣本量進(jìn)行驗(yàn)證檢驗(yàn)。2.臨床標(biāo)本采集與資料收集:按常規(guī)方法操作進(jìn)行冠脈造影(Coronary angiography,CAG),血管穿刺成功后抽取動脈血,加入EDTA-K2抗凝管中。選取2ml全血標(biāo)本分2管,低溫-80度保存,余下血標(biāo)本離心后取上層血漿分2管,低溫-80度保存待檢。選取冠脈造影發(fā)現(xiàn)三大主支中至少有一支冠脈大分支(左前降支、左回旋支、右冠)狹窄≥90%的患者,分為冠脈側(cè)支循環(huán)形成良好組、冠脈側(cè)支循環(huán)形成不良組各30例;同時(shí)以冠脈造影顯示無冠狀動脈硬化者30例作為對照組。收集研究對象臨床資料輸入SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件包中,包括患者年齡、性別、入院時(shí)血壓、一般生化指標(biāo)、高血壓史、糖尿病史等等。3.ELISA分析:定量檢測血漿中AGEs及s RAGE的含量,采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),操作嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。4.Western Blotting檢測:另一管中血漿標(biāo)本用Western Blotting檢測AGEs和s RAGE水平。(1)蛋白濃度測定:用Bradford比色法、紫外分光光度計(jì)檢測,于A595處吸光值讀取蛋白含量。(2)蛋白質(zhì)分離:本研究采用12%SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行蛋白質(zhì)分離。(3)電轉(zhuǎn)移:本研究采用水浴式電轉(zhuǎn)移。(4)免疫檢測4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì),分析側(cè)支循環(huán)形成良好、側(cè)支形成不良及對照組患者血漿中AGE及s RAGE表達(dá)水平及差異,并分析其影響因素如心血管病危險(xiǎn)因素、性別、年齡、血生化等指標(biāo)�！窘Y(jié)果】1.在非糖尿病側(cè)支循環(huán)形成心肌缺血動物模型中,用蛋白芯片檢測發(fā)現(xiàn)血漿RAGE高表達(dá)。2.WB及ELISA驗(yàn)證檢測結(jié)果均顯示:在糖尿病及非糖尿病患者中,CCC形成良好組與CCC形成不良組的AGEs及s RAGE表達(dá)均高于正常對照組。對于糖尿病患者,與對照組相比,CCC形成良好組AGEs及s RAGE(AGEs:0.312±0.018 vs 0.192±0.055,s RAGE:0.244±0.103 vs 0.161±0.028);及CCC形成不良組AGEs及s RAGE(AGEs:0.370±0.090 vs 0.192±0.055,s RAGE:0.272±0.061 vs 0.161±0.028)的表達(dá)水平均明顯升高(P均0.05)。同樣,對于非糖尿病患者,與對照組相比,CCC形成良好組AGEs及s RAGE(AGEs:0.361±0.032 vs 0.167±0.021,s RAGE:0.235±0.061 vs0.133±0.013);及CCC形成不良組AGEs及s RAGE(AGEs:0.332±0.138 vs0.167±0.021,s RAGE:0.223±0.055 vs 0.133±0.013)的表達(dá)水平也明顯升高(P均0.05)。而CCC良好組與CCC形成不良組比較,糖尿病及非糖尿病患者的AGEs及s RAGE表達(dá)則有所不同,在糖尿病患者,CCC形成良好組AGEs及s RAGE表達(dá)有低于CCC形成不良組傾向(AGEs:0.312±0.018 vs 0.370±0.090,s RAGE:0.244±0.103 vs0.272±0.061),但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05);而在非糖尿病患者,CCC形成良好組AGEs及s RAGE表達(dá)有高于CCC形成不良組傾向(AGEs:0.361±0.032 vs0.332±0.138,s RAGE:0.235±0.061 vs 0.223±0.055),但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05)。3.單因素分析中,男性、高血壓患者、hs-CRP水平越高、頸動脈內(nèi)中膜厚度越厚、頸動脈斑塊大小、冠脈狹窄程度,在三組之間的比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);多因素Logistic分析:頸動脈斑塊大小、冠脈狹窄程度與側(cè)支循環(huán)形成相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P'0.05)。而年齡、吸煙史、糖尿病病史、MPV、脂蛋白a、LDL、膽固醇、甘油三酯水平、左房內(nèi)徑、室間隔厚度、左室后壁厚度、肺動脈高壓、LVEF值與CCC形成無明顯相關(guān)(P0.05)。【結(jié)論】1.在非糖尿病動物試驗(yàn)中,蛋白芯片顯示側(cè)支循環(huán)形成良好組s RAGE表達(dá)增高;2.本組資料顯示:在糖尿病及非糖尿病冠心病患者中,CCC形成良好組與CCC形成不良組血漿AGEs、s RAGE表達(dá)均顯著增高,提示AGEs、s RAGE可能與側(cè)支循環(huán)形成相關(guān);亞組分析顯示,在糖尿病患者中,血漿AGEs、s RAGE表達(dá)與CCC分級呈負(fù)相關(guān)關(guān)系傾向,而在非糖尿病患者中,AGEs、s RAGE表達(dá)與CCC分級呈正相關(guān)關(guān)系傾向,但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其機(jī)制不明,是否與樣本量較小有關(guān),有待進(jìn)一步研究;3.本組資料顯示:男性、高血壓、hs-CRP水平越高、頸動脈內(nèi)中膜厚度越厚、頸動脈斑塊大小、冠脈狹窄程度,與CCC形成密切相關(guān),而頸動脈斑塊大小、冠脈狹窄程度是CCC形成的獨(dú)立影響因素。4.CCC形成與冠脈狹窄程度有關(guān),說明CCC多見于嚴(yán)重冠心病患者中,血管狹窄越重,越易形成CCC。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R541.4

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

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本文編號：1295679